МУК 4.2.581-96

     

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ

ПРОВЕДЕНИЕ САНИТАРНО-БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОГО АНАЛИЗА ПРОДОВОЛЬСТВЕННОГО СЫРЬЯ, ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТОВ, ВОДЫ И СМЫВОВ С ПОВЕРХНОСТЕЙ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОГО ЭКСПРЕСС-АНАЛИЗАТОРА

     

Дата введения: с момента утверждения

1. РАЗРАБОТАНЫ:

Центром государственного санитарно-эпидемиологического надзора Медицинского центра Управления делами Президента Российской Федерации: к.м.н. В.П.Тулупов, к.м.н. О.М.Чекмарев, к.м.н. С.В.Чанков, Н.Е.Тулянкина;

Центром государственного санитарно-эпидемиологического надзора Магаданской области: к.м.н. В.Р.Саухат, Т.А.Каплан, А.А.Гончаренко;

Фирмой "SYRUS SYSTEMS Ltd.": к.б.н. Т.Б.Макарова, к.м.н. С.В.Юров.

2. УТВЕРЖДЕНЫ И ВВЕДЕНЫ В ДЕЙСТВИЕ Первым заместителем Председателя Госкомсанэпиднадзора России - Заместителем Главного государственного санитарного врача Российской Федерации 29 октября 1996 г.

3. ВВЕДЕНЫ ВПЕРВЫЕ

1. Область применения

Методические указания предназначены для центров государственного санитарно-эпидемиологического надзора и других организаций, осуществляющих контроль за качеством сырья, продуктов питания, воды и смывов с поверхностей и имеющих в своем распоряжении бактериологический экспресс-анализатор "РЭБИТ.

2. Общие положения

Для успешного выполнения задач, стоящих перед службой санитарно-эпидемиологического надзора в рамках обеспечения санитарно-эпидемиологического благополучия, и экспрессного проведения бактериологических исследований пищевых продуктов, воды, фармпрепаратов, косметических изделий и других объектов окружающей среды необходимы современные автоматизированные экспресс-системы бактериологического анализа, позволяющие повысить качество, экспрессность и достоверность лабораторных исследований, разработать и внедрить новые методы микробиологического анализа.

Классический метод микробиологического анализа является длительным и трудоемким, зачастую по результатам метода можно давать лишь ретроспективную оценку микробиологической безопасности исследуемых объектов.

Применение бактериологического экспресс-анализатора "'РЭБИТ" - прибора принципиально новой конструкции для полностью автоматизированного обнаружения микробной контаминации и роста различных микроорганизмов - обеспечит гарантию качества и увеличит эффективность проводимых бактериологических исследований. Благодаря непрерывной регистрации изменения электрических параметров среды, меняющихся вследствие метаболизма микроорганизмов, и полностью автоматизированному процессу сбора и обработки данных, степень микробного загрязнения можно определить через несколько часов.

Принцип действия данного прибора основан на регистрации изменения импеданса (сопротивления) питательной среды прямым и непрямым путем. Рост микроорганизмов приводит к изменению концентрации ионов в питательной среде вследствие метаболизма, приводя, тем самым, к изменению сопротивления питательной среды в заданном интервале времени.

В практике отечественной микробиологии на сегодняшний день известны два прибора подобного типа - "БакТрак 4100" и "Бактометр", основанные также на измерении импеданса в процессе роста микроорганизмов. Отличительной особенностью прибора "РЭБИТ" является высокая стабильность поддержания температуры, развитое программное обеспечение в среде Windows, возможность использования отечественных питательных сред, многоразовые измерительные ячейки.

Прошедший аттестацию и имеющий Сертификат Госстандарта РФ N 1056 от 5 июля 1996 г., прибор "РЭБИТ" может быть использован как в практических бактериологических лабораториях центров Госсанэпиднадзора, так и в производственных лабораториях предприятий, выпускающих пищевую, молочную, косметическую, фармацевтическую и другую продукцию.

Настоящие Методические указания имеют целью способствовать внедрению в практику санитарно-эпидемиологической службы РФ современных, автоматизированных систем для ускоренного определения показателей микробиологической безопасности продовольственного сырья и пищевых продуктов, совершенствованию нормативно-технической документации.

Методические указания включают в себя:

определяемые с помощью прибора "РЭБИТ" микробиологические показатели по отдельным группам пищевых продуктов, воды, косметических изделий и других объектов;

протоколы исследований основных санитарно-значимых показателей (мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов - ОМЧ, Грам (-)-бактерий псевдомонад, энтеробактерий, колиформных бактерий, в т.ч. Е. coli, сальмонелл, анаэробных бактерий, дрожжей/плесеней, золотистого стафилококка;

приготовление питательных сред;

методы обработки измерительных ячеек;

приготовление измерительных ячеек для непрямого метода.

