ГОСТ 10444.7-86 Продукты пищевые. Методы выявления ботулинических токсинов и Clostridium botulinum

3. ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ

3.1. При приготовлении питательных сред для выявления и культивирования С. botulinum жидкие и полужидкие среды разливают во флаконы или в пробирки таким образом, чтобы высота столбика среды составляла не менее 10 см, объем среды - 30-100 см.

Если нет специальных указаний по хранению среды, то среду хранят в темноте при температуре (4±2) °С не более 1 мес. Сухие среды, в состав которых входят тиогликолят натрия и цистеина гидрохлорид, хранят в герметичной упаковке при температуре (4±2) °С. Приготовленные из них жидкие и полужидкие среды хранят при комнатной температуре не более 7 сут.

3.2. Для выявления и выделения С. botulinum используют следующие среды.

3.2.1. Агар желточный для анаэробов: к 1000 см дистиллированной воды добавляют 25,0 см дрожжевого экстракта, 5,0 г триптона или ферментативного гидролизата казеина, 20,0 г пептона, 5,0 г хлористого натрия и 20,0 г агара. Среду нагревают на кипящей водяной бане до расплавления агара, устанавливают рН (6,9±0,1), разливают во флаконы и стерилизуют при температуре (121±1) °С в течение 20 мин. Хранят при температуре (4±2) °С не более 28 сут.

Яично-желточную эмульсию добавляют к расплавленной и охлажденной до 50 °С среде из расчета 80 см яично-желточной эмульсии на 1000 см среды, тщательно перемешивают и разливают по чашкам Петри. Чашки хранят при температуре (4±2) °С не более 2 сут, перед использованием подсушивают по ГОСТ 26670-91. Применяют для определения способности С. botulinum давать положительную реакцию с яичным желтком.

3.2.2. Агар печеночно-желточный; агар печеночный готовят по ГОСТ 10444.1-84.

Яично-желточную эмульсию добавляют к расплавленному и охлажденному до 50 °С печеночному агару из расчета 80 см желточной эмульсии на 1000 см агара, тщательно перемешивают и разливают по чашкам Петри. Чашки хранят при температуре (4±2) °С не более 2 сут, перед использованием подсушивают по ГОСТ 26670-91.

При отсутствии печеночного агара допускается заменять его мясо-пептонным агаром.

Применяют для определения способности С. botulinum давать положительную реакцию с яичным желтком.

3.2.3. Агар мясо-пептонный готовят по ГОСТ 10444.1-84.

3.2.4. Агар сахарный кровяной по Цейсслеру готовят по ГОСТ 10444.1-84.

Применяют при определении гемолитической активности С.botulinum.

3.2.5. Бульон триптиказо-пептонно-глюкозный с дрожжевым экстрактом (ТРGУ) и с трипсином (ТРGУТ): 50,0 г триптического перевара казеина, 5,0 г пептона, 100,0 см дрожжевого экстракта, 4,0 г глюкозы и 1,0 г тиогликолята натрия добавляют к 900 см дистиллированной воды, устанавливают рН (7,1±0,1). Стерилизуют при температуре (121±1) °С пробирки в течение 10 мин, флаконы - в течение 15 мин. Хранят при комнатной температуре не более 7 сут.

Для культивирования С. botulinum, образующих протоксин, перед употреблением к 1000 см бульона добавляют 60 см 1,5%-ного раствора трипсина в фосфатном буферном растворе.

3.2.6. Бульон Хоттингера готовят по ГОСТ 10444.1-84.

Применяют для культивирования С. botulinum.