ГОСТ Р 57481-2017

     

НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ПРОДУКТЫ УБОЯ ПТИЦЫ, ПРОДУКЦИЯ ИЗ МЯСА ПТИЦЫ И ОБЪЕКТЫ ОКРУЖАЮЩЕЙ ПРОИЗВОДСТВЕННОЙ СРЕДЫ

Обнаружение патогенных микроорганизмов (Salmonella spp., L.monocytogenes) методом молекулярного анализа

Poultry slaughtering products, poultry meat products and environmental production objects. Pathogen microorganisms identification (Salmonella spp., L.monocytogenes) by molecular analysis method

     

ОКС 67.120.20

Дата введения 2018-07-01

Предисловие

1 РАЗРАБОТАН Всероссийским научно-исследовательским институтом птицеперерабатывающей промышленности - филиалом Федерального государственного бюджетного научного учреждения Федерального научного центра "Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт птицеводства" Российской академии наук (ВНИИПП)

2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 116 "Продукты переработки птицы, яиц и сублимационной сушки"

3 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 31 мая 2017 г. N 468-ст

4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

5 ПЕРЕИЗДАНИЕ. Август 2018 г.

Правила применения настоящего стандарта установлены в статье 26 Федерального закона от 29 июня 2015 г. N 162-ФЗ "О стандартизации в Российской Федерации". Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном (по состоянию на 1 января текущего года) информационном указателе "Национальные стандарты", а официальный текст изменений и поправок - в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ближайшем выпуске ежемесячного информационного указателя "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет (www.gost.ru)

     1 Область применения

Настоящий стандарт распространяется:

- на продукты убоя птицы (тушки, части тушек, жир-сырец, кожу, субпродукты, мясо птицы механической обвалки, кость птицы пищевую, сырье коллагенсодержащее), полуфабрикаты из мяса птицы, в т.ч. высокой степени готовности, и яичные продукты, предназначенные для пищевых целей (далее - продукт);

- продукцию из мяса птицы и яиц сельскохозяйственной птицы, готовую к употреблению - колбасные, кулинарные изделия, консервы и др. (далее - готовые продукты);

- объекты окружающей производственной среды (технологическое оборудование, тара, инвентарь, стены и полы производственных цехов, воздух в производственных цехах, одежда и поверхность рук работников).

Настоящий стандарт устанавливает молекулярный метод качественного обнаружения патогенных бактерий родов Salmonella spp. и L.monocytogenes на основе технологии петлевой изотермической амплификации ДНК (LAMP) и биолюминесцентной детекции.

     2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 12.1.004 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования

ГОСТ 12.1.007 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ 12.4.009 Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание

ГОСТ OIML R 76-1 Государственная система обеспечения единства измерений. Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания

ГОСТ ISO 7218 Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Общие требования и рекомендации по микробиологическим исследованиям

ГОСТ 7702.2.0 Продукты убоя птицы, полуфабрикаты из мяса птицы и объекты окружающей производственной среды. Методы отбора проб и подготовка к микробиологическим исследованиям

ГОСТ 8756.0 Продукты пищевые консервированные. Отбор проб и подготовка их к испытанию

ГОСТ 9792 Колбасные изделия и продукты из свинины, баранины, говядины и мяса других видов убойных животных и птиц. Правила приемки и методы отбора проб

ГОСТ ISO 16140 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов

ГОСТ 25336 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 27987 Анализаторы жидкости потенциометрические ГСП. Общие технические условия

ГОСТ 28311 Дозаторы медицинские лабораторные. Общие технические требования и методы испытаний

ГОСТ 31468 Мясо птицы, субпродукты и полуфабрикаты из мяса птицы. Метод выявления сальмонелл

ГОСТ 31659 (ISO 6579:2002) Продукты пищевые. Метод выявления бактерий рода Salmonella

ГОСТ 32031 Продукты пищевые. Методы выявления бактерий Listeria monocytogenes

ГОСТ Р 12.1.019 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты

ГОСТ Р 52313 Птицеперерабатывающая промышленность. Продукты пищевые. Термины и определения

Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя "Национальные стандарты" за текущий год. Если заменен ссылочный стандарт, на который дана недатированная ссылка, то рекомендуется использовать действующую версию этого стандарта с учетом всех внесенных в данную версию изменений. Если заменен ссылочный стандарт, на который дана датированная ссылка, то рекомендуется использовать версию этого стандарта с указанным выше годом утверждения (принятия). Если после утверждения настоящего стандарта в ссылочный стандарт, на который дана датированная ссылка, внесено изменение, затрагивающее положение, на которое дана ссылка, то это положение рекомендуется применять без учета данного изменения. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, рекомендуется применять в части, не затрагивающей эту ссылку.

     3 Термины и определения

В настоящем стандарте применены термины по ГОСТ Р 52313, ГОСТ 7702.2.0, ГОСТ 31468, ГОСТ 32031.

