• Текст документа
  • Статус
  • Скан-копия
Оглавление
Поиск в тексте
Действующий


ГОСТ ISO 16140-2011

     
     
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

МИКРОБИОЛОГИЯ ПРОДУКТОВ ПИТАНИЯ И КОРМОВ ДЛЯ ЖИВОТНЫХ

Протокол валидации альтернативных методов

Microbiology of food and animal feeding stuffs. Protocol for the validation of alternative methods



МКС 07.100.30

Дата введения 2013-01-01

     
     
Предисловие


Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2009 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены"

Сведения о стандарте

1 ПОДГОТОВЛЕН Государственным научным учреждением "Всероссийский научно-исследовательский институт мясной промышленности имени В.М.Горбатова" Российской Академии сельскохозяйственных наук (ГНУ "ВНИИМП им.В.М.Горбатова" Россельхозакадемии) на основе собственного аутентичного перевода на русский язык международного стандарта, указанного в пункте 4

2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии (Росстандарт)

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 29 ноября 2011 г. N 40)

За принятие проголосовали:

Краткое наименование страны по МК (ИСО 3166) 004 -97

Код страны по МК (ИСО 3166) 004 -97

Сокращенное наименование национального органа по стандартизации

Казахстан

KZ

Госстандарт Республики Казахстан

Киргизия

KG

Кыргызстандарт

Россия

RU

Росстандарт

Таджикистан

TJ

Таджикстандарт


4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 13 декабря 2011 г. N 1474-ст межгосударственный стандарт ГОСТ ISO 16140-2011 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 января 2013 г.

5 Настоящий стандарт идентичен международному стандарту ISO 16140:2003* Microbiology of food and animal feeding stuffs - Protocol for the validation of alternative methods (Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов)
________________
* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым здесь и далее по тексту, можно получить перейдя по ссылке на сайт http://shop.cntd.ru. - Примечание изготовителя базы данных.

Сведения о соответствии межгосударственных стандартов ссылочным международным стандартам и документу приведены в дополнительном приложении ДА.

Степень соответствия - идентичная (IDT).

Стандарт подготовлен на основе применения ГОСТ Р ИСО 16140-2008

6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ


Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

Введение


Необходимость быстрой оценки микробиологических качеств сырья и готовых продуктов, а также микробиологического статуса методов приготовления в пищевой промышленности привела к разработке и усовершенствованию альтернативных методов микробиологического анализа, которые быстрее и/или проще в осуществлении, чем соответствующий стандартный метод, и некоторые из них можно автоматизировать.

Среди альтернативных методов есть такие, которые могут давать результаты, эквивалентные результатам стандартного метода, а результаты других могут заметно отличаться.

Поставщики и разработчики альтернативных методов, производители пищевых продуктов и напитков, службы здравоохранения и другие органы нуждаются в надежном общем протоколе валидации подобных альтернативных методов. Полученные данные могут также стать основой для сертификации метода независимой организацией.

Из-за большого числа методов, использованных лабораторией-организатором в сравнительном исследовании, представленном в настоящем стандарте, процедура не всегда подходит для "внутреннего" метода валидации альтернативного метода, применяемого отдельной лабораторией.

1 Область применения


Настоящий стандарт устанавливает основной принцип и технический протокол валидации альтернативных методов в сфере микробиологического анализа пищевых продуктов, кормов для животных, образцов окружающей среды и ветеринарных образцов (см. 5.1.1.2.1) для:

- валидации альтернативных методов, которые можно использовать, в частности, в рамках официального контроля;

- международного признания результатов, полученных альтернативным методом.

Настоящий стандарт также устанавливает основные принципы сертификации альтернативных методов, основанные на протоколе валидации, определенном в 4.1.

В тех случаях, когда альтернативный метод применяется на постоянной основе для внутрилабораторного использования и не требуется соответствие (более высоким) сторонним критериям контроля качества, может оказаться достаточной менее строгая сравнительная валидация альтернативного метода.

2 Нормативные ссылки


В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты*:
____________
* Таблицу соответствия национальных стандартов международным см. по ссылке. - Примечание изготовителя базы данных.

ISO 3534-1 Statistics - Vocabulary and symbols - Part 1: General statistical terms and terms used in probability (Статистика. Словарь и условные обозначения. Часть 1. Общие статистические термины и термины, используемые в теории вероятности)

ISO 5725 (все части) Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and results (Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений)

ISO/TS 11133-1 Microbiology of food and animal feeding stuffs - Guidelines on preparation and production of culture media - Part 1: General guidelines on quality assurance for the preparation of culture media in the laboratory (Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Руководящие указания по приготовлению и производству культуральных сред. Часть 1. Общие руководящие указания по обеспечению качества приготовления культуральных сред в лаборатории)

3 Термины и определения


В настоящем стандарте применены следующие термины и соответствующие определения:

3.1 альтернативный метод (alternative): Метод анализа, обеспечивающий для продуктов данной категории обнаружение или оценку такого же аналита (3.4), какой измеряют с помощью соответствующего референтного метода (3.2).

Примечание 1 - Метод может быть патентованным или некоммерческим и не обязательно должен включать всю процедуру анализа от приготовления образцов до отчета об испытании.

Примечание 2 - Альтернативный метод должен обладать качествами, соответствующими нуждам пользователя, например:

- быстродействие проведения анализа и/или получения результата;

- простота выполнения и/или автоматизации;

- аналитические качества (прецизионность, точность, предел обнаружения и т.д.);

- миниатюризация;

- снижение затрат.

