ГОСТ ISO 18363-4-2024

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

ЖИРЫ И МАСЛА ЖИВОТНЫЕ И РАСТИТЕЛЬНЫЕ

Определение содержания сложных эфиров монохлорпропандиолов (МХПД) и глицидола с применением ГХ/МС

Часть 4

Метод с использованием быстрой щелочной переэтерификации и измерение содержания 2-МХПД, 3-МХПД и глицидола с применением ГХ/МС/МС

Animal and vegetable fats and oils. Determination of fatty-acid-bound chloropropanediols (MCPDs) and glycidol by GC/MS. Part 4. Method using fast alkaline transesterification and measurement for 2-MCPD, 3-MCPD and glycidol by GC-MS/MS

МКС 67.200.10

Дата введения 2025-04-01

Предисловие

Цели, основные принципы и общие правила проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены"

Сведения о стандарте

1 ПОДГОТОВЛЕН Федеральным государственным бюджетным научным учреждением "Всероссийский научно-исследовательский институт жиров" (ВНИИЖиров) на основе собственного перевода на русский язык англоязычной версии стандарта, указанного в пункте 5

2 ВНЕСЕН Межгосударственным техническим комитетом по стандартизации МТК 238 "Масла растительные и продукты их переработки"

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 16 декабря 2024 г. № 66-2024)

За принятие проголосовали:

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 13 февраля 2025 г. № 63-ст межгосударственный стандарт ГОСТ ISO 18363-4-2024 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 апреля 2025 г.

5 Настоящий стандарт идентичен международному стандарту ISO 18363-4:2021* "Жиры и масла животные и растительные. Определение содержания сложных эфиров монохлорпропандиолов (МХПД) и глицидола с применением ГХ/МС. Часть 4. Метод с использованием быстрой щелочной переэтерификации и измерение содержания 2-МХПД, 3-МХПД и глицидола с применением ГХ/МС/МС" ["Animal and vegetable fats and oils - Determination of fatty-acid-bound chloropropanediols (MCPDs) and glycidol by GC/MS. Part 4: Method using fast alkaline transesterification and measurement for 2-MCPD, 3-MCPD and glycidol by GC-MS/MS", IDT].

________________

* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей. - Примечание изготовителя базы данных.

Международный стандарт разработан подкомитетом SC 11 "Животные и растительные жиры и масла" Технического комитета ISO/TC 34 "Пищевые продукты" Международной организации по стандартизации (ISO).

При применении настоящего стандарта рекомендуется использовать вместо ссылочных международных стандартов соответствующие им межгосударственные стандарты, сведения о которых приведены в дополнительном приложении ДА

6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

7 Некоторые элементы настоящего стандарта могут быть объектом патентных прав. Международная организация по стандартизации (ISO) не несет ответственности за идентификацию каких-либо или всех патентных прав

Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта и изменений к нему на территории указанных выше государств публикуется в указателях национальных стандартов, издаваемых в этих государствах, а также в сети Интернет на сайтах соответствующих национальных органов по стандартизации.

В случае пересмотра, изменения или отмены настоящего стандарта соответствующая информация будет опубликована на официальном интернет-сайте Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации в каталоге "Межгосударственные стандарты"

Введение

ISO 18363 представляет собой серию международных стандартов, которые могут быть использованы для определения содержания сложных эфиров монохлорпропандиола (МХПД) и глицидола. Во введении приведено описание методов, указанных в различных частях серии, чтобы аналитик мог решить, какие методы подходят для применения. Подробное описание каждого метода содержится в области применения соответствующего метода.

