МУ 3184-84

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
ПО ОБНАРУЖЕНИЮ, ИДЕНТИФИКАЦИИ И ОПРЕДЕЛЕНИЮ СОДЕРЖАНИЯ Т-2 ТОКСИНА В ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ И ПРОДОВОЛЬСТВЕННОМ СЫРЬЕ

УТВЕРЖДАЮ Заместитель Главного государственного санитарного врача СССР Ковшило В.Е. 29 декабря 1984 г. N 3184-84

Методические указания предназначены для лабораторий санитарно-эпидемиологических станций и институтов гигиенического профиля при контроле за загрязнением пищевых продуктов Т-2 токсином.

Разработаны в лаборатории энзимологии питания Института питания АМН СССР (рук. лаборатории доктор медицинских наук Тутельян В.А., старший научный сотрудник, кандидат химических наук Эллер К.И., младший научный сотрудник Соболев B.C.)

Т-2 токсин - 8-(3-метилбутирилокси)-4,15-диацетокси-12,13-эпокситрихотец-9-ен-3-ол - микотоксин, продуцируемый различными видами микроскопических грибов рода Fusarium. Наиболее распространенными продуцентами Т-2 токсина являются грибы Fusarium sporotrichiella, которые рассматриваются как этиологический фактор тяжелых алиментарных токсикозов человека и сельскохозяйственных животных.

Т-2 токсин является одним из наиболее токсичных представителей группы трихотеценовых микотоксинов, токсическое действие которых характеризуется поражением кроветворных и иммунокомпетентных органов, развитием геморрагического синдрома, лейкопенией, анемией, поражением функций желудочно-кишечного тракта. Т-2 токсин обладает высокой острой токсичностью (LD для различных видов млекопитающих от 3 до 10 мг/кг массы тела).

Опасность, которую трихотеценовые микотоксины могут представлять для здоровья человека, связана с повсеместной распространенностью грибов-продуцентов, преимущественно поражающих зерно и зернопродукты, и их высокой токсичностью. В связи с этим установлена ПДК на содержание Т-2 токсина в пищевых продуктах на уровне 0,1 мг/кг.

Т-2 токсин (СНО) - белое кристаллическое вещество молекулярной массой 466, не имеет максимумов поглощения в УФ-спектре при длине волны более 210 нм, не обладает флуоресценцией. Т-2 токсин хорошо растворим в бензоле, ацетоне, этилацетате, спиртах, практически нерастворим в воде и гексане. Температура плавления Т-2 токсина 151-152°С.

Для обнаружения Т-2 токсина при тонкослойной хроматографии (ТСХ) используется его свойство флуоресцировать в длинноволновом УФ-свете (365 нм) после обработки спиртовым раствором серной кислоты с последующим нагреванием при 100-105°С. Этим методом можно обнаружить до 100 нг Т-2 токсина в пятне. Наиболее достоверным и высокочувствительным методом обнаружения и идентификации Т-2 токсина является газожидкостная хроматография (ГЖХ) его летучих производных с использованием детектора электронного захвата (ДЭЗ), который позволяет обнаруживать до 1-2 нг токсина в пике.

В основу предлагаемого метода определения Т-2 токсина положена ГЖХ трифторацетильного (ТФА) производного этого токсина с использованием ДЭЗ.

Предел обнаружения Т-2 токсина при ГЖХ с использованием ДЭЗ - до 1-2 нг во вколе*, общий предел обнаружения метода - до 50 мкг/кг (0,05 мг/кг), относительное стандартное отклонение - 0,2-0,25.

________________

* Текст документа соответствует оригиналу. - Примечание изготовителя базы данных.

Продолжительность анализа - 4 часа.

Метод включает следующие этапы:

- экстракцию Т-2 токсина из образца смесью ацетонитрил-4% водный раствор хлористого калия (9:1);

- очистку экстракта с помощью жидкость-жидкостной экстракции гексаном и бензолом и препаративной ТСХ;

- разделение, идентификацию и количественное определение Т-2 токсина в виде ТФА производного с помощью ГЖХ с использованием ДЭЗ.

Оборудование и материалы

1. Аппарат для встряхивания проб типа АВУ-6с по ТУ 64-1-2451-78*.

________________

* Документ в информационных продуктах не содержится. За информацией о документе Вы можете обратиться в Службу поддержки пользователей. - Примечание изготовителя базы данных.

2. Ротационный испаритель с ловушкой по ТУ 25-11-917-76 (завод "Химлабприбор").

3. Кофемолка ЭКМ-ЗУ.

4. Хроматограф газовый серии "Цвет-100" с детектором постоянной скорости рекомбинации (ДЭЗ); колонка стеклянная 1 м 0,4 см с жидкой фазой ov-1, или ov-101 на Хроматоне N-супер ("Лахема", ЧССР); в качестве самописца - регистрирующий потенциометр КСП-4 модификации 41.130.90.909 или 41.140.90.910 с диапазоном измерений 1 мВ; газ-носитель и продувочный газ - азот особой чистоты.

5. Прибор для флуоресцентного анализа витаминов в растворе (модель 833) ТУ 64-1-1080-78 или диагностическая лампа ОЛД-41.

6. Магнитная мешалка любого типа.

7. Микрошприц МШ-10 на 10 мкл, микрошприц МШ-1 или "Газохром-101" на 1 мкл.

8. Камеры для ТСХ с притертыми крышками (например, стеклянные четырехугольные сосуды 195195200 завода "Дружная горка").

9. Пластины для ТСХ "Силуфол" размером 20х20 см (ЧССР).

10. Воронки делительные ВД 2-250 по ГОСТ 8613-75.     

11. Колбы плоскодонные конические на 250 мл с НШ 29, тип КнКШ 250-29/32 по ГОСТ 10394-72.

12. Колбы круглодонные на 250 мл с НШ 29, тип КНШ-250-29/32 по ГОСТ 10394-72.

13. Колбы грушевидные на 50 мл с НШ 14,5, тип ГрКШ-50-14/23 по ГОСТ 10394-72.