Примечание 3 - Термин "альтернативный" применяется для общего обозначения "процедуры испытания и реакционной системы". Этот термин включает в себя все компоненты - материальные и иные, необходимые для реализации метода.

3.2 референтный метод (reference): Принятый на международном уровне и широко применяемый метод.

Примечание - В настоящем стандарте под стандартным методом подразумеваются международные и европейские стандарты, а в случае их отсутствия - подходящие национальные стандарты эквивалентного статуса.

3.3 валидация альтернативного метода (validation of an alternative method): Процедура подтверждения соответствия того, что результаты, полученные альтернативным методом, сравнимы с результатами, полученными стандартным методом.

Примечание - Термин "сравнимы" определяется в настоящем стандарте техническим протоколом, адаптированным для метода каждого типа (см. разделы 5 и 6).

3.4 аналит (analyte): Компонент, измеряемый данным методом анализа. Это может быть микроорганизм.

3.5 качественный метод (qualitative method): Метод анализа, результатом которого является установление наличия или отсутствия аналита (3.4), обнаруживаемого прямо или косвенно в определенном количестве образца.

3.6 количественный метод (quantitative method): Метод анализа, результатом которого является количество аналита (3.4), измеренное прямо (подсчет по массе или объему) или косвенно (поглощение цвета, импеданс и т.д.) в определенном количестве образца.

3.7 сравнительное исследование методов (methods comparison study): Исследование, проводимое лабораторией-организатором, целью которого является сравнение альтернативного метода со стандартным методом.

3.8 межлабораторное исследование (inter-laboratory study): Исследование рабочих характеристик метода с использованием одних и тех же образцов в нескольких лабораториях под контролем лаборатории-организатора.

3.9 лаборатория-организатор (organising laboratory): Лаборатория с квалифицированными сотрудниками, имеющими опыт проведения сравнительного исследования и организации межлабораторного исследования.

Примечание - Для анализа результатов необходимо участие квалифицированного специалиста по статистическим исследованиям.

4 Общие принципы валидации и сертификации альтернативных методов

4.1 Протокол валидации

Протокол валидации включает в себя два этапа:

- сравнительное исследование (3.7) альтернативного (3.1) и референтного (3.2) методов в лаборатории-организаторе;

- межлабораторное исследование (3.8) каждого из двух методов.

Если это возможно, оба проводят параллельно.

Технические правила проведения сравнительного исследования методов и межлабораторного исследования представлены в разделах 5 и 6 соответственно в зависимости от того, является ли альтернативный метод качественным или количественным.

Если альтернативный метод прошел валидацию и соответствует требованиям другой организации, то для процедуры признания таких результатов предусмотрены специальные правила, приведенные в приложении А.

4.2 Принципы сертификации

4.2.1 При последующей сертификации альтернативного метода применяют (в дополнение к 4.1) два следующих принципа.

Подробные сведения о проведении сертификации (управление сравнительным исследованием методов и межлабораторным исследованием, перечень организаций, участвующих в процессе, включая экспертную лабораторию, называемую в настоящем стандарте "лабораторией-организатором", и приглашенных экспертов, сертифицирующий орган и т.д.) предоставляются сертифицирующим органом.

4.2.2 Изготовитель должен использовать систему качества, охватывающую весь ряд продукции, подлежащей сертификации и основанную на соответствующем стандарте, относящемся к системам качества (см. ISO 9001).

При выдаче сертификата сертифицирующая организация должна учитывать наличие сертификата системы качества, выданного сертифицирующим органом, аккредитованным в сфере систем качества.

4.2.3 После выдачи сертификата должна проводиться регулярная проверка качества сертифицированного метода. Должен регулярно проводиться аудит для установления соответствия:

- требованиям обеспечения качества (см. 4.2.1);

- требованиям контроля производства продукции (см. 4.2.1).

В дополнение к общим требованиям системы качества изготовитель регулярно предъявляет сертифицирующей организации обновленную документацию, учитывающую все изменения, внесенные в продукт или в процесс производства, которые могут отразиться на инструкциях по использованию метода и/или на рабочих характеристиках метода. После этого сертифицирующая организация решает, влияют ли внесенные изменения на результаты сертификации.

5 Качественные методы. Технический протокол валидации

5.1 Сравнительное исследование методов

5.1.1 Относительная точность, относительная специфичность и относительная чувствительность

5.1.1.1 Термины и определения

В рамках данного стандарта используются следующие термины и определения:

5.1.1.1.1 относительная точность (ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов) (relative accuracy): Степень соответствия между результатом, полученным стандартным методом, и результатом, полученным альтернативным методом, при исследовании идентичных образцовГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов (см. 5.1.1.3.1).
_________________
ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов Труднодостижимо, если различаются этапы предварительного обогащения.


Примечание - Термин "относительная точность", используемый в настоящем стандарте, является дополнительным к терминам "точность" и "правильность", как они определены в ISO 5725-1 и в ISO 3534-1. В этих стандартах указывается, что точность - это "степень близости результата испытания и принятого опорного значения" и что правильность - это "степень близости среднего значения большого числа результатов испытания и принятого опорного значения". В настоящем стандарте в качестве принятого опорного значения выбрано значение, получаемое референтным методом. Таким образом, термин "относительный" указывает на то, что стандартный метод автоматически не дает принятое опорное значение.

5.1.1.1.2 положительное отклонение (ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов) (positive deviation): Альтернативный метод "ложноположителен", когда он показывает положительное отклонение, (т.е. получен положительный результат), в то время как стандартный метод дает отрицательный результат.

Положительное отклонение становится ложноположительным результатом, когда можно доказать, что истинный результат отрицателен.

Положительное отклонение считается "истинно положительным", когда можно доказать, что истинный результат положителен.