ISO 18363-1 представляет собой дифференциальный метод, эквивалентный стандарту DGF standard C-VI 18 (10) [9] и идентичный официальному методу Official Method Cd 29c-13 [6]. Метод основан на быстром щелочном каталитическом выделении 3-МХПД и глицидола из производных сложных эфиров. Затем глицидол преобразуется в индуцированный 3-МХПД. Этот метод состоит из двух частей. Первая часть (А) позволяет определить сумму сложных эфиров 3-МХПД и глицидола, вторая часть (В) определяет только сложные эфиры 3-МХПД. Оба определения основаны на выделении целевых аналитов - 3-МХПД и глицидола - из формы сложных эфиров с применением алкоголиза в щелочной среде, проводимого при комнатной температуре. В части А для прекращения реакции и последующего преобразования глицидола в индуцированный 3-МХПД используется подкисленный раствор хлорида натрия. Таким образом, 3-МХПД и глицидол становятся неразличимыми в части А. В части В при добавлении подкисленного раствора соли, не содержащей хлоридов, достигается не только остановка реакции, но и предотвращение преобразования глицидола в индуцированный МХПД. Таким образом, часть В позволяет определить действительное содержание 3-МХПД. Наконец, содержание глицидола в образце пропорционально разности обоих определений (А-В) и может быть вычислено после определения коэффициента преобразования глицидола в 3-МХПД. ISO 18363-1 применим для быстрого определения сложных эфиров 3-МХПД и глицидола в рафинированных и нерафинированных растительных маслах и жирах. ISO 18363-1 может применяться к животным жирам, а также к отработанным маслам и жирам для жарки, но перед анализом данных образцов необходимо провести валидационное исследование. Любые свободные аналиты, содержащиеся в образце, будут включены в результаты, так как данный стандарт не позволяет различать свободные и связанные соединения. Однако на момент публикации этого стандарта исследования не показали каких-либо доказательств содержания свободного аналита в том же количестве, что и содержание эстерифицированного аналита в рафинированных растительных маслах и жирах. В принципе, ISO 18363-1 может быть изменен таким образом, чтобы стало возможным определение 2-МХПД, но перед анализом данного соединения необходимо провести валидационное исследование.

ISO 18363-2 представляет собой официальный метод AOCS Official Method Cd 29b-13 [5]. Метод основан на медленном щелочном высвобождении МХПД и глицидола из производных сложных эфиров. Затем глицидол преобразуется в 3-монобромпропандиол (3-МБПД). ISO 18363-2 подразумевает подготовку двух образцов, которые отличаются использованием внутренних стандартов. Оба образца используются для определения сложных эфиров 2-МХПД и 3-МХПД. В части А определяется предварительный результат для сложного эфира глицидола. Поскольку 3-МХПД, присутствующий в образце, при подготовке образца в незначительной степени преобразуется в индуцированный глицидол, часть В служит для количественного определения доли индуцированного глицидола, который затем вычитают из предварительного количества глицидола, полученного в части А. Используя меченные изотопами свободные МХПД-изомеры в пробе А и меченные изотопами сложные эфиры 2-МХПД и 3-МХПД в части В, можно контролировать эффективность расщепления сложного эфира. Оба определения, А и В, основаны на выделении целевых аналитов 2-МХПД, 3-МХПД и глицидола из формы сложного эфира посредством медленного щелочного алкоголиза на холоде. При подготовке обоих образцов реакцию останавливают добавлением подкисленного концентрированного раствора бромида натрия для преобразования нестабильного и летучего глицидола в 3-монобромпропандиол (3-МБПД), который демонстрирует сопоставимые с 3-МХПД стабильность и хроматографические характеристики. Кроме того, большой избыток ионов бромида предотвращает нежелательное образование 3-МХПД из глицидола в случае образцов, содержащих определенное природное количество хлорида. ISO 18363-2 применим для определения сложных эфиров 3-МХПД, 2-МХПД и глицидола в рафинированных и нерафинированных растительных маслах и жирах. ISO 18363-2 может применяться к животным жирам, а также к отработанным маслам и жирам для жарки, но перед анализом этих образцов необходимо провести валидационное исследование. Любые свободные аналиты, содержащиеся в образце, будут включены в результаты, но данный стандарт не позволяет различать свободные и связанные соединения. Однако на момент публикации этого стандарта исследования не показали каких-либо доказательств содержания свободного аналита в том же количестве, что и содержание эстерифицированного соединения в растительных маслах и жирах.

