ГОСТ 20264.3-81 Препараты ферментные. Методы определения активности пектолитического комплекса (с Изменением N 1)

2. МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПЕКТОЛИТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ (ПкС)
(интерферометрический метод)

2.1. Сущность метода

Метод основан на определении пектолитических ферментов при каталитическом расщеплении пектина.

За единицу пектолитической активности должно быть принято количество фермента, которое катализирует гидролиз 1 г пектина до продуктов, не осаждаемых сернокислым цинком при проведении гидролиза в строго определенных условиях: температура 30 °С, время гидролиза 1 ч, величина рН реакционной среды 4,0; соотношение фермент-субстрат в реакционной среде, обеспечивающее гидролиз 30%-ного пектина, взятого на реакцию.

Пектолитическую активность выражают числом указанных единиц в 1 г испытуемого препарата.

Количество продуктов гидролиза пектина, не осаждаемых сернокислым цинком, определяют на интерферометре.

2.2. Аппаратура, материалы, реактивы

Интерферометр типа ИТР-2 или ЛИР-2.

Мешалка любой марки.

Прибор для определения рН среды в интервале от 1 до 14 с погрешностью измерения не более 0,05 рН.

Ультратермостат типа ТС-16А с пределом измерений 40 °С и погрешностью 1% или другой ультратермостат с аналогичными характеристиками.

Термометры 0-150 °С по ГОСТ 28498-90 с ценой деления 1 °С.

Пробирки стеклянные диаметром 15-18 мм по ГОСТ 25336-82.

Стаканчики для взвешивания вместимостью 25-30 см по ГОСТ 25336-82.

Колбы мерные 2-50, 500-2 (наливные) по ГОСТ 1770-74.

Стаканы и колбы стеклянные лабораторные по ГОСТ 25336-82 вместимостью 250, 300, 500 см.

Бумага фильтровальная лабораторная по ГОСТ 12026-76.

Фильтры обеззоленные. Синяя лента.

Пектин свекловичный со степенью метоксилирования не менее 35% и содержанием основного вещества не менее 70%.

Сахароза по ГОСТ 5833-75, раствор с массовой долей сахарозы 0,25%.

Цинк сернокислый по ГОСТ 4174-77, раствор с массовой долей сернокислого цинка 15%.

Аммиак водный по ГОСТ 3760-79.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709-72.

Примечание. Все реактивы должны быть квалификации х.ч. или ч.д.а.

(Измененная редакция, Изм. N 1).

2.3. Подготовка к анализу

2.3.1. Приготовление основного ферментного раствора из очищенных порошкообразных препаратов

0,1000 г (или 1,0000 г) исследуемого препарата взвешивают с погрешностью не более 0,0001 г в стаканчике вместимостью 25-30 см. Навеску тщательно растирают стеклянной палочкой с небольшим количеством дистиллированной воды. Затем количественно переносят в мерную колбу вместимостью 50 см (500 см), доводят водой до метки и перемешивают. С целью избежания адсорбции фермента на наполнителе необходимо процессы растворения и фильтрации проводить неразрывно: после растворения стандартизованных препаратов раствор сразу же фильтруют через беззольный фильтр. Из фильтрата отбирают определенное количество раствора в зависимости от активности препарата для проведения анализа в соответствии с табл.1.