     4 Сущность метода

Технология петлевой изотермической амплификации ДНК (LAMP) использует несколько праймеров, которые распознают различные участки гена-мишени бактерий рода Salmonella spp. и L.monocytogenes. Целевая ДНК непрерывно амплифицируется, при этом процесс является высокоспецифичным и быстрым и приводит к появлению более 10 копий ДНК всего за 15 мин. Биолюминесценция применяется для отображения амплификации ДНК патогенных бактерий в режиме реального времени. Она включает в себя двухэтапный ферментативный процесс, в котором молекулы пирофосфата, являющиеся побочным продуктом амплификации ДНК, используются для генерации света. Это свечение затем считывается прибором. Положительные результаты отображаются в режиме реального времени, тогда как отрицательные результаты отображаются по окончании анализа.

Этап предварительного обогащения анализируемых проб является обязательным этапом анализа, обеспечивающим биологическое накопление возбудителей.

     5 Требования безопасности

5.1 Общие требования проведения микробиологических исследований - по ГОСТ ISO 7218, в том числе требования безопасности к работе с микроорганизмами III и IV групп патогенности - по [1], [2].

5.2 При подготовке и проведении анализа необходимо соблюдать требования безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007.

5.3 Помещение, в котором проводят анализ, должно быть оснащено приточно-вытяжной вентиляцией. Работу необходимо проводить, соблюдая правила личной гигиены и противопожарной безопасности в соответствии с требованиями ГОСТ 12.1.004, и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009.

5.4 При работе с электроприборами необходимо соблюдать требования безопасности по ГОСТ Р 12.1.019.

5.5 Требования к персоналу - по ГОСТ ISO 7218.

     6 Аппаратура, оборудование, материалы и реактивы

6.1 Аппаратура, оборудование и материалы - по ГОСТ 7702.2.0 со следующими дополнениями:

- анализатор потенциометрический с погрешностью измерения pH ±0,01 ед.pH по ГОСТ 27987;

- компьютер, совместимый с программным обеспечением прибора для молекулярного анализа;

- система молекулярного анализа в комплекте:

1) прибор для молекулярного анализа (амплификатор),

2) программное обеспечение (ПО),

3) нагревательный блок,

4) охладительный блок,

5) инструмент для запечатывания и распечатывания лизис-пробирок,

6) инструмент для запечатывания и распечатывания реагент-пробирок,

7) штатив для лизис-пробирок,

8) штатив для реагент-пробирок,

- микродозаторы (одноканальные или 8-канальные) пипеточные номинальной вместимостью 20, 50 мм с относительной погрешностью дозирования не более ±1% с соответствующим наконечником по ГОСТ 28311;

- наконечники для микродозаторов с фильтрами 0,5-50 мм;

- пакеты для гомогенизации образцов с фильтром;

- колбы по ГОСТ 25336;

- термостаты электрические для выращивания микроорганизмов с автоматическим терморегулятором, обеспечивающим поддержание температуры от 20°С до 55°С по ГОСТ ISO 7218;

- весы неавтоматического действия по ГОСТ OIML R 76-1 высокого класса точности и пределами допускаемой абсолютной погрешности ±0,001 г;

- баня водяная, поддерживающая температуру до 100°С по ГОСТ ISO 7218;

- термостат твердотельный блочный с автоматическим терморегулятором и таймером, обеспечивающий поддержание температуры до (100±1)°С;

- тест-наборы для обнаружения патогенных бактерий родов Salmonella spp. и L.monocytogenes по документации изготовителя, содержащие:

1) лизис-пробирки с 580 мм раствора для лизиса в каждой пробирке - 96 шт. (12 стрипов по 8 пробирок),

2) реагент-пробирки с лиофилизированной смесью для амплификации - 96 шт. (12 стрипов по 8 пробирок),

3) запасные колпачки для реагент-пробирок - 96 шт.;

4) пробирки для контроля реагентов с лиофилизированной смесью для амплификации и контрольной ДНК - 16 шт.

6.2 Допускается применение других аппаратуры и оборудования с техническими характеристиками, а также материалов по качеству не ниже вышеуказанных.

     7 Подготовка к проведению анализа

7.1 Отбор и подготовка проб - по ГОСТ 7702.2.0, ГОСТ 9792, ГОСТ 8756.0

Для отбора проб окружающей среды используют губку (спонж) или тампон с нейтрализующим раствором, не содержащие антимикробные вещества.

Размер участка пробы для проверки присутствия или отсутствия патогенов на поверхности составляет 100 см (10x10 см). Забирая пробу с помощью губки, покрывают весь участок в двух направлениях (слева направо, затем сверху вниз).

7.2 Подготовка посуды - по ГОСТ 31468.

7.3 Подготовка комплектующих изделий системы молекулярного анализа

7.3.1 Подготовка охладительного блока