ГОСТ 9.085-78
Группа Т99
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ
Единая система защиты от коррозии и старения
ЖИДКОСТИ СМАЗОЧНО-ОХЛАЖДАЮЩИЕ
Методы испытаний на биостойкость
Single corrosion and ageing protection system.
Cooling lubricant. Bioresistance test methods
МКС 19.040
75.100
ОКСТУ 0009
Дата введения 1979-07-01
Постановлением Государственного комитета стандартов Совета Министров СССР от 27 июня 1978 г. N 1699 дата введения установлена с 01.07.79
Ограничение срока действия снято по протоколу N 3-93 Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации (ИУС 5-6-93)
ИЗДАНИЕ с Изменением N 1, утвержденным в октябре 1988 г. (ИУС 1-89)
Настоящий стандарт распространяется на водосмешиваемые смазочно-охлаждающие жидкости (далее СОЖ) и устанавливает методы лабораторных испытаний на стойкость к воздействию бактерий и плесневых грибов.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
1.1. Сущность метода
Сущность метода заключается в выдерживании СОЖ, зараженных культурами бактерий в условиях, оптимальных для их развития, с последующей оценкой биостойкости.
1.2. Отбор проб
1.2.1. Пробы СОЖ отбирают по ГОСТ 2517-85 массой 50 г.
1.2.2. Пробами являются СОЖ в состоянии поставки без специальной очистки и стерилизации.
1.2.3. Проб должно быть не менее трех.
1.2.4. Виды бактерий
1.2.4.1. Для испытаний применяют смесь чистых культур следующих видов бактерий:
Escherichia coli (Migyla) Castellani and Chalmers;
Mycobacterium phlei Lehman and Neum;
Pseudomonas aeruginosa Migyla;
Pseudomonas oleovorans Lee and Chandler;
Staphylococcus aureus Rosenbach.
Кроме чистых культур допускается применять смесь накопительных культур, выделенных из испытуемых СОЖ.
1.2.4.2. Чистые культуры бактерий получают в Институте биохимии и физиологии микроорганизмов АН СССР, поддерживают периодическим пересевом и выращивают непосредственно перед испытаниями. Культуры бактерий обновляют один раз в год-два.
1.2.4.1, 1.2.4.2. (Измененная редакция, Изм. N 1).
1.2.4.3. Пересев, выращивание и хранение культур бактерий производят, как указано в ГОСТ 9.082-77.
1.3. Аппаратура, материалы и реактивы - по ГОСТ 9.048-89 со следующим дополнением:
термостат, обеспечивающий поддержание постоянной температуры (30±2) °С*;
электроплитка с закрытой спиралью*;
потенциометр по ГОСТ 9245-79;
горелки газовые*;
цилиндры металлические, полые изготовленные из коррозионно-стойкой стали по ГОСТ 5949-75, внутренним диаметром 7 мм, высотой 10 мм;
чашки биологические (Петри) по ГОСТ 25336-82 с крышками, низкие, типа ЧБН;
груша резиновая*;
доска для сушки посуды;
аппарат для встряхивания колб и пробирок;
стандарты мутности;
рН-метр лабораторный типа ЛПУ-01, рН-340 или другого типа с погрешностью не более 0,05 рН;
ножницы, пинцеты, скальпели*;
штативы лабораторные*;
бульон мясо-пептонный (МПБ) по ГОСТ 9.082-77;
агар мясо-пептонный (МПА) по ГОСТ 9.082-77;
спирт этиловый ректификованный технический по ГОСТ 18300-87, высшего сорта;
кислота соляная по ГОСТ 3118-77;
кислота серная по ГОСТ 4204-77;
калий двухромовокислый по ГОСТ 4220-75;
натрий углекислый по ГОСТ 83-79, безводный;
(Измененная редакция, Изм. N 1).
__________________
* По документации, утвержденной в установленном порядке.
1.4. Подготовка к испытаниям
1.4.1. Посуда и материалы - по ГОСТ 9.048-89.
1.4.2. Среды для выращивания и хранения чистых культур бактерий и для испытаний готовят по ГОСТ 9.082-77.
1.4.3. Рецептура сред приведена в табл.1.
Таблица 1
Наименование реактивов | Среда | |||||
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | |
МПА | Агар индикаторный | Сорокина | Сусло-агар | Чапека-Докса с агаром | Чапека-Докса с агаром без сахарозы | |
Калий фосфорнокислый однозамещенный, г | - | - | 0,5 | - | 0,7 | 0,7 |
Калий фосфорнокислый двузамещенный, г | - | - | 1,0 | - | 0,3 | 0,3 |
Магний сернокислый, г | - | - | 0,2 | - | 0,5 | 0,5 |
Натрий азотнокислый, г | - | - | - | - | 2,0 | 2,0 |
Натрий сернокислый, г | - | 0,5 | - | - | - | - |
Калий хлористый, г | - | - | - | - | 0,5 | 0,5 |
Железо сернокислое, г | - | - | 0,01 | - | 0,01 | 0,01 |
Железо лимоннокислое, г | - | 0,5 | - | - | - | - |
Аммоний хлористый, г | - | - | 0,1 | - | - | - |
Спирт этиловый ректификованный, г | - | - | 5,0 | - | - | - |
Сахароза, г | - | - | - | - | 30,0 | - |
Пептон бактериологический, г | - | 10,0 | - | - | - | - |
Агар микробиологический, г | 20,0 | 12,0 | - | 20,0 | 20,0 | Выщело- ченный 20,0 |
Мясо-пептонный бульон, см | До 1000 | - | - | - | - | - |
Сусло пивное, см | - | - | - | До 1000 | - | - |
Вода дистиллированная, см | - | 1000 | До 1000 | - | До 1000 | До 1000 |
1.4.4. Чистые культуры бактерий пересевают и выращивают, как указано в ГОСТ 9.082-77.
1.4.5. Для приготовления бактериальных суспензий культуры, выращенные в течение суток, с помощью бактериологической петли переносят в отдельные пробирки, содержащие 10 см водопроводной воды.
1.4.6. Количество бактериальных клеток определяют с помощью стандартов мутности.
Концентрация бактериальных клеток в суспензии должна быть не менее 2 млн/см.
1.4.7. Приготовленные суспензии взбалтывают и сливают в равных объемах (1-2 см) в стерильную пробирку.
1.4.8. Срок хранения суспензии не более 3 ч.
1.5. Проведение испытаний
1.5.1. Круглую или коническую колбу вместимостью 500 см, содержащую 200-300 см среды 1, помещают в водяную баню и выдерживают при температуре (100±2) °С до тех пор, пока среда полностью не расплавится.
Расплавленную питательную среду охлаждают до температуры 40-50 °С и заражают суспензией смеси бактериальных культур, внося последнюю с помощью градуированной пипетки 2 см на 100 см среды.
(Измененная редакция, Изм. N 1).
1.5.2. Среду после заражения разливают по 15 см в чашки Петри.
1.5.3. На застывшую, строго горизонтальную поверхность среды ставят с помощью пинцета 3 стерильных полых металлических цилиндрика, в каждый из которых вносят по 0,1 см испытуемой СОЖ.
1.5.4. Чашки Петри с цилиндриками закрывают крышками и помещают в термостат при (30±2) °С.
1.5.5. Пробы выдерживают в термостате 24 ч.
1.5.6. Испытания повторяют 3-4 раза.