5.1.1.1.3 отрицательное отклонение (ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов) (negative deviation): Альтернативный метод показывает отрицательное отклонение (т.е. получен отрицательный результат), в то время как референтный метод дает положительный результат.

Отрицательное отклонение считается "ложноотрицательным", когда можно доказать, что истинный результат положителен.

5.1.1.2.4 относительная чувствительность (ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов) (relative sensitivity): Способность альтернативного метода обнаруживать аналит, когда его обнаруживает референтный метод (см. 5.1.1.3.1).

5.1.1.2.5 относительная специфичность (ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов) (relative specificity): Способность альтернативного метода не обнаруживать микроорганизм тогда же, когда его не обнаруживает референтный метод (см. 5.1.1.3.1).

5.1.1.2 Протокол измерений

5.1.1.2.1 Образцы пищевых продуктов

Для оценки чрезвычайно важно отобрать образцы пищевых продуктов, естественно контаминированные аналитом, подлежащим обнаружению при валидации.

Если метод нужно оценить для всех пищевых продуктов, то нужно изучить пять категорий пищевых продуктов. По просьбе изготовителя, это число категорий можно снизить до одной, двух, трех или четырех, если валидация альтернативного метода ограничена такими указанными категориями. Рекомендованные категории перечислены в приложении В.

Подходящие образцы окружающей среды также могут быть включены в качестве одной из категорий. Ветеринарные образцы можно считать еще одной категорией (см. приложение В).

Желательно, чтобы образцы пищевых продуктов происходили из как можно более широкой зоны распространения для уменьшения искажения, связанного со спецификой местной пищи, и для расширения диапазона валидации.

При анализе естественно контаминированных образцов диапазон и распределение контаминации образцов должны представлять все уровни, обычно присутствующие в этих продуктах, с упором на меньшее значение.

Если невозможно получить достаточное количество естественно контаминированных пищевых продуктов каждой категории, то допустимо использование искусственно контаминированных образцов. Метод и уровни искусственной контаминации должны обеспечивать подобие характеристик полученных образцов характеристикам естественно контаминированных образцов (см. методы инокуляции и ограничения в приложении С).

5.1.1.2.2 Число образцов

Суммарное число испытательных подобразцов для анализа равно 60 для каждой пищевой категории, выбранной из списка, приведенного в приложении В. Внутри каждой категории выбирают представительные типы пищевых продуктов и анализируют 20 испытательных подобразцов пищевого продукта каждого типа предлагаемым методом и референтным методом для получения минимум 60 результатов для каждой категории каждым методом. Для естественно контаминированных типов пищевых продуктов готовят образец, как описано в приложении D. Для искусственно контаминированных типов пищевых продуктов подстраивают уровни инокуляции таким образом, чтобы достичь частичного положительного выделения микроорганизмов в анализируемых испытательных подобразцах хотя бы одним из методов. Частичное выделение микроорганизмов достигается, когда в некотором числе, но не во всех, испытательных подобразцах обнаруживается положительный результат одним или обоими методами, альтернативным или референтным.

Желательно получить примерно 50% положительных результатов и 50% отрицательных. Это рекомендация, а не абсолютно требуемое процентное соотношение, при условии, что некоторое число испытательных подобразцов "положительно", а часть - "отрицательны" для одного и того же типа пищевого продукта.

5.1.1.2.3 Приготовление испытательных образцов

Референтный и альтернативный методы должны быть проведены, насколько это возможно, на одном и том же образце.

Так, если первая стадия обоих методов одинакова (например, тот же самый предварительно обогащенный бульон), то проводят репликацию на второй стадии (приложение D, случай 1).

В случае, когда первоначальная культуральная среда, методология или растворы различаются, готовят парные испытательные подобразцы для анализа. Имеются два основных метода для таких процедур приготовления.

В первом случае смешивают двойную навеску образца с равной по весу или объему навеской стерильной воды или другого подходящего разбавителя и тщательно гомогенизируют. Затем разделяют ее на два подобразца, обращая особое внимание на увеличение концентрации первичного обогащения примерно на 10% для компенсации эффекта разбавления разбавленного гомогенизированного образца (приложение D, случай 2).

Во втором случае непосредственно засевают образец пищевого продукта начальным посевным материалом в количестве, достаточном для получения частичного выделения микроорганизмов из анализируемых испытательных подобразцов хотя бы одним методом после того, как микроорганизмы пришли в состояние равновесия в образце пищевого продукта. Потом приготовляют испытательные подобразцы весом в 25 г и процедуру продолжают так, как описано в приложении D. Такая процедура предпочтительна для жидких продуктов, но может быть применима и для пищевого продукта любого типа при условии, что пищевой продукт тщательно гомогенизирован.

5.1.1.3 Вычисления и интерпретация результатов

5.1.1.3.1 Обработка данных

Парные данные референтного и альтернативного методов заносят в таблицу и вычисляют следующие параметры для каждой категории пищевого продукта (60 образцов), как указано в таблице 1.


Таблица 1 - Парные результаты референтного и альтернативного методов

Результаты

Референтный метод положителен (ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов)

Референтный метод отрицателен (ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов)

Альтернативный метод положителен (ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов)

+/+ положительное согласование (ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов)

-/+ положительное отклонение (ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов)

Альтернативный метод отрицателен (ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов)

+/- отрицательное отклонение (ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов) (ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов)

-/- отрицательное согласование (ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов)



Вычисления должны проводиться на ряде отрицательных результатов, полученных стандартным методом, число которых для результатов из таблицы 1 не может превышать удвоенное число положительных результатов. При необходимости можно выбирать отрицательные результаты, непосредственно следующие за положительным результатом, в порядке анализа образцов.

