ГОСТ Р 51259-99
(ДИН 10344-82)
Группа Н19
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
МОЛОКО И МОЛОЧНЫЕ ПРОДУКТЫ
Метод определения лактозы и галактозы
Milk and milk products. Method for determination of lactose and galactose content
ОКС 67.100.10
ОКСТУ 9109
Дата введения 2000-01-01
Предисловие
1 РАЗРАБОТАН Московским государственным университетом пищевых производств
ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 335 "Методы испытаний агропромышленной продукции на безопасность"
2 ПРИНЯТ И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Госстандарта России от 12 апреля 1999 г. N 121
3 Настоящий стандарт представляет собой аутентичный текст национального стандарта ФРГ ДИН 10344-82 "Молоко и молочные продукты. Ферментативное определение лактозы и галактозы" с дополнительными требованиями, отражающими потребности народного хозяйства (разделы 2, 3, 4, 5, 6 и 7)
4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
5 ПЕРЕИЗДАНИЕ. Август 2009 г.
Настоящий стандарт распространяется на молоко и молочные продукты и устанавливает метод определения массовых долей лактозы и галактозы в присутствии других сахаров.
В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:
ГОСТ 2493-75 Реактивы. Калий фосфорнокислый двузамещенный 3-водный. Технические условия
ГОСТ 3652-69 Реактивы. Кислота лимонная моногидрат и безводная. Технические условия
ГОСТ 3769-78 Реактивы. Аммоний сернокислый. Технические условия
ГОСТ 4174-77 Реактивы. Цинк сернокислый 7-водный. Технические условия
ГОСТ 4204-77 Реактивы. Кислота серная. Технические условия
ГОСТ 4328-77 Реактивы. Натрия гидроокись. Технические условия
ГОСТ 4523-77 Реактивы. Магний сернокислый 7-водный. Технические условия
ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия
ГОСТ 26809-86 Молоко и молочные продукты. Правила приемки, методы отбора и подготовки проб к анализу
3.1 В настоящем стандарте применяют следующий термин с соответствующим определением:
массовые доли лактозы и галактозы в молоке и молочных продуктах: Массовые доли лактозы и галактозы, определенные раздельно в соответствии с настоящим стандартом и выраженные в г/100 г.
3.2 В настоящем стандарте применяют следующие обозначения и сокращения:
НАД - -никотинамидадениндинуклеотид;
НАДН - -никотинамидадениндинуклеотид (восстановленная форма);
ГЗ - -галактозидаза;
ГДГ - -галактозодегидрогеназа;
Е - международная единица, определяющая количество (активность) фермента, которое служит катализатором для превращения при 25 °С 1 мкмоля вещества в минуту.
Метод определения галактозы основан на окислении галактозы, содержащейся в освобожденном от жира и белка водном экстракте пробы молока или молочных продуктов, под действием НАД в присутствии фермента ГДГ и фотометрическом измерении массовой доли образовавшегося НАДН, эквивалентной массовой доле галактозы в пробе (свободная галактоза).
Метод определения лактозы основан на гидролизе лактозы, содержащейся в освобожденном от жира и белка водном экстракте пробы молока или молочных продуктов, в присутствии ГЗ до глюкозы и галактозы, окислении имеющейся в пробе галактозы (свободная галактоза плюс образовавшаяся при гидролизе лактозы) под действием НАД в присутствии фермента ГДГ и фотометрическом измерении массовой доли образовавшегося НАДН, эквивалентного массовой доле галактозы, и расчете массовой доли лактозы по разности оптических плотностей данного раствора и раствора, используемого при определении свободной галактозы.
При проведении анализа используют химически чистые или чистые для анализа реактивы.
Вода, используемая для приготовления растворов ферментов, должна быть бидистиллированной.
Вода, используемая для приготовления растворов химических реагентов и подготовки проб, должна быть дистиллированной по ГОСТ 6709 или деминерализованной.
Допускается использовать имеющиеся в продаже готовые наборы реактивов для определения лактозы и галактозы при условии соответствия их качества требованиям настоящего стандарта.
5.1 Раствор сернокислого цинка
30 г сернокислого цинка по ГОСТ 4174 () растворяют в 100 см дистиллированной воды. Раствор хранят при комнатной температуре 12 мес.
5.2 Раствор гексациано-(II)-феррата калия
15 г гексациано-(II)-феррата калия () растворяют в 100 см дистиллированной воды. Раствор хранят при температуре 4 °С 1 мес.
5.3 Гидроокись натрия по ГОСТ 4328, раствор молярной концентрации 0,25 моль/дм.
5.4 Цитратный буферный раствор
2,8 г тринатрийцитрата дигидрата (), 0,625 г сернокислого магния по ГОСТ 4523 () и 0,042 г моногидрата лимонной кислоты по ГОСТ 3652 () растворяют в 40 см дистиллированной воды. Активную кислотность раствора доводят до 6,6 рН несколькими каплями раствора серной кислоты по ГОСТ 4204 молярной концентрации 2 моль/дм или раствора гидроокиси натрия по ГОСТ 4328 молярной концентрации 0,1 моль/дм. Объем раствора доводят дистиллированной водой до 50 см. Буферный раствор устойчив при температуре 4 °С 3 мес.
5.5 Буферный раствор дифосфата калия
8,3 г дифосфата калия по ГОСТ 2493 () растворяют в 40 см дистиллированной воды. Активную кислотность раствора доводят до 8,6 рН раствором серной кислоты по ГОСТ 4204 молярной концентрации 2 моль/дм. Объем раствора доводят дистиллированной водой до 50 см. Буферный раствор устойчив при температуре 4 °С 2 мес.
5.6 Раствор НАД
0,035 г НАД растворяют в 7 см цитратного буфера по 5.4. Раствор устойчив при температуре 4 °С три недели.
5.7 Суспензия фермента ГЗ
Сухой лиофилизат -галактозидазы из Е. coli массой 0,005 г и активностью 150 Е суспендируют в 1 см раствора аммония сернокислого по ГОСТ 3769 молярной концентрации 2,2 моль/дм. Суспензия устойчива при температуре 4 °С 12 мес.
5.8 Суспензия фермента ГДГ
Сухой лиофилизат -галактозодегидрогеназы из Pseudomonas fluorescens массой 0,005 г и активностью 25 Е смешивают с 1 см раствора аммония сернокислого по ГОСТ 3769 молярной концентрации 2,2 моль/дм. Суспензия устойчива при температуре 4 °С 12 мес.
Обычная лабораторная аппаратура, а также указанная в 6.1-6.7.
6.1 Весы лабораторные общего назначения с наибольшим пределом взвешивания 20 г и допускаемой погрешностью ±0,0001 г.
6.2 Дозаторы пипеточные объемами доз 100, 50 и 25 см и относительной погрешностью дозирования ±1% [1]* или пипетки градуированные номинальной вместимостью 2,0; 1,0; 0,5; 0,2; 0,1 и 0,02 см и допускаемой относительной погрешностью ±1%.
_______________
* См. раздел Библиография. - Примечание изготовителя базы данных.
6.3 Колба мерная номинальной вместимостью 100 см и допускаемой относительной погрешностью ±0,2%.
6.4 Фильтры гофрированные бумажные диаметром 15 см по ГОСТ 12026.
6.5 Кюветы фотометрические из оптического стекла или пластмассы толщиной поглощающего слоя 1 см для измерений при длинах волн 334, 340 или 365 нм.
6.6 Шпатели пластиковые или палочки стеклянные оплавленные длиной от 10 до 15 см для перемешивания содержимого кюветы при проведении фотометрических измерений.
6.7 Спектрофотометр или фотометр фотоэлектрический, позволяющий проводить измерения при длинах волн 334, 340 или 365 нм, допускаемой абсолютной погрешностью измерений коэффициента пропускания ±1%.
6.8 Бумага индикаторная универсальная для интервала измерений активной кислотности от 1 до 10 рН.
Допускается использовать другие средства измерений с метрологическими характеристиками и лабораторное оборудование с техническими характеристиками, не уступающими перечисленным выше.
Отбор проб - по ГОСТ 26809.
8.1 Перед испытанием пробу хорошо перемешивают.
8.2 Пробу продукта массой 1,0000 г количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 см.
Пастообразные пробы предварительно разбавляют небольшим количеством дистиллированной воды и затем количественно переносят в мерную колбу.
В колбу добавляют 50 см дистиллированной воды. Содержимое колбы хорошо перемешивают.