ГОСТ Р 51940-2002

Группа Н59

     

 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ


СОКИ ФРУКТОВЫЕ И ОВОЩНЫЕ

Метод определения D-яблочной кислоты

Fruit and vegetable juices. Method for determination of D-malic acid content

ОКС 67.160.20

ОКСТУ 9109

Дата введения 2003-10-01

Предисловие

1 РАЗРАБОТАН Московским государственным университетом пищевых производств

ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 335 "Методы испытаний агропромышленной продукции на безопасность"

2 ПРИНЯТ И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Госстандарта России от 25 сентября 2002 г. N 348-ст

3 Настоящий стандарт за исключением раздела 2 и пунктов 3.2, 5.3-5.5, 6.1, 6.5 и 6.6 представляют собой аутентичный текст национального стандарта ФРГ ДИН ЕН 12138-97* "Фруктовые и овощные соки. Ферментативное определение D-яблочной кислоты. Спектрофотометрическое определение НАД"

 _______________

* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей. - Примечание изготовителя базы данных.

4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

5 ПЕРЕИЗДАНИЕ. Июль 2010 г.

     1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется на фруктовые и овощные соки, нектары и сокосодержащие напитки и устанавливает метод определения массовой концентрации D-яблочной кислоты.

     2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 3769-78 Реактивы. Аммоний сернокислый. Технические условия

ГОСТ 4328-77 Реактивы. Натрия гидроокись. Технические условия

ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 9262-77 Реактивы. Кальция гидроокись. Технические условия

ГОСТ 24104-88* Весы лабораторные общего назначения и образцовые. Общие технические условия

__________________

* С 1 июля 2002 г. действует ГОСТ 24104-2001. На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 53228-2008.

ГОСТ 24363-80 Реактивы. Калия гидроокись. Технические условия

ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

ГОСТ Р ИСО 5725-2-2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений

ГОСТ Р 51652-2000 Спирт этиловый ректификованный из пищевого сырья. Технические условия

     3 Определение, обозначения и сокращения

3.1 В настоящем стандарте применяют следующий термин с соответствующим определением:

массовая концентрация D-яблочной кислоты во фруктовых и овощных соках, нектарах и сокосодержащих напитках: Массовая концентрация D-яблочной кислоты, определенная в соответствии с настоящим стандартом и выраженная в граммах на кубический дециметр.

3.2 В настоящем стандарте применяют следующие обозначения и сокращения:

НАД - -никотинамидадениндинуклеотид;

НАДН - -никотинамидадениндинуклеотид, восстановленная форма;

D-МДГ - D-малатдегидрогеназа;

Е - международная единица, определяющая количество (активность) фермента, который служит катализатором для превращения 1 мкмоля вещества в минуту при 25 °С.

     4 Сущность метода

Метод основан на ферментативном преобразовании [1,2] D-яблочной кислоты в оксалоацетат под действием НАД в присутствии D-МДГ и спектрофотометрическом измерении массовой концентрации образовавшегося НАДН, эквивалентного массовой концентрации D-яблочной кислоты в пробе. Оксалоацетат в конце реакции распадается на пируват и углекислый газ.

В ходе анализа протекает следующая ферментативная реакция:

                         (1)

В связи с тем, что фермент D-МДГ не обладает абсолютной специфичностью, при испытаниях проб, содержащих наряду с D-яблочной L-винную кислоту, для связывания последней воздействуют гидроокисью кальция и этиловым спиртом.

     5 Реактивы

5.1 Общие требования

При проведении анализа используют реактивы х.ч., ч.д.а. и дистиллированную воду по ГОСТ 6709.

Препараты НАД должны содержать не менее 90% основного вещества.

Допускается использовать имеющиеся в продаже готовые наборы реактивов для определения D-яблочной кислоты и отдельные реактивы при условии, что качество реактивов не ниже указанного в настоящем стандарте.

5.2 Стандартный набор состоит из трех реактивов.

5.2.1 Реактив 1 - HEPES-буфер (4- (2-гидроксиэтил)-1-пиперазин-этансульфоновая кислота) объемом 30 см и активной кислотностью 9,0 рН, содержащий стабилизаторы [3].

5.2.2 Раствор реактива 2 - НАД

Флакон, содержащий 0,21 г лиофильно высушенного НАД [3], растворяют в 4 см дистиллированной воды.

5.2.3 Раствор реактива 3 - D-МДГ удельной активностью около 13 Е/см      

Одну из трех содержащихся в наборе порций лиофильно высушенной D-МДГ [3] растворяют в 0,6 см дистиллированной воды.

5.3 Кальция гидроокись по ГОСТ 9262.

5.4 Спирт этиловый по ГОСТ Р 51652 массовой долей основного вещества 96%.

5.5 Калия гидроокись по ГОСТ 24363.

     6 Аппаратура