Используются три следующих критерия:

Относительная точность (ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов):

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов%.


Относительная специфичность (ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов):

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов%.


Относительная чувствительность (ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов):

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов%,



где ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов - суммарное число образцов (ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов);

(Положительное отклонение (ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов), отрицательное отклонение (ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов), отрицательное согласование (ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов), положительное согласование (ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов));

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов - суммарное число отрицательных результатов для референтного метода (ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов);

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов - суммарное число положительных результатов для референтного метода (ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов).

5.1.1.3.2 Доверительные интервалы

Вычисление доверительных интервалов, связанных с числом испытанных образцов, приведено в приложении Е.

5.1.1.3.3 Несовпадающие результаты

Проверяют несовпадающие результаты, как описано в приложении F [критерий МакНемара (McNemar)], используя подсчет ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов и ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов (см. 5.1.1.3.1).

Когда значения ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов и ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов высоки и практически одинаковы, критерий МакНемара не позволяет установить статистическое различие между методами. В таком случае лаборатория-организатор должна постараться выяснить причины высоких значений ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов и ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов. Более того, из вышесказанного следует, что относительную точность метода нельзя интерпретировать, используя только критерий МакНемара.

5.1.1.3.4 Сводка вычислений

Все вычисления должны быть представлены в форме таблицы 2.


Таблица 2 - Вычисление относительной точности, относительной чувствительности и относительной специфичности

Матрицы

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов

Сумма

Относительная точность АС (%)

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов

Относи-
тельная чувстви-
тельность ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов (%)

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов

Относи-
тельная специфич-
ность ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов (%)

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов

Пищевая категория 1

Пищевая категория 2

Пищевая категория 3

Пищевая категория 4

Пищевая категория 5

ВСЕГО


5.1.1.3.5 Интерпретация результатов

Нужно сформировать таблицу, включающую необработанные результаты (то есть все положительные и отрицательные результаты из таблицы 1).

На основании числа положительных отклонений и числа отрицательных отклонений оценивают возможность альтернативного метода получать большее или меньшее число истинно положительных результатов, чем референтным методом.

В отчете об исследовании результаты, полученные с естественно контаминированными и искусственно контаминированными образцами, должны быть представлены раздельно.

Процедура искусственной контаминации испытательных образцов должна быть описана в отчете об исследовании.

Данные, опубликованные в других источниках и соответствующие условиям, указанным в приложении А, можно использовать для оценки относительной точности.

5.1.2 Относительный уровень обнаружения

5.1.2.1 Определение

В рамках данного стандарта под относительным уровнем обнаружения понимают наименьшее число культивируемых микроорганизмов (3.4), которое может быть обнаружено в образце в 50% случаев альтернативным и референтным методами.

5.1.2.2 Протокол измерений

Испытание проводят следующим образом:

- используют один пищевой продукт из каждой пищевой категории, выбранной по 5.1.1.2.1, с учетом области применения валидации (см. приложение В);

- используют пять разных целевых микроорганизмов (или меньше с учетом области применения валидации), каждый из которых предназначен для одной пищевой категории, если это возможно (определение целевых микроорганизмов приведено в приложении G.1);

- предпочтительно проводят испытания для пяти уровней (но минимум для трех уровней) по одному целевому микроорганизму на каждый пищевой продукт, включая отрицательный контрольный образец и т.д. Первым уровнем должен служить отрицательный контрольный образец. Вторым уровнем должен быть теоретический уровень обнаружения. Третий уровень - немного выше теоретического порога обнаружения, и все последующие уровни должны быть выше предыдущего. Можно использовать последовательные верхние уровни с концентрациями, разнящимися множителем, приблизительно равным 3;

- воспроизводят каждую комбинацию (пищевой продукт, уровень контаминации) шесть раз для испытания и альтернативным и референтным методами. Проводят разделение на уровне, где методы отличаются, как показано в приложении D. Таким образом, если этап 1 обоих методов одинаков (например, тот же предварительно обогащенный бульон), проводят разделение на этапе 2 (см. приложение D, случай 1). Если первый этап не одинаков, то есть культуральная среда, методология или степень разведения различаются, то смешивают удвоенную массу образца с равным по массе или объему количеством стерильной воды или другого подходящего разбавителя, а потом разделяют на два подобразца;

- используют полную процедуру альтернативного и референтного методов, включая подготовку образца. Засев каждого пищевого образца можно проводить до или после добавления культуральной среды.

Если нужно, то для обеспечения лучшей прецизионности на самом нижнем уровне посевного материала увеличивают массу пищевого образца или число реплик образцов. Например, можно использовать 75 г пищевого образца, контаминированного тремя клетками, вместо 25 г образца, контаминированного одной клеткой.

Чем больше число использованных уровней засева, тем точнее определение порога обнаружения.

5.1.2.3 Вычисления

Для каждого уровня ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов (ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов от 0 до 3) и каждой комбинации пищевой продукт/штамм (ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов от 1 до 5) сравнивают оба метода, как указано в таблице 3.


Таблица 3 - Вычисление относительного уровня обнаружения

Метод

Результаты

Отрицательные (-)

Положительные (+)

Всего

Референтный

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов

Альтернативный

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов

Всего

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов



Для таблиц малого размера 2 на 2 использовать точные критерии Фишера.

5.1.2.4 Сравнения

Чтобы не проводить сравнение обоих методов на каждом уровне и для каждого продукта и штамма, можно использовать одно и то же испытание при сравнении двух продуктов/штаммов на одном и том же уровне.

Если есть основания считать, что продукт и штаммы сравнимы, то такое же испытание можно провести при ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов>6 с объединением продукта/штаммов для каждого уровня ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов.

Уровни тоже можно объединять для проверок, но используя при этом ранжирование: ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов,ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов,ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов,ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов,ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов,ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов,..., как с объединением продукта/штаммов, так и без объединения.

В отчете указать все существенные различия между методами, продуктами/штаммами и/или уровнями.

5.1.2.5 Интерпретация результатов

Интерпретацию проводит лаборатория-организатор, на которую возложена ответственность за изучение методов сравнения.

Относительный уровень обнаружения лежит между двумя уровнями контаминирования, дающими соответственно уровень обнаружения менее и более 50%. Поэтому относительный уровень обнаружения представляют диапазоном.

5.1.3 Инклюзивность и эксклюзивность

5.1.3.1 Определение

Инклюзивность - это способность обнаружения с помощью альтернативного метода целевого аналита в широком диапазоне штаммов.

Эксклюзивность - это отсутствие интерференции от уместного для альтернативного метода диапазона нецелевых штаммов.

5.1.3.2 Протокол измерений

5.1.3.2.1 Выбор испытательных штаммов

5.1.3.2.1.1 Общие требования

Для устранения локальных отклонений используют диапазон микроорганизмов или штаммов.

Критерии для выбора испытательных штаммов приведены в приложении G.

Для каждого штамма должны быть приведены биохимические, серологические, а если уместно, то и генетические характеристики, подробные в степени, достаточной для установления их идентичности, и предпочтительно, чтобы штамм был изолирован от продукта. Кроме того, материал продукта, из которого он был выделен первоначально, должен быть известен и документирован.

5.1.3.2.1.2 Целевые микроорганизмы

Выбирают не менее 50 чистых культур микроорганизмов, подходящих для альтернативного метода и используемого пищевого продукта (см. G.3), за исключением случая Salmonella (сальмонеллы).

В случае методов для Salmonella выбирают не менее 30 чистых культур или микроорганизмов.

5.1.3.2.1.3 Нецелевые микроорганизмы

Выбирают не менее 30 чистых культур микроорганизмов из числа тех штаммов, что заведомо приводят к интерференции с целевыми микроорганизмами, и из числа штаммов, естественно содержащихся в каждом материале испытуемого продукта, включенного в валидацию (см. G.4).

5.1.3.2.2 Инокуляция

5.1.3.2.2.1 Общие требования

Каждое испытание производится однократно. Засев питательной среды производят с помощью разбавления чистой культуры каждого испытательного штамма. Образец продукта не добавляют.

5.1.3.2.2.2 Целевые микроорганизмы

Уровень засеваемой культуры должен быть в 10-100 раз больше минимального относительного уровня обнаружения для альтернативного метода. При этом нужно использовать полный протокол альтернативного метода, включая, если это необходимо, предварительное обогащение. В случае получения ложноотрицательных или сомнительных результатов штаммы нужно испытать повторно с привлечением референтного метода.

5.1.3.2.2.3 Нецелевые микроорганизмы

Уровень засеваемой культуры должен быть близок к наибольшему уровню контаминации, который ожидают обнаружить во всех категориях используемых продуктов.

Необходимо установить наличие эксклюзивности. Если конечная питательная среда культуральной среды представляет собой избирательную жидкую питательную среду (бульон), то такую среду заменяют на подходящую неизбирательную жидкую питательную среду. Если альтернативный метод дает положительные или сомнительные результаты с нецелевыми микроорганизмами, то испытание повторяют с использованием полного протокола. Измерения референтным методом проводят только один раз.

5.1.3.3 Представление результатов

Результаты представляют в виде таблицы 4.


Таблица 4 - Представление результатов по избирательности

Микроорганизмы

Результаты

Референтный метод

Альтернативный метод

Ожидаемый результат

Действительный результат

Ожидаемый результат

Действительный результат

Целевые штаммы

1

2

и т.д.

Нецелевые штаммы

1

2

и т.д.


5.1.3.4 Интерпретация результатов

Интерпретацию проводит лаборатория, на которую возложена ответственность за сравнительное изучение методов, причем в расчет должны приниматься как количественные, так и качественные аспекты (т.е. болезнетворность, распространенность, культуральные аспекты испытательных штаммов, например, подвижность, чувствительность к неблагоприятным факторам и т.д.).

Другие опубликованные данные по альтернативному методу, удовлетворяющие требованиям настоящего стандарта, также могут быть использованы лабораторией, отвечающей за сравнительное изучение методов, для получения дополнительной информации о вышеупомянутых критериях (см. приложение А, содержащее критерии признания сторонних результатов).

5.2 Межлабораторное исследование

Целью межлабораторного исследования является установление изменчивости результатов, полученных разными лабораториями при использовании идентичных образцов, и сравнение этих результатов с результатами, полученными при сравнительном исследовании методов.

5.2.1 Протокол измерений

5.2.1.1 Межлабораторное исследование должно включать в себя минимум 10 сотрудничающих лабораторий, результаты которых не содержат выбросы.

Указания и требования по организации, координации и проведению межлабораторных исследований приведены в приложении Н.

Необходимо, чтобы специалист по анализу результатов из каждой сотрудничающей лаборатории проявил достаточную компетентность в применении альтернативного и референтного методов до участия в самом исследовании.

