ГОСТ Р 51278-99
(ИСО 7698-90)

Группа Н39

     
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ЗЕРНОВЫЕ, БОБОВЫЕ И ПРОДУКТЫ ИХ ПЕРЕРАБОТКИ

Определение количества бактерий, дрожжевых и плесневых грибов

Cereals, pulses and derived products.

Enumeration of bacteria, yeasts and moulds

ОКС 07.100.30

ОКСТУ 9109

Дата введения 2000-01-01

Предисловие

1 РАЗРАБОТАН Всероссийским научно-исследовательским институтом зерна и продуктов его переработки (ВНИИЗ)

ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 2 "Зерно, продукты его переработки и маслосемена"

2 ПРИНЯТ И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Госстандарта России от 13 мая 1999 г. N 163

3 Настоящий стандарт, кроме раздела 2, представляет собой аутентичный текст ИСО 7698 : 1990 "Зерновые, бобовые и продукты их переработки. Подсчет бактерий, дрожжевых и плесневых грибов"

4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

5 ПЕРЕИЗДАНИЕ. Июль 2002 г.

Введение

Определение количества бактерий, дрожжевых и плесневых грибов в зерновых и бобовых культурах, а также в продуктах их переработки дает возможность определить содержание в них микроорганизмов и (или), в зависимости от цели, дает возможность определить природу присутствующей микрофлоры. Цель анализа - определение качества партии продукта с точки зрения гигиенических требований, изучение динамики развития микрофлоры для оценки эффективности одного из типов хранилищ или оценки влияния физической или химической обработки продукта на микрофлору.

При анализе измельченных продуктов кусочки грибницы также принимают во внимание, но подсчитывают главным образом споры грибов, особенно в том случае, если присутствующие виды грибов являются интенсивно спорулирующими. Такой метод является эффективным способом контроля за развитием микроорганизмов (в зерновых и бобовых культурах, а также в полученных из них продуктах) особенно в серии последовательных проб при условии, что будет проведена идентификация тех видов, которые позволяют проследить за эволюцией микрофлоры. При исследованиях результаты, полученные при помощи такого подсчета, соответствуют тем результатам, которые получены по технологическим критериям (например кислотное число жира, всхожесть).

    1 Область применения

Настоящий стандарт устанавливает метод определения количества бактерий, дрожжевых и плесневых грибов в зерновых и бобовых культурах и в продуктах их переработки (мука, крупа, отруби и т.д.).

Стандарт разработан с учетом международных стандартов:

ИСО 7954-84, который дает общее направление таких исследований и ИСО 7218-85, где приводят подробные описания лабораторных методов для микробиологических исследований.

Примечание - Из-за особых свойств дрожжевых и плесневых грибов их подсчет страдает определенными неточностями.

    2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ ИСО 2170-97 Зерновые и бобовые. Отбор проб молотых продуктов

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 26972-86 Зерно, крупа, мука, толокно для продуктов детского питания. Методы микробиологического анализа

ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

ГОСТ Р 50436-92 (ИСО 950-79) Зерновые. Отбор проб зерна

    3 Определения

В настоящем стандарте применяются следующие термины с соответствующими определениями:

3.1 бактерии: Мезофильные микроорганизмы, аэробные или факультативно анаэробные, которые при 30 °С развиваются внутри и на поверхности агаризованной среды в условиях, которые описаны в этом стандарте.

3.2 дрожжевые грибы: Мезофильные аэробные микроорганизмы, которые развиваются при 25 °С на грибной агаризованной среде в условиях, описанных в этом стандарте, либо:

а) на поверхности этой среды в виде матовых или блестящих круглых колоний, которые обыкновенно имеют правильный контур и более или менее выпуклую поверхность, либо

б) внутри среды в виде округлых, линзообразных колоний.

3.3. плесневые грибы: Мезофильные аэробные гифальные микроорганизмы, которые на поверхности грибной агаризованной среды и в условиях, описанных в этом стандарте, обычно развиваются в виде плоских или пушистых разрастающихся колоний часто с окрашенными плодоносящими или спорообразующими структурами.

    4 Сущность метода

4.1 Готовят в двух повторностях чашки, залитые каждой из двух специфических питательных сред согласно 5.3.1 и 5.3.2, которые содержат определенное количество маточной суспензии.

В тех же условиях осуществляют посев в другие чашки последовательных десятичных разведений маточной суспензии.

4.2 Аэробную инкубацию чашек, содержащих агаризованную среду для подсчета бактерий (5.3.1), проводят при 30 °С в течение 3 дней.

Аэробную инкубацию чашек, содержащих агаризованную среду для подсчета дрожжевых и плесневых грибов (5.3.2), проводят при 25 °С в течение 3, 4 или 5 дней.

4.3 Расчет количества бактерий по количеству колоний в отобранных чашках с агаризованной средой (5.3.1).

Расчет количества дрожжевых и (или) плесневых грибов по количеству колоний в отобранных чашках с агаризованной средой (5.3.2).

    5 Разбавитель, питательные среды и другие продукты

5.1 Основные компоненты

Чтобы обеспечить воспроизводимость результатов, рекомендуется использовать для приготовления разбавителя и питательных сред основные обезвоженные компоненты или полностью обезвоженные среды. Также могут быть использованы коммерческие готовые реактивы. При этом необходимо строго соблюдать инструкцию изготовителя.

