ГОСТ Р 53046-2008 Препараты ферментные. Методы определения ферментативной активности целлюлазы

     4 Метод определения ферментативной активности целлюлазы с использованием субстрата хроматографической бумаги

4.1 Характеристика метода

4.1.1 Метод основан на количественном определении восстанавливающих сахаров, образующихся в результате гидролиза целлюлозы хроматографической бумаги под действием ферментов целлюлолитического комплекса.

Метод используется при возникновении разногласий в качестве арбитражного.

4.1.2 За единицу целлюлолитической активности (1 ед. ЦлА) принято количество ферментов, которое катализирует гидролиз целлюлозы хроматографической бумаги с образованием 1 мкмоля восстанавливающих сахаров (в пересчете на глюкозу) за 1 ч при температуре 50 °С и рН 4,7.

4.1.3 Содержание восстанавливающих сахаров, образующихся в результате ферментативной реакции, определяют колориметрическим методом с использованием реактива динитросалициловой кислоты или калия железосинеродистого (красной кровяной соли, калия феррицианида, калия гексационоферрата) и рассчитывают по градуировочному графику, построенному для глюкозы. Диапазон измерений контролируемого показателя 0,5-25,0 ед. ЦлА.

4.2 Средства измерений, вспомогательное оборудование, реактивы

4.2.1 Для определения ферментативной активности целлюлазы используют следующие средства измерений и оборудование:

- фотоэлектроколориметр (ФЭК) или спектрофотометр (СФ) любого типа, которые обеспечивают измерения при длине волны 540 нм и погрешностью измерения коэффициента пропускания не более 1% (не более 0,01 D (ед. ОП));

- рН-метр любого типа для измерения в диапазоне от 0 до 14 рН, пределом допускаемой погрешности в эксплуатации ±0,1 ед. рН;

- магнитную мешалку любой марки, которая обеспечивает скорость вращения до 800 мин;

- ультратермостат или водяной термостат с точностью регулирования температуры ±1 °С;

- лабораторную центрифугу любого типа, которая обеспечивает скорость вращения не менее 7000 мин;

- весы лабораторные высокого или специального класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г и ценой поверочного деления 0,1 мг по ГОСТ 24104;

- секундомер механический с пределом измерений 60 мин с ценой деления 0,2 с;

- водяную баню любого типа, которая обеспечивает поддержание температуры (100±1) °С;

- таймер любого типа с погрешностью ±30 с;

- механическую мельницу, обеспечивающую размалывание исследуемого образца ферментного препарата до полного прохода пробы через сито;

- сито с размером отверстий 1,0 мм, сделанное из металлического проволочного тканого материала.

4.2.2 Для определения ферментативной активности целлюлазы используют следующие лабораторную посуду и материалы:

- колбы мерные 1(2)-50, 100, 200, 500,1000-2 по ГОСТ 1770;

- воронки ВФ-1(2)-60-ПОР 500 ТХС по ГОСТ 25336;

- пробирки П 1-14-120 ХС или П 1-16-150 ХС по ГОСТ 25336;

- пипетки по ГОСТ 29227;

- автоматические пипетки номинальной вместимостью от 0,1 до 1,0 см с наконечниками;

- колбы и стаканы (бюксы) СВ 19/9 и 24/10 по ГОСТ 25336;

- стаканы В-1-25, 50, 100, 150, 250, 600, 800, 1000 ТС по ГОСТ 25336;

- цилиндры 1 (2, 3, 4)-50 (100) по ГОСТ 1770;

- ступку и пестик фарфоровые по ГОСТ 9147.