5.2.1.2 Протокол включает следующие требования:

- для приготовления испытательных образцов используют одну подходящую пищевую матрицу (приложение В);

- протокол искусственной контаминации пищевого образца должен соответствовать выбранному пищевому субстрату. Каждый образец должен быть засеян индивидуально. Каждая "слепая" копия (реплика) должна быть приготовлена так, чтобы гарантировать гомогенность образцов при индивидуальном засеве каждой копии. Для установления гомогенности необходимо проанализировать соответствующее число образцов (см. приложение Н);

- необходимо использовать по меньшей мере три разных уровня контаминации: первым уровнем ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов должен быть отрицательный контрольный уровень, один уровень ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов должен быть немного больше уровня обнаружения альтернативного метода и один уровень ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов должен быть примерно в 10 раз больше уровня обнаружения (например, 0; 3 и 30 клеток / 25 г);

- каждая сотрудничающая лаборатория должна проанализировать по меньшей мере 8 "слепых" копий на каждом уровне контаминации референтным и альтернативным методами;

- для анализа готовят суспензию из каждого образца;

- анализ образцов должен быть проведен в каждой лаборатории в установленный день;

- исследуемые образцы культивируют в соответствии с приложением J. Так, если первый этап культивирования одинаков и для референтного, и для альтернативного методов, эту культуру используют для засева на каждом из последующих этапов (приложение J, случай 1). Если первичные культуры для каждого метода различны, то соответствующие реплики используют для индивидуального выполнения каждого метода (приложение J, случай 2);

- в любом случае комбинация "число уровней контаминации/число реплик/число выбранных лабораторий" должна быть подобрана так, чтобы для вычислений имелось не менее 480 результатов (по 240 для каждого метода).

5.2.1.3 Лаборатория-организатор на основании всех полученных данных (см. приложение Н.3) должна определить, какие результаты являются годными, а какие результаты являются выбросами, для должного учета при вычислении данных о точности. Смотри приложение K, в котором приведены рекомендации, определяющие микробиологические условия для отбраковки данных.

ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ - Результаты лабораторий-участников не следует исключать, если нет четкого объяснения имеющихся грубых ошибок.

5.2.2 Вычисления

5.2.2.1 Для каждого уровня положительные результаты для каждого метода внести в таблицы 5 и 6.


Таблица 5 - Положительные результаты для стандартного метода

Лаборатории

Уровень контаминации

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов

Лаборатория 1

/8

/8

/8

Лаборатория 2

/8

/8

/8

Лаборатория 3

/8

/8

/8

и т.д.

/8

/8

/8

Всего

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов Ложноположительные по референтному методу.

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов Истинно положительные на уровне 1 по референтному методу.

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов Истинно положительные на уровне 2 по референтному методу.



Таблица 6 - Положительные результаты для альтернативного метода

Лаборатории

Уровень контаминации

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов

Лаборатория 1

/8

/8

/8

Лаборатория 2

/8

/8

/8

Лаборатория 3

/8

/8

/8

и т.д.

/8

/8

/8

Всего

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов Ложноположительные по альтернативному методу.

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов Истинно положительные на уровне 1 по альтернативному методу.

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов Истинно положительные на уровне 2 по альтернативному методу.


5.2.2.2 Для уровня ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов и для каждого метода вычислить выраженную в процентах специфичность ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов по формуле

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов%,


где ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов - общее число всех испытаний для уровня ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов;

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов - число ложноположительных результатов.

5.2.2.3 Для каждого уровня контаминации и для каждого метода вычислить выраженную в процентах чувствительность ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов по формуле

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов%,

где ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов - общее число всех испытаний для уровней ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов и ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов, соответственно;

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов - число истинно положительных результатов.

5.2.2.4 Для каждого уровня контаминации и совокупности результатов сравнивают альтернативный метод с референтным методом для вычисления относительной точности и для изучения несовпадающих результатов.

Каждую пару результатов, полученных на образце, измеренном альтернативным и стандартным методами, представляют в таблице 7.


Таблица 7 - Парные результаты альтернативного и референтного методов, полученные в межлабораторном исследовании

Альтернативный метод

Референтный метод

Всего

+

+

-

+

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов

-

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов

Всего

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов



Вычисляют относительную точность ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов, выраженную в процентах, по формуле

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов%,


где ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов - число испытанных образцов (для уровня ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов или для всех уровней);

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов - число положительных согласований (positive agreement);

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов - число отрицательных согласований (negative agreement).

5.2.2.5 Вычислить доверительные интервалы для каждого соотношения (см. 5.1.1.3.2).

5.2.2.6 Изучить несовпадающие результаты в соответствии с приложением F, используя результаты подсчета ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов и ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов (см. таблицу 8).

5.2.3 Интерпретация

Сравнивают ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов (таблица 7), ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов и ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов (таблицы 5 и 6) с соответствующими им данными, полученными в сравнительном исследовании, включая естественно контаминированные образцы и относительный уровень обнаружения.

Эти критерии на самом деле не характеризуют внутрилабораторные и межлабораторные изменчивости метода (понятия повторяемости и воспроизводимости). В приложении L приведены дополнительные критерии (согласованность результатов в одной лаборатории, соответствие результатов в разных лабораториях и коэффициент расхождения между согласованностью и соответствием), которые можно использовать при изучении такой изменчивости (критерии повторяемости и воспроизводимости определены для количественных методов, и их как таковые нельзя использовать применительно к качественным методам).