Нижеприведенные перечни определяемых микроорганизмов в различных продуктах отражают проводимые исследования объектов окружающей среды при использовании бактериологического экспресс-анализатора "РЭБИТ" и, по некоторым продуктам, не содержат всех контролируемых групп микроорганизмов, заложенных в "Медико-биологических требованиях N 5061-89" (например, в ряде продуктов детского питания контролируется количество Вас. cereus в 1 г и в большей массе продукта, чем отсутствие БГКП).

Методы отбора проб, транспортирования, приготовление разведений, используемое оборудование (за исключением специального оборудования, необходимого для работы на анализаторе "РЭБИТ), посуда и прочее излагаются в соответствующих ГОСТах, методических указаниях, инструкциях.

Порядок установки, запуска и работы на анализаторе "РЭБИТ", а также необходимые для анализа аксессуары определены в "Инструкции пользователя", предоставляемой фирмой "SYRUS SYSTEMS Ltd." при поставке оборудования.

3. Определяемые с помощью бактериологического экспресс-анализатора "РЭБИТ" микробиологические показатели по отдельным группам пищевых продуктов, воды и смывов

     

4. Протоколы исследований основных групп санитарно-значимых микроорганизмов с использованием бактериологического экспресс-анализатора РЭБИТ"

Процедура проведения анализа с использованием бактериологического анализатора "РЭБИТ":

     4.1. Общие положения

4.1.1. Приготовление образца

4.1.1.1. Жидкие образцы, такие как вода, молоко, фруктовые соки, не требуют специальной подготовки, хотя могут быть сделаны разведения, описанные ниже. Твердые образцы требуют гомогенизации и разведения.

4.1.1.2. Чтобы приготовить твердый образец в гомогенном виде, необходимо: сделать навеску 10 или 25 г образца в стерильном пакете для гомогенизатора типа Stomacher. Добавьте стерильный разбавитель (обычно Maximum Recovery Diluent - MRD или физиологический раствор, ЗФР) так, чтобы общий вес образца был 100 или 250 г (разведение 1:10) и поместите пакет с образцом и разводящей жидкостью в гомогенизатор. Гомогенизируйте образец.

4.1.1.3. Небольшое количество образца может быть подвергнуто разведению при помещении 1 г образца в стерильные стандартные флаконы с 9 мл стерильной разводящей жидкости.

Если необходимо дальнейшее разведение, то оно может быть сделано серийным титрованием при пипетировании 1 мл из предварительного разведения в 9 мл стерильного разбавителя (обычно MDR) и перемешиванием (например, с помощью Vortex Mixer).

4.1.2. Исследования на анализаторе "РЭБИТ"

4.1.2.1. Два типа исследований возможно использовать на системе "РЭБИТ":

прямой метод, когда питательная среда и образец добавляются непосредственно в стерильную измерительную ячейку с рабочим объемом 2-10 мл;

непрямой метод, когда культуральная среда и образец добавляются в стерильную боросиликатную стеклянную пробирку с рабочим объемом до 5 мл. Стеклянная пробирка затем помещается в измерительную ячейку, которая затем плотно закрывается.

4.1.2.2. Приготовление ячеек для непрямого метода описано в приложении.

4.1.2.3. При проведении исследований на анализаторе "РЭБИТ" рекомендуется в качестве положительного контроля включать референс-штаммы микроорганизмов. Данные микроорганизмы должны быть выращены в бульонной культуре и серийно разведены в MRD до 10. 1 мл из наибольшего разведения добавляется в измерительную ячейку с питательной средой и инкубируется в модуле анализатора "РЭБИТ" с исследуемыми образцами.

4.1.2.4. Каждое исследование на анализаторе "РЭБИТ" должно включать контрольную ячейку со стерильной питательной средой (отрицательный контроль).

4.1.2.5. После установления в модули анализатора "РЭБИТ" ячеек с исследуемыми образцами, положительным и отрицательным контролями, ячейки инкубируются в модулях в соответствии с заданным Кодом Исследования, описанным ниже.

4.1.2.6. Типичные Коды Исследования представлены в п.4.1.2.7. и привязаны к специфическим видам исследования, описанным ниже.

4.1.2.7. Типичные Коды Исследования для системы РЭБИТ

Таблица 1