ГОСТ 20235.2-74 Мясо кроликов. Методы бактериологического анализа

3. ПОДГОТОВКА К АНАЛИЗУ

3.1. Подготовка и стерилизация посуды и материалов

3.1.1. Вся посуда для бактериологического анализа перед стерилизацией должна быть тщательно вымыта и высушена.

3.1.2. Пробирки должны быть закрыты ватными пробками и завернуты в бумагу; горлышки колб и флаконов закрывают ватной пробкой, а сверху - бумажным колпачком, который обвязывают ниткой.

3.1.3. Пробки для пробирок и колб готовят из ваты, обвертывают слоем марли и завязывают ниткой на свободном конце.

3.1.4. Чашки Петри укладывают в металлические пеналы или завертывают в бумагу. Между крышками и дном чашек, предназначенных для разливки среды Эндо, можно положить кружки фильтровальной бумаги диаметром на 1-2 см больше диаметра чашки.

3.1.5. В конце пипетки, который берется в рот, вкладывают кусочек ваты. Пипетки помещают в металлические пеналы по 6-10 шт. в каждый или завертывают в бумагу.

3.1.6. Подготовленную посуду стерилизуют сухим паром в течение 1 ч в сушильном шкафу при температуре 160±5 °С.

При отсутствии сушильного шкафа посуду стерилизуют в течение 30 мин в автоклаве при температуре 126±2 °С.

3.1.7. Стерильную посуду вынимают из сушильного шкафа после его охлаждения до температуры ниже 60 °С и хранят в плотно закрытых шкафах или ящиках лабораторных столов.

3.2. Приготовление питательных сред, реактивов, красок

3.2.1. Приготовление мясной воды

Говяжье или конское мясо освобождают от костей, жира и сухожилий, измельчают на мясорубке и заливают холодной водой из расчета 1000 см воды на 500 г мяса. Смесь воды с измельченным мясом медленно нагревают до кипения и кипятят в течение 1,5 ч. Небольшое количество смеси (до 5 л) можно кипятить на открытом огне при частом помешивании во избежание пригорания частичек мяса. Большое количество смеси лучше кипятить в котлах с паровой рубашкой. Для определения готовности мясной воды сначала фильтруют небольшое количество смеси в пробирку через бумажный фильтр. Если жидкость прозрачная - вода готова.

Затем жидкость и весь сок из вареного мяса отжимают через ткань, доливают кипяченой водой до первоначального объема, разливают в чистую посуду (колбы, бутыли) и стерилизуют 20 мин в автоклаве при температуре 120 °С.

3.2.2. Приготовление мясо-пептонного бульона

К 1000 мл мясной воды, приготовленной по п.3.2.1, добавляют 10 г сухого пептона и 0,5 г хлористого натрия, кипятят в течение 30 мин, после чего доводят уровень воды до первоначального объема. Затем фильтруют через бумажный фильтр, устанавливают рН 7,0-7,2 насыщенным раствором двууглекислого натрия или 10%-ным раствором гидрата окиси натрия, 15-20 мин стерилизуют при температуре 120 °С. Если после стерилизации в мясо-пептонном бульоне выпадает осадок, его фильтруют вторично и снова стерилизуют. Вторичную стерилизацию для предотвращения выпадения осадка проводят при более низкой температуре.

3.2.3. Приготовление физиологического раствора

В 1000 мл дистиллированной воды растворяют 8,5 г химически чистого хлористого натрия. Раствор доводят до кипения, охлаждают, фильтруют через бумажный фильтр, разливают в колбы или пробирки и стерилизуют 20 мин в автоклаве при температуре 120 °С.

3.2.4. Приготовление мясо-пептонного агара

К 1000 мл мясо-пептонного бульона, приготовленного по п.3.2.2, перед стерилизацией добавляют 20 г агара и кипятят на слабом огне при постоянном помешивании до полного растворения.

Мясо-пептонный агар, охлажденный до температуры 50-55 °С, осветляют яичным белком (из расчета один белок на 1000 см мясо-пептонного агара), помещают в автоклав, не завинчивая крышку автоклава, или в аппарат Коха на 1 ч, чтобы белок свернулся и, оседая, увлек за собой взвешенные частицы. Горячий мясо-пептонный агар фильтруют через ватно-марлевый фильтр и устанавливают рН 7,0-7,4. Разливают во флаконы и пробирки и 20 мин стерилизуют в автоклаве при температуре 120 °С.

3.2.5. Приготовление питательного агара

К 100 см дистиллированной воды добавляют 5 г порошка агара, тщательно размешивают и кипятят на слабом огне до полного расплавления агара в закрытой посуде при периодическом помешивании во избежание пригорания, фильтруют, разливают в пробирки или флаконы и 20 мин стерилизуют при температуре 120 °С или по 30 мин текучим паром трое суток подряд.

3.2.6. Приготовление среды Левина

К 100 мл расплавленного мясо-пептонного агара с рН 7,0-7,4, приготовленного по п.3.2.4, добавляют 2 см 0,5%-ного водного раствора предварительно подогретой на водяной бане метиленовой сини, 1,5 см 2%-ного раствора эозина, 2 г лактозы и 0,2 г двузамещенного фосфорнокислого калия. Растворы красок готовят на дистиллированной воде и стерилизуют 1 ч при температуре 100 °С. После добавления всех компонентов в указанном порядке среду тщательно перемешивают, разливают в чашки и подсушивают. Среда должна быть красно-фиолетового цвета.