6 Количественные методы. Технический протокол валидации

6.1 Общие требования

Число колоний микроорганизмов в данном образце является наиболее распространенным результатом стандартных количественных методов. Записывают всю информацию - массу образца, серию разбавления, объем посевного материала и число колоний при каждом разбавлении. В микробиологии эти дискретные данные часто сокращают, например, проводят подсчет колоний только в чашках, содержащих менее 300 колоний, потом для получения конечного результата используют коэффициент расширения, обратно пропорциональный коэффициенту разбавления. Из-за наличия других факторов, влияющих на процесс роста микроорганизмов, а также в целях получения симметричного распределения или квазинормального распределения данные подсчета часто преобразуют в логарифмический вид или в значения квадратного корня. Целесообразность такого преобразования можно проверить, используя гистограммы с набором экспериментальных точек (30 или более), полученных при одинаковых условиях.

Разделы 6.2 и 6.3, в основном, относятся к валидации количественных методов сбора непрерывных данных (или данных в интервале значений), при этом отдельно включены замечания по подсчету числа микроорганизмов.

6.2 Сравнительное исследование методов

6.2.1 Линейность и относительная точность

6.2.1.1 Определения

6.2.1.1.1 линейность (linearity): Способность метода при использовании с заданной матрицей давать результаты, пропорциональные количеству аналита в образце, т.е. увеличению аналита соответствует линейное или пропорциональное увеличение результатов.

Примечание 1 - Характеристику результата или сигнальную функцию получают путем измерения зависимости сигнала или результата метода от концентрации аналита (доз) в различных образцах референтных материалов (ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов) с известными характеристиками. В микробиологии, где стабильный референтный материал практически отсутствует, эти "известные характеристики" можно получить путем многократных повторных измерений с использованием референтного метода.

После подгонки, сглаживания или обработки другим алгоритмом данных разработчик альтернативного метода должен создать монотонную модель во всей области применения метода для преобразования результатов измерений в значения, наиболее близкие к стандартным результатам. Подгоночная модель является первой (или исходной) градуировочной характеристикой и включает все градуировочные коэффициенты в области концентраций; она часто нелинейна. Но эти аспекты не включены в процедуру валидации.

Частью процедуры валидации является проверка градуировки, которая дает конечную градуировочную характеристику, устанавливающую соотношение между преобразованными результатами измерений и соответствующими "стандартными значениями"ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов в одинаковой системе единиц. При использовании одинаковых шкал на осях эта характеристика должна быть линейной с отсекаемым на оси отрезком, равным нулю (одинаковыми наименьшими значениями), и наклоном 1 (при одинаковых масштабных единицах по осям) и правильно оцененными характеристиками разброса.
_________________
ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов Их получают по стандартному методу с естественно контаминированными образцами, если недоступны референтные материалы и известные значения.


Не следует проводить экстраполяцию выше и ниже испытательных концентраций, кроме случаев, когда нужно изучить поведение вблизи "нулевой" концентрации.

Примечание 2 - При обработке результатов подсчетов микроорганизмов с помощью метода регрессии линейность не всегда правильно достигается для результатов подсчета, соответствующих низким уровням или широким диапазонам. Такие результаты подсчетов имеют квазипуассоновские распределения со среднеквадратическим отклонением воспроизводимости, пропорциональным корню квадратному из среднего подсчитанного числа микроорганизмов. При этом возникают те же трудности оценки, которые упомянуты в примечании к пункту 6.2.2.1.

6.2.1.1.2 точность (accuracy): Близость результатов испытания к принятому опорному значению величины (ISO 3534-1).

Примечание - Термин "точность", когда он относится к серии результатов испытаний, включает в себя сочетание случайных составляющих и общей систематической погрешности (смещения).

6.2.1.1.3 смещение (систематическая погрешность) (bias): Разность между математически ожидаемым результатом испытания и принятым опорным значением (ISO 3534-1).

Примечание - Смещение есть полная систематическая погрешность в отличие от случайной погрешности. Могут быть одна или несколько составляющих систематической погрешности, дающих вклад в смещение. Большему систематическому отклонению от принятого опорного значения соответствует большее значение систематической погрешности.

6.2.1.1.4 относительная точность (ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов) (relative accuracy): Степень соответствия между результатом, полученным референтным методом, и результатом, полученным альтернативным методом, при исследовании идентичных образцов (см. 5.1.1.1.1).

6.2.1.2 Протокол измерений

6.2.1.2.1 План

Для проверки градуировочной характеристики требуется большое число различных образцов (при возможности, референтные материалы - см. приложение С) и исследование нескольких уровней (доз или концентраций) в зависимости от диапазона концентраций для практического использования.

Для определения градуировочной характеристики требуется использование минимум пяти различных уровней аналита для каждого типа пищевого продукта. Уровни должны равномерно распределяться по всему исследуемому диапазонуГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов, включающему минимальный (равный или не равный нулю), центральный, максимальный и два промежуточных уровня. Шкалу следует выбрать до того, как выбраны уровни концентрации, и с учетом диапазона контаминации и ожидаемого предела обнаружения (ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов): линейную - для небольших диапазонов (например, ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов или от ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов до ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов), включающих ноль, и логарифмическую - для широких диапазонов (например, ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов). При этом может измениться соотношение между среднеквадратическими отклонениями и средними значениями результатов (см. примечание в п.6.2.1.3.1).
_________________
ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов Графические примеры неприемлемых и приемлемых распределений результатов измерений приведены в приложении Р.


Приоритет отдается естественно контаминированным образцам. Термин "уровень" используется в значении концентрации аналита, предполагаемой априори. В принципе, оптимальный план для регрессионного анализа получают путем выбора подходящего и уместного диапазона концентраций аналита, исключения исследования образцов с аналогичными подсчетами микроорганизмов или исключения повторяющихся данных с одинаковыми результатами. Для жидкостей диапазон может быть получен путем разведений, но необходимо обеспечить гомогенность как жидких, так и твердых образцов.

