ГОСТ Р 52831-2007 (ИСО 14674:2005) Молоко и сухое молоко. Определение содержания афлатоксина М(1). Очистка с помощью иммуноаффинной хроматографии и определение с помощью тонкослойной хроматографии

     5 Реактивы

При отсутствии специальных указаний используют реактивы только признанных аналитических марок.

Вода должна соответствовать требованиям квалификации не ниже 3-й степени чистоты согласно ГОСТ Р 52501. Вода не должна содержать органические примеси.

5.1 Чистые растворители

5.1.1 Хлороформ по ГОСТ 20015.

5.1.2 Ацетонитрил [1].

5.1.3 Диэтиловый эфир по ГОСТ 22300.

5.1.4 Метанол по ГОСТ 6995.

5.1.5 Толуол по ГОСТ 5789.

5.1.6 Ацетон по ГОСТ 2603.

5.1.7 Изопропанол [2].

5.2 Смесь ацетонитрил/метанол, в объемном соотношении 3:2

Смесь приготовляют, добавляя 30 см ацетонитрила (см. 5.1.2) к 20 см метанола (см. 5.1.4), и перемешивают.

5.3 Смесь толуол/ацетонитрил, в объемном соотношении 9:1

Смесь приготовляют, добавляя 9 см толуола (см. 5.1.5) к 1 см ацетонитрила (см. 5.1.2), и перемешивают. Этот раствор используют для повторного суспендирования стандартных растворов афлатоксина М (см. 5.5) и выпаренного элюата перед проведением анализа методом тонкослойной хроматографии.

5.4 Растворители для проведения тонкослойной хроматографии

5.4.1 Раствор для однонаправленной тонкослойной хроматографии

Приготовляют 100 см раствора для однонаправленной тонкослойной хроматографии путем добавления 4 см метанола (см. 5.1.4) и 1 см воды к 95 см диэтилового эфира (см. 5.1.3) и тщательно перемешивают (объемное отношение 95:4:1).

5.4.2 Раствор для двунаправленной тонкослойной хроматографии

Приготовляют 100 см раствора для двунаправленной тонкослойной хроматографии путем добавления 10 см ацетона (см. 5.1.6) и 3 см изопропанола (см. 5.1.7) к 87 см хлороформа (см. 5.1.1) и тщательно перемешивают (объемное отношение 87:10:3).

5.5 Стандартный раствор афлатоксина М

5.5.1 Основной стандартный раствор афлатоксина М

Приготовляют основной стандартный раствор афлатоксина М с номинальной концентрацией афлатоксина М 10 мкг/см (см. 5.1.1) путем повторного суспендирования 10 мкг лиофилизированной пленки афлатоксина М в 1 см хлороформа.

Согласно протоколу АОАС [3] концентрацию основного стандартного раствора афлатоксина М определяют путем измерения его оптической плотности при длине волны максимального поглощения в диапазоне длин волн 200-400 нм относительно хлороформа (см. 5.1.1), применяемого в качестве образца сравнения.

Контролируют чистоту афлатоксина М, регистрируя спектр в интервале 200-400 нм. Измеряют оптическую плотность () при длине волны максимума поглощения (), близкой к 365 нм.

Вычисляют массовую концентрацию , мкг/см, по формуле

,                                                           (1)