ГОСТ Р 51278-99 (ИСО 7698-90) Зерновые, бобовые и продукты их переработки. Определение количества бактерий, дрожжевых и плесневых грибов

    5 Разбавитель, питательные среды и другие продукты

5.1 Основные компоненты

Чтобы обеспечить воспроизводимость результатов, рекомендуется использовать для приготовления разбавителя и питательных сред основные обезвоженные компоненты или полностью обезвоженные среды. Также могут быть использованы коммерческие готовые реактивы. При этом необходимо строго соблюдать инструкцию изготовителя.

Используемые химикаты должны иметь такую степень чистоты, которая пригодна для анализа.

Используемая вода должна быть дистиллированной или деионизированной. Эта вода должна быть свободна от таких веществ, которые могли бы сдерживать рост микроорганизмов (бактерий, дрожжевых и плесневых грибов) в условиях проведения этого анализа.

Если разбавитель и питательные среды не используют тотчас же после изготовления, то их должны, если нет особых указаний, хранить в темном месте при температуре от 0 до 5 °С не более одного месяца, в условиях, не оказывающих влияния на изменение их состава.

5.2 Разбавитель

Раствор пептона в растворе хлорида натрия должен соответствовать ГОСТ 26972.

Примечание - Для того, чтобы повысить гомогенность споровых суспензий, можно добавить такое поверхностно-активное средство, как сорбитовый эфир олеиновой кислоты (фирменное название Твин 80) в пропорции 0,033 г на один литр разбавителя.

5.3 Питательные среды

5.3.1 Агаризованная среда для подсчета количества бактерий

Состав: триптон* - 5,0 г; обезвоженный дрожжевой экстракт - 2,5 г; безводная глюкоза - 1,0 г; агар - от 9 до 18 г**; вода - 1000 см.

_________________

* Это название в настоящее время применяется только некоторыми изготовителями сред. Может использоваться любой другой продукт расщепления, который дает такие же результаты.

** В соответствии с инструкциями фирмы-изготовителя.

Примечание - Если требуется предотвратить развитие дрожжевых грибов, к питательной среде могут быть добавлены ингибиторные средства, такие как актидион (циклогексимид) или натамицин (пимарицин) в количестве 0,1 г/дм.

Приготовление

Растворяют компоненты или полностью обезвоженную среду в воде при кипячении. В случае необходимости регулируют показатель рН таким образом, чтобы после стерилизации он составил 7,0 при 25 °С.

Разливают эту среду в пробирки согласно 6.9 по 15 см на одну пробирку, или в колбы, или сосуды (6.9) подходящей емкости таким образом, чтобы среда занимала приблизительно половину объема такой колбы или сосуда.

Стерилизуют эту среду в автоклаве согласно 6.1 при температуре (121±1) °С в течение 20 мин.

Если приготовленную среду используют сразу, то ее охлаждают перед использованием в водяной бане согласно 6.7 при температуре (45±0,5) °С.

Если приготовленную среду не используют сразу после ее приготовления, то перед началом микробиологических анализов, чтобы избежать задержек при разливе агаризованной среды, ее следует расплавить в кипящей водяной бане, а затем охладить перед использованием в водяной бане согласно 6.7 при температуре (45±0,5) °С.

5.3.2 Агаризованная среда для подсчета количества дрожжевых и плесневых грибов (агаризованная среда с дрожжевым экстрактом, глюкозой и хлорамфениколом)

Состав: дрожжевой экстракт - 5,0 г; глюкоза (CHO) - 20 г; хлорамфеникол (СНСl NO) - 0,1 г; агар - от 9 до 18 г*; вода - 1000 см.

_________________

* В соответствии с инструкциями фирмы-изготовителя.

Приготовление агаризованной среды

Растворяют компоненты в кипящей воде. Если необходимо, регулируют рН таким образом, чтобы после стерилизации он составлял 6,6 при 25 °С.