Образцы на одном уровне должны быть независимо продублированы путем подготовки подобразцов. На каждом уровне анализируют одинаковое число подобразцов - по меньшей мере два, а в идеальном случае - от 5 до 10. Когда и в референтном, и в альтернативном методах используют одни и те же десятикратные разведения подобразцов, испытания дублируют на уровне чашек Петри (см. случай 1 приложения М). Когда десятикратные разбавления нужно проводить только в референтном методе, проводят исследование дублирующих образцов (см. случай 2 приложения М).

Чашки Петри в двух дупликациях засевают каждым десятикратным разбавлением.

Следовательно, для проверки градуировочной характеристики альтернативным методом проводят минимум 10 измерений (в идеальном случае - от 25 до 50 измерений) с использованием естественно контаминированных образцов.

При отсутствии референтных материалов невозможно корректно оценить точность альтернативного метода, и определяют только относительную точность путем измерения тех же подобразцов референтным методом.

6.2.1.2.2 Категории пищевых продуктов

Исследуют 5 категорий пищевых продуктов. Это число можно уменьшить до 1, 2 или 3 категорий, если альтернативный метод подлежит валидации только для такой заявленной категории (например, молочные продукты). Рекомендованные категории перечислены в приложении В.

Соответствующие образцы должны быть естественно контаминированы исследуемым аналитом.

В случае возможности использования образцов окружающей среды их нужно считать отдельной категорией (см. приложение В).

Желательно, чтобы образцы пищевых продуктов происходили из как можно более широкой зоны распространения, для того чтобы уменьшить смещения, обусловленные особенностями местного пищевого ассортимента, и расширить диапазон валидации.

Диапазон контаминации должен быть распространен на весь диапазон количественного испытания.

Если невозможно получить достаточное число естественно контаминированных образцов пищевых продуктов с нужными уровнями, то допустима искусственная контаминация некоторых образцов. Такие образцы должны составлять меньшинство в общем числе испытуемых образцов. Процедура искусственной контаминации должна обеспечивать получение образцов с характеристиками аналита, подобным таковым для естественно контаминированных образцов (см. приложение С, 2-й и 3-й случаи).

Таким образом, для каждой из пяти пищевых категорий и референтным, и альтернативным методами измеряют минимум пять уровней целевого аналита, причем каждый образец реплицируется одинаковое число раз (от 2 до 10), что составляет всего от 10 до 50 измерений для каждых метода и пищевой категории. Если полученные результаты дают основания полагать, что матрица негомогенна или по составу ее компонентов или из-за вариаций в концентрации целевого аналита по матрице, то необходимо провести исследование дополнительных образцов.

После раздельной оценки по каждой пищевой категории глобальная оценка градуировочной характеристики для всех категорий пищевых продуктов является полезным инструментом для идентификации возможных расхождений между областью применения, точностью и разбросом повторяемости во всем диапазоне аналита.

6.2.1.3 Вычисления

6.2.1.3.1 Общие требования

Перед тем как проводить какие-либо вычисления, строят график значений, представленных двумерными точками, для каждого образца для референтного и альтернативного методов, используя ось ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов (вертикальную) для альтернативного метода, а ось ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов (горизонтальную) для референтного метода. Точки на каждом уровне должны образовывать дискретный кластер. Для обнаружения выбросов и нелинейности исследуют график визуально с целью обнаружения аномальных результатов, которыми являются те, что явно отдалены от соответствующего кластера. Если таковые имеются, то образец испытывают повторно, если это возможно. Если нет объяснения или результат по-прежнему остается вне кластера, то надо временно отбросить такой результат и повторить указанные ниже вычисления, чтобы оценить влияние отброшенного результата путем сравнения с вычислениями с учетом всех данных. Если это связано с эффектом разбавления, то внимательно исследуют эту возможность.

Если все кажется правильным, то используют программу линейной регрессииГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов, которая дает возможность определить вероятность недостаточного согласования или нелинейности, и, что также возможно, программу регрессии с неравномерным взвешиванием (ISO 11095). Если доступна менее продвинутая программа вычислений или имеется только компьютер с меньшей производительностью, то требуемые вычисления приведены в п.6.2.1.3.2. Если простая линейная регрессия приводит к линейной аппроксимации (ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов), то ее коэффициента корреляции ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов недостаточно для получения требуемой информации. Статистическая значимость ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов или наклона ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов не являются синонимами критерия линейности. В этом случае нужно проверить две гипотезы (ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=0 и ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=1).
________________
ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов Или электронную таблицу, как в Excel.


Примечание - Если ошибка повторяемости по ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов (или также по ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов) зависит от значения ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов (что, к сожалению, часто случается на практике), например прямо пропорционально увеличивающаяся ошибка, то лучше использовать сглаженную взвешивающую функцию (например, вес[ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов]=постоянная/дисперсия=постоянная/ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов), чтобы правильно аппроксимировать прямую линию ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов с помощью метода линейной регрессии (аналогично методу взвешенных наименьших квадратов для взвешенных наименьших квадратов). Это приближает прямую к наблюдаемым точкам, которые имеют меньший разброс, и удаляет от точек с большим разбросом. При этом оценки наклона ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов и отсекаемого отрезка ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов сильно зависят от такой процедуры взвешивания. Это трудный технический прием, предназначенный для статистического использования, и в настоящем стандарте не применяется. Дополнительные сведения можно найти в книгах по статистике, посвященным общему линейному моделированию GLIