ГОСТ 25999-83 Продукты переработки плодов и овощей. Методы определения витаминов В(1) и В(2)

4. ЛЮМИНОФЛАВИНОВЫЙ МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВИТАМИНА В

4.1. Сущность метода

Сущность метода основана на кислотном и ферментативном гидролизе связанных форм витамина, окислении пигментов марганцовокислым калием, облучении светом для перевода рибофлавина в люмифлавин, экстракции люмифлавина хлороформом и измерении интенсивности флуоресценции при длинах волн 360-480 нм возбуждающего и 510-650 нм излучаемого света.

Метод предназначен для анализа овощных консервов с мясом и крупами, а также темноокрашенных консервированных продуктов.

4.2. Аппаратура, материалы и реактивы

Для проведения анализа применяют аппаратуру, материалы и реактивы, указанные в пп.2.2; 3.2, с дополнениями, указанными ниже.

Вентилятор бытовой по ГОСТ 7402.

Лампа накаливания электрическая общего назначения по ГОСТ 2239, мощностью 100, 150, 200 Вт.

Бюретки по НТД вместимостью 50, 100 см.

Воронки лабораторные стеклянные по ГОСТ 25336 диаметром 36 мм.

Воронки делительные стеклянные по ГОСТ 25336 вместимостью 250 см.

Колбы лабораторные стеклянные по ГОСТ 25336 плоскодонные или конические с взаимозаменяемым конусом, вместимостью 100 см.

Кислота серная по ГОСТ 4204, раствор с массовой долей 30%.

Натрия гидроокись по ГОСТ 4328, раствор с молярной концентрацией (NaOH)=7 моль/дм.

Натрий сернокислый по ГОСТ 4166, безводный.

Хлороформ технический по ГОСТ 20015, высшего сорта. Перед использованием измеряют интенсивность флуоресценции. При наличии флуоресценции очищают перегонкой.

4.3. Подготовка к анализу

Подготовку к анализу проводят по пп.2.3.4; 3.3.1; 3.3.2.

4.4. Проведение анализа

4.4.1. Очистка гидролизата

В колбу вместимостью 250 см помещают 100 см анализируемого гидролизата, в другую - 100 см гидролизата контрольного опыта. В обе колбы прибавляют по 2,0 см раствора серной кислоты. Затем пипеткой с делениями по каплям при постоянном перемешивании прибавляют раствор марганцовокислого калия до слабо-розового окрашивания, не исчезающего в течение 1 мин. Избыток розового окрашивания устраняют прибавлением по каплям раствора перекиси водорода. Отмечают израсходованные объемы растворов марганцовокислого калия и перекиси водорода. Полученный раствор переносят в делительную воронку вместимостью 250 см, прибавляют 30-50 см хлороформа и встряхивают 0,5 мин. Хлороформный слой удаляют, а водный экстракт используют для анализа.

4.4.2. Облучение экстракта и получение люмифлавина

В две колбы вместимостью 100 см каждая прибавляют по 20,0 см анализируемого экстракта, в третью - экстракт контрольного опыта. В колбу с анализируемым экстрактом прибавляют 2,0 см стандартного раствора рибофлавина с массовой концентрацией 0,001 г/дм и затем во все колбы по 4,0 см раствора гидроокиси натрия с молярной концентрацией (NaOH)=7 моль/дм. Содержимое перемешивают, колбы закрывают пришлифованными пробками и облучают светом электролампы мощностью 100-200 Вт с расстояния (30±1) см в течение 40 мин.

Температура раствора должна быть от 15 до 25 °С. Для охлаждения используют настольный вентилятор. После облучения в колбы прибавляют по 4,0 см ледяной уксусной кислоты, перемешивают, прибавляют по 20,0 см хлороформа и снова перемешивают в течение 0,5 мин. Содержимое колб переносят в делительные воронки вместимостью 50 см и после расслаивания хлороформный раствор фильтруют в кюветы для измерения интенсивности флуоресценции. Для обезвоживания хлороформного раствора на воронку с фильтром помещают около 2,5 г безводного сернокислого натрия.

После этого измеряют интенсивность флуоресценции сначала раствора с добавкой рибофлавина, затем раствора без добавки и контрольного оп

ыта.

4.5. Обработка результатов