МР 2.3.2.2327-08 Методические рекомендации по организации производственного микробиологического контроля на предприятиях молочной промышленности (с атласом значимых микроорганизмов)

     6.3 Определение каталазной и оксидазной активности микроорганизмов

Тесты на каталазу и оксидазу проводят при идентификации микроорганизмов, в частности при контроле санитарно-гигиенического состояния воды.
     

    6.3.1 Определение каталазной активности микроорганизмов
     
     Сущность метода

Метод основан на способности каталазы, продуцируемой некоторыми микроорганизмами при росте на питательной среде, разлагать перекись водорода с выделением пузырьков газа.

Проведение анализа

Испытания проводят с охлажденной до комнатной температуры культурой, не допуская соприкосновения клеток с нагретой поверхностью и применяя обезжиренные стерильные пробирки, предметные стекла, пипетки.

Определение каталазной активности микроорганизмов, выросших на плотных питательных средах, проводят следующим образом. На колонию микроорганизмов, взятую с поверхности питательной среды или извлеченную из нее и помещенную на предметное стекло, после выдержки на воздухе в течение 30 мин пипеткой наносят каплю 3% раствора перекиси водорода.

Определение каталазной активности микроорганизмов, выросших на жидких и полужидких питательных средах, проводят следующим образом. Из посевов отбирают 2-3 см культуральной жидкости, переносят ее в пробирку и нейтрализуют раствором гидроокиси натрия или соляной кислоты.

1-2 капли нейтрализованной культуральной жидкости пипеткой переносят на предметное стекло и после выдержки на воздухе в течение 30 мин добавляют к ней каплю 3% раствора перекиси водорода.

Если в посевах обнаружены газообразующие микроорганизмы, то при определении их каталазной активности ставят контрольную пробу аналогично пробе на каталазу, но без добавления перекиси водорода. В данном случае газообразующие микроорганизмы относят к каталазоположительным при отсутствии пузырьков газа в контрольной пробе или при явно повышенном газообразовании в пробе с перекисью водорода по сравнению с контрольной пробой.

Обработка результатов

При появлении на стекле пузырьков газа через 30-60 с считают, что они образовались в результате разложения перекиси водорода каталазой, образуемой микроорганизмами (Приложение Г).

6.3.2 Определение оксидазной активности микроорганизмов
     
     Сущность метода

Метод основан на способности оксидазы, продуцируемой некоторыми микроорганизмами при росте на питательной среде, изменять цвет индикатора.

Подготовка к проведению анализа
     
     Реактивы для оксидазного теста
     
     Вариант 1

Используют 1% водный раствор тетраметил-п-фенилендиамингидрохлорида. Раствор готовят перед употреблением.

Вариант 2

30-40 мг а-нафтола растворяют в 2,5 см ректификованного этилового спирта, прибавляют 7,5 см дистиллированной воды и растворяют 40-60 мг диметил-п-фенилендиамина. Раствор готовят непосредственно перед определением.

Вариант 3

Используют готовые индикаторные системы "СИБ-оксидаза".

Проведение анализа

Полоску фильтровальной бумаги помещают в чистую чашку Петри и смачивают 2-3 каплями реактива для оксидазного теста. Готовые бумажные системы смачивают дистиллированной водой. Часть изолированной колонии стеклянной палочкой или платиновой петлей (металлическая петля из нихрома может дать ложноположительную реакцию) наносят штрихом на подготовленную фильтровальную бумагу. Реакция считается положительной, если в течение 1 мин появляется фиолетово-коричневое (вариант 1) или синее (варианты 2 и 3) окрашивание штриха.

Обработка результатов

Микроорганизмы, давшие положительную реакцию, считаются оксидазоположительными.