ISO 18363-3 представляет собой официальный метод AOCS Official Method Cd 29a-13 [4]. Метод основан на преобразовании сложных глицидиловых эфиров в сложные эфиры 3-МБПД и медленном катализируемом кислой средой высвобождении МХПД и МБПД из производных сложных эфиров. Метод ISO 18363-3 основан на подготовке одного образца, в котором сложные глицидиловые эфиры преобразуются в моноэфиры МБПД, а затем свободные аналиты 2-МХПД, 3-МХПД и 3-МБПД высвобождаются медленным алкоголизом в кислой среде. 3-МБПД представляет собой истинное содержание связанного глицидола. ISO 18363-3 может применяться для определения сложных эфиров 3-МХПД, 2-МХПД и глицидола в рафинированных и нерафинированных растительных маслах и жирах. ISO 18363-3 может применяться к животным жирам, а также к отработанным маслам и жирам для жарки, но перед анализом таких образцов необходимо провести валидационное исследование. Данный метод подходит для анализа связанных (эстерифицированных) аналитов, но при необходимости этот метод может быть также выполнен без первоначального преобразования глицидиловых эфиров. В таком случае результаты будут включать как свободные, так и связанные формы 2-МХПД и 3-МХПД, а количество свободных аналитов может быть рассчитано как разность между двумя результатами, полученными в обоих определениях. Однако на момент публикации этого стандарта исследования не показали каких-либо доказательств того, что содержание свободного аналита в растительных маслах и жирах столь же высоко, как и содержание определяемого эстерифицированного аналита.

Настоящий стандарт устанавливает ускоренный метод, основанный на быстром щелочном расщеплении сложных эфиров МХПД и глицидиловых эфиров. Выделившийся глицидол затем преобразуется в 3-МБПД. pH быстрого щелочного расщепления обычно способствует частичному преобразованию выделившегося МХПД в глицидол в процессе расщепления сложных эфиров, что приводит к завышению содержания сложного эфира глицидола в пробе. Посредством добавления двух разных меченных изотопами внутренних стандартов сложных эфиров 3-МХПД и глицидола, можно определить количество меченого глицидола, полученного в результате разложения высвобожденного внутреннего стандарта. Эту информацию можно использовать для корректировки результата определения глицидола, индуцированного глицидиловым эфиром, завышенного за счет глицидола, индуцированного 3-МХПД. Те же два внутренних стандарта используют для количественного определения связанных МХПД и глицидола, что требует приготовления одного образца для количественного определения сложных эфиров 2-МХПД, 3-МХПД и глицидола. По аналогии с ISO 18363-1, ISO 18363-2 и ISO 18363-3 выделенные МХПД и 3-МБПД перед анализом методом ГХ-МС/МС дериватизируют с фенилборной кислотой. В отличие от других частей ISO 18363, данный стандарт требует оборудования ГХ-МС/МС для однозначного обнаружения каждого из (меченных изотопами) МБПД, необходимых для правильного количественного определения глицидола, индуцированного глицидиловым эфиром. Данный стандарт применим для определения сложных эфиров 3-МХПД, 2-МХПД и глицидола в рафинированных и нерафинированных растительных маслах и жирах. Он также применим к животным жирам и отработанным жирам и маслам для жарки, но перед анализом этих образцов требуется валидационное исследование. Любые свободные аналиты в образце включаются в результаты, но стандарт не позволяет проводить различие между свободными и связанными аналитами. Однако на момент публикации данного стандарта исследования не выявили никаких доказательств того, что содержание свободных аналитов в растительных маслах и жирах столь же высоко, как содержание эстерифицированных аналитов.

     1 Область применения

Настоящий стандарт устанавливает быстрый метод одновременного определения сложных эфиров 2-МХПД (связанных 2-МХПД), сложных эфиров 3-МХПД (связанных 3-МХПД) и глицидиловых эфиров (связанного глицидола) в одном анализе, основанном на расщеплении сложных эфиров, катализируемом щелочной средой, и дериватизации расщепленных (свободных) анализируемых веществ (далее - аналиты) фенилборной кислотой (ФБК) перед проведением анализа методом газовой хроматографии - масс-спектрометрии/масс-спектрометрии (ГХ-МС/МС). Завышенная оценка глицидиловых эфиров корректируется добавлением изотопно-меченого сложного эфира 3-МХПД, что позволяет количественно определить глицидол, индуцированный 3-МХПД, в процессе анализа.

Настоящий стандарт применим к твердым и жидким жирам и маслам. Он также применим к животным жирам и использованным фритюрным жирам и маслам для жарки, но эти матрицы не были включены в валидацию. Для всех трех аналитов предел количественного определения (LOQ) составляет 0,1 мг/кг, а предел обнаружения (LOD) составляет 0,03 мг/кг.

Молоко и молочные продукты (или жиры из молока и молочных продуктов), детское питание, эмульгаторы, свободные жирные кислоты и другие матрицы на основе жиров и масел исключены из области применения настоящего стандарта.

     2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использована нормативная ссылка на следующий стандарт [для датированной ссылки применяют только указанное издание ссылочного стандарта, для недатированной - последнее издание (включая все изменения к нему)]:

ISO 3696, Water for analytical laboratory use - Specification and test methods (Вода для лабораторного анализа. Технические требования и методы испытаний)

     3 Термины и определения

В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями.

ISO и IEC поддерживают терминологические базы данных для использования в стандартизации по следующим адресам:

- платформа онлайн-просмотра ISO: доступна по адресу https://www.iso.org/obp;

- Электропедия IEC: доступна по адресу http://www.electropedia.org/.

3.1 связанный 2-МХПД (bound 2-MCPD): Количество 2-МХПД, полученное после расщепления его эстерифицированных (связанных) форм путем переэтерификации, катализируемой щелочью, в соответствии с эталонным методом.

Примечание - Содержание 2-МХПД вычисляют и выражают как массовую долю в миллиграммах на килограмм (мг/кг).

3.2 связанный 3-МХПД (bound 3-MCPD): Количество 3-МХПД, полученное после расщепления его эстерифицированных (связанных) форм путем переэтерификации, катализируемой щелочью в соответствии с эталонным методом.

Примечание - Содержание 3-МХПД вычисляют и выражают как массовую долю в миллиграммах на килограмм (мг/кг).

3.3 связанный глицидол (bound glycidol): Количество глицидола, полученное после расщепления его эстерифицированных (связанных) форм путем переэтерификации, катализируемой щелочью в соответствии с эталонным методом.

Примечание - Содержание глицидола вычисляют и выражают как массовую долю в миллиграммах на килограмм (мг/кг).

     4 Сущность метода

Пробу масла или жира растворяют в толуоле и трет-бутил-метиловом эфире и добавляют внутренние стандарты (диэфир 3-МХПД- и пентадейтерированный глицидиловый эфир). Затем пробу охлаждают до 10°С и проводят щелочную переэтерификацию посредством добавления раствора метоксида натрия в метаноле. После 12 мин выдерживания при 10°С смесь подкисляют кислым раствором бромида натрия для превращения высвобожденного глицидола в 3-МБПД. Метиловые эфиры жирных кислот, образовавшиеся в ходе переэтерификации, удаляют двойной экстракцией органического слоя. Наконец, очищенную пробу, содержащую расщепленные (свободные) аналиты, дериватизируют фенилборной кислотой перед проведением ГХ-МС/МС анализа.

Количественное определение сложных эфиров 2-МХПД и 3-МХПД основано на соотношении сигналов 2-МХПД/3-МХПД- и 3-МХПД/3-МХПД-, соответственно. Количественное определение сложного эфира глицидола основано на соотношении сигналов 3-МБПД/3-МБПД-d5. Количество 3-МБПД-, образовавшееся после реакции переэтерификации, указывает на количество высвобожденного 3-МХПД-, который разложился до глицидола в условиях щелочной переэтерификации. Поскольку разницы в скоростях разложения между 3-МХПД и 3-МХПД- не наблюдается, последний используется для коррекции завышенной оценки глицидилового эфира, вызванной глицидолом, индуцированным разложением 3-МХПД. В условиях анализа 2-МХПД считается стабильным и таким образом не оказывает заметного влияния на возможную завышенную оценку глицидола [7], [8].

Данный метод позволяет одновременно количественно определить все три аналита в одном анализе.

     5 Реактивы

5.1 Общие положения

ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ - Следует обратить внимание на правила, регламентирующие порядок обращения с опасными веществами. Необходимо соблюдать технические, организационные и личные меры безопасности.

При проведении анализа следует использовать реактивы аналитической степени чистоты, если не указано иное. Вода должна соответствовать требованиям класса 3 ISO 3696.

5.2 Стандартные и контрольные вещества