ГОСТ 25134-82 Бруцеллин ВИЭВ. Технические условия
3. МЕТОДЫ ИСПЫТАНИЙ
3.1. При отборе проб флаконы отбирают из разных мест нескольких упаковок. 10 флаконов используют для испытаний, а 10 оставляют в архиве государственного контролера на 3 года.
3.2. Для определения внешнего вида, отсутствия хлопьев, осадка и примесей флаконы с бруцеллином встряхивают и просматривают в проходящем свете.
3.3. Концентрацию водородных ионов (рН) определяют электрометрическим методом, используя потенциометр ЛПУ-01 или другие приборы того же класса точности, в соответствии с правилами, приложенными к прибору.
3.4. Определение массовой доли белка
Сущность метода заключается в осаждении белка азотной кислотой и последующем измерении степени помутнения раствора на фотоэлектроколориметре.
3.4.1. Аппаратура, материалы и реактивы
Фотоэлектроколориметр ФЭК-Н-57 или других аналогичных марок.
Весы аналитические с разновесами АДВ-200 или других аналогичных марок того же класса точности.
Пробирки стеклянные по ГОСТ 10515-75.
Пипетки стеклянные мерные по ГОСТ 20292-74 вместимостью 1,5 и 10 см.
Флаконы стеклянные с притертой пробкой вместимостью 200 см.
Кислота азотная по ГОСТ 4461-77, концентрированная.
Магний сернокислый по ГОСТ 4523-77.
Альбумин сывороточный бычий лиофилизированный марки Б.
Среда питательная жидкая, используемая для культивирования штамма бруцелла абортус В-1 реакторным методом.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709-72.
3.4.2. Подготовка к испытанию
3.4.2.1. Приготовление реактива
Один объем концентрированной азотной кислоты смешивают с четырьмя объемами насыщенного раствора сернокислого магния. Раствор хранят в стеклянной посуде с притертой пробкой неограниченное время.
3.4.2.2. Построение калибровочной кривой.
Готовят основной раствор белка на питательной среде, которую применяют для выращивания штамма В-1 в реакторах. Для этого в 100 см среды растворяют 100 мг кристаллического бычьего альбумина. Из основного раствора готовят разведения (см. табл.2).
Таблица 2
Номер пробирки | Объем, см | Концентрация белка, мг/л | |
основного раствора | дистиллированной воды | ||
1 | 0,1 | 4,9 | 20 |
2 | 0,3 | 4,7 | 60 |
3 | 0,5 | 4,5 | 100 |
4 | 0,7 | 4,3 | 140 |
5 | 0,9 | 4,1 | 180 |
6 | 1,1 | 3,9 | 220 |
7 | 1,3 | 3,7 | 260 |
8 | 1,5 | 3,5 | 300 |
9 | 3,5 | 6,5 | 350 |
10 | 1,0 | 3,0 | 400 |
11 | 4,5 | 5,5 | 450 |
12 | 3,0 | 3,0 | 500 |
Берут три пробирки, вносят в них по 1 см из каждого разведения и добавляют по 1 см
реактива. Через 15 мин производят измерение плотности взвеси конгломератов белковых молекул на фотоэлектроколориметре при длине волны 420-450 нм, используя кюветы с толщиной слоя 0,5 см. На оси абсцисс откладывают средние показания экстинций, а на оси ординат - концентрацию белка в мг/л.
3.4.3. Проведение испытания