МУ 2.3.2.1935-04 Порядок и организация контроля за пищевой продукцией, полученной из/или с использованием генетически модифицированных микроорганизмов и микроорганизмов, имеющих генетически модифицированные аналоги
9. Алгоритм проведения лабораторных исследований образцов
пищевой продукции
При проведении лабораторных исследований предпринимаются 3 варианта действий, исходя из информации о принадлежности использованных микроорганизмов к МГМА или к ГММ.
9.1. Алгоритм лабораторного исследования образцов пищевой продукции, содержащей живые МГМА, предусматривает следующее:
9.1.1. исследованиям подлежат образцы пищевых продуктов и сырья I и II групп (п.4.15 и прилож.1 данного документа), полученных с использованием или содержащих живые МГМА; порядок действий при проведении исследований отражен в табл.1.
Таблица 1
Испытуемые образцы | Содержание исследований | Результат исследований | Решение |
Продукты I и II групп (прилож.1) | 1. Определение количества жизнеспособных МГМА технологической микрофлоры в 1 г продукта | 1. Количество микроорганизмов в продукте соответствует нормируемому или заявляемому изготовителем уровню | Положительное заключение по результатам исследований |
2. Подтверждение родовой и/или видовой принадлежности микроорганизма | 2. Подтверждена родовая или видовая принадлежность микроорганизма согласно представленной заявителем документации | ||
3. Выявление в образце пищевого продукта ДНК маркерных векторных генов (например, генов антибиотикорезистентности) | 3. Отсутствует ДНК маркерных генов, плазмидная ДНК | ||
4. Анализ дополнительных показателей качества и безопасности пищевого продукта (согласно п.п.4.8б и 4.9) | 4. Не выявлено любых признаков неблагоприятных для потребителей | ||
Продукты I и II групп (прилож.1) | 1. Определение количества жизнеспособных МГМА технологической микрофлоры в 1 г продукта | 1. Количество микроорганизмов в продукте не соответствует нормируемому или заявляемому изготовителем уровню | Отрицательное заключение по результатам исследований |
2. Подтверждение родовой и/или видовой принадлежности микроорганизма | 2. Не подтверждена родовая или видовая принадлежность микроорганизма | ||
3. Выявление в образце пищевого продукта ДНК маркерных векторных генов (например, генов антибиотикорезистентности) | 3. Обнаружена ДНК маркерных генов | ||
4. Анализ дополнительных показателей качества и безопасности пищевого продукта (согласно п.п.4.8б и 4.9) | 4. Обнаружены факторы (маркеры) патогенности, плазмидная ДНК или несоответствие регламентам СанПиН 2.3.2.1078-01 |
9.2. Алгоритм лабораторного исследования образцов пищевой продукции, содержащей живые ГММ.
9.2.1. Исследованиям подлежат образцы пищевых продуктов и сырья I и II групп (п.4.15 и прилож.1 данного документа), полученных с использованием или содержащих живые ГММ.
9.2.2. Определение количества жизнеспособных ГММ технологической микрофлоры в 1 г продукта, если выявленные количества не ниже нормируемого или заявляемого изготовителем в НТД уровня, то перейти к п.9.2.3.
9.2.3. Выявление и идентификация живых ГММ в исследуемом образце микробиологическими методами. Если выявлены ГММ, не соответствующие декларации изготовителя, перейти к п.9.2.13, если выявлены ГММ, соответствующие указанным в технической документации на продукт и паспорту, прилагаемому к справке о депонировании*, перейти к п.9.2.4.
________________
* В случае необходимости параллельно с испытуемым штаммом ГММ из образца продукции исследуется референс-штамм из депозитария (коллекции культур).
9.2.4. Необходимо убедиться, что микроорганизм-донор целевого гена и микроорганизм-реципиент этого гена являются хорошо изученными, разрешенными и давно используемыми в пищевой промышленности: в таком случае - перейти к п.9.2.4, если не являются - перейти к п.9.2.13.
9.2.5. Подтверждение родовой и видовой принадлежности микроорганизма с помощью ПЦР-анализа генома ГММ: при положительном результате перейти к п.9.2.6, при отрицательном - к п.9.2.13.
9.2.6. Выявление маркерных генов (векторных последовательностей, селективных маркеров, последовательностей "ori", ауксотрофных последовательностей (см. МУК 4.2.1830-04). В случае выявления только заявленных маркерных последовательностей перейти к п.9.2.7, в случае выявления не заявленных маркерных последовательностей - перейти к п.9.2.13.
9.2.7. Выявление генов антибиотикорезистентности, кодирующих устойчивость к антибиотикам, имеющим важное клиническое значение в медицине и ветеринарии: если указанные гены выявлены, то перейти к п.9.2.13, если не выявлены - перейти к п.9.2.8.
9.2.8. Выявление целевого гена методом ПЦР с последующим подтверждением нуклеотидного состава ампликона с помощью рестрикционного или гибридизационного анализа: если целевой ген выявлен, то перейти к п.9.2.12, если не выявлен - перейти к п.9.2.13.
9.2.9. Определение нуклеотидной последовательности целевого гена методом секвенирования и сравнение с заявленной последовательностью нуклеотидов: если результат положительный, перейти к п.9.2.12, если отрицательный, перейти к п.9.2.13.
9.2.10. Подтверждение идентичности продуктов экспрессии целевого гена заявленным на уровне и РНК (методом ОТ-ПЦР) или методами электрофореза в ПААГ и иммуноблотинга: если результат положительный, перейти к п.9.2.12, если отрицательный, перейти к п.9.2.13.
9.2.11. Анализ дополнительных показателей качества и безопасности пищевого продукта (в соответствии с п.п.4.8б и 4.9) на соответствие СанПиН 2.3.2.1078-01 "Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов": если продукт соответствует требованиям СанПиН 2.3.2.1078-01 "Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов", перейти к п.9.2.12, если не соответствует - к п.9.2.13.
9.2.12. Выдается положительное заключение, согласно которому образец продукта оценивается как соответствующий СанПиН 2.3.2.1078-01 "Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов" в части требований к маркировке и информации.
9.2.13. Выдается отрицательное заключение, согласно которому образец продукта не соответствует регламентам СанПиН 2.3.2.1078-01 "Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов", дальнейшие исследования прекращаются.
9.3. Алгоритм лабораторного исследования образцов пищевой продукции, не содержащих жизнеспособных ГММ и МГМА.
9.3.1. Исследованиям подлежат образцы пищевых продуктов и сырья II и III групп (п.4.15 и прилож.1), содержащих нежизнеспособные ГММ (МГМА) или освобожденных от технологической микрофлоры.