Используемые химикаты должны иметь такую степень чистоты, которая пригодна для анализа.

Используемая вода должна быть дистиллированной или деионизированной. Эта вода должна быть свободна от таких веществ, которые могли бы сдерживать рост микроорганизмов (бактерий, дрожжевых и плесневых грибов) в условиях проведения этого анализа.

Если разбавитель и питательные среды не используют тотчас же после изготовления, то их должны, если нет особых указаний, хранить в темном месте при температуре от 0 до 5 °С не более одного месяца, в условиях, не оказывающих влияния на изменение их состава.

5.2 Разбавитель

Раствор пептона в растворе хлорида натрия должен соответствовать ГОСТ 26972.

Примечание - Для того, чтобы повысить гомогенность споровых суспензий, можно добавить такое поверхностно-активное средство, как сорбитовый эфир олеиновой кислоты (фирменное название Твин 80) в пропорции 0,033 г на один литр разбавителя.

5.3 Питательные среды

5.3.1 Агаризованная среда для подсчета количества бактерий

Состав: триптон* - 5,0 г; обезвоженный дрожжевой экстракт - 2,5 г; безводная глюкоза - 1,0 г; агар - от 9 до 18 г**; вода - 1000 см.

_________________

* Это название в настоящее время применяется только некоторыми изготовителями сред. Может использоваться любой другой продукт расщепления, который дает такие же результаты.

** В соответствии с инструкциями фирмы-изготовителя.

Примечание - Если требуется предотвратить развитие дрожжевых грибов, к питательной среде могут быть добавлены ингибиторные средства, такие как актидион (циклогексимид) или натамицин (пимарицин) в количестве 0,1 г/дм.

Приготовление

Растворяют компоненты или полностью обезвоженную среду в воде при кипячении. В случае необходимости регулируют показатель рН таким образом, чтобы после стерилизации он составил 7,0 при 25 °С.

Разливают эту среду в пробирки согласно 6.9 по 15 см на одну пробирку, или в колбы, или сосуды (6.9) подходящей емкости таким образом, чтобы среда занимала приблизительно половину объема такой колбы или сосуда.

Стерилизуют эту среду в автоклаве согласно 6.1 при температуре (121±1) °С в течение 20 мин.

Если приготовленную среду используют сразу, то ее охлаждают перед использованием в водяной бане согласно 6.7 при температуре (45±0,5) °С.

Если приготовленную среду не используют сразу после ее приготовления, то перед началом микробиологических анализов, чтобы избежать задержек при разливе агаризованной среды, ее следует расплавить в кипящей водяной бане, а затем охладить перед использованием в водяной бане согласно 6.7 при температуре (45±0,5) °С.

5.3.2 Агаризованная среда для подсчета количества дрожжевых и плесневых грибов (агаризованная среда с дрожжевым экстрактом, глюкозой и хлорамфениколом)

Состав: дрожжевой экстракт - 5,0 г; глюкоза (CHO) - 20 г; хлорамфеникол (СНСl NO) - 0,1 г; агар - от 9 до 18 г*; вода - 1000 см.

_________________

* В соответствии с инструкциями фирмы-изготовителя.

Приготовление агаризованной среды

Растворяют компоненты в кипящей воде. Если необходимо, регулируют рН таким образом, чтобы после стерилизации он составлял 6,6 при 25 °С.

Разливают среду по сосудам (6.9) соответствующей емкости.

Стерилизуют среду в автоклаве (6.1) при температуре (121±1) °С в течение 15 мин.

Если среду используют сразу после ее приготовления, ее охлаждают в водяной бане (6.7) при температуре (45±0,5) °С.

Если же приготовленная среда не будет использована сразу после приготовления, то перед началом микробиологических анализов, чтобы избежать задержки при разливе агаризованной среды, ее полностью расплавляют в кипящей водяной бане, затем охлаждают перед использованием в водяной бане (6.7) при температуре (45±0,5) °С.

Примечание - Хлорамфеникол может быть заменен окситетрациклином (СНNО). В этом случае готовят основную среду так, как это описано выше, но не добавляют хлорамфеникол. Разливают среду по 100 см и стерилизуют. Готовят 0,1%-ный раствор окситетрациклина гидрохлорида в воде и стерилизуют его после фильтрования. Непосредственно перед использованием добавляют асептически 10 см раствора к 100 см основной среды, которая была расплавлена, и сохраняют при температуре (45±0,5) °С.

    6 Лабораторное оборудование и стеклянная посуда

Примечание - Оборудование одноразового использования является приемлемой заменой стеклянной посуде многоразового использования, если такое оборудование имеет соответствующую спецификацию.

Пользуются обычным микробиологическим лабораторным оборудованием, которое перечислено ниже.

6.1 Оборудование для сухой стерилизации (термостат) или для паровой стерилизации (автоклав), причем автоклав может либо работать отдельно, либо являться частью общего оборудования для приготовления и распределения питательной среды.

Оборудование, которое вступает в соприкосновение с растворителем, питательной средой или пробой, особенно если это оборудование пластмассовое*, должно быть простерилизовано, за исключением тех случаев, когда оборудование поставляется стерильным. Стерилизация должна производиться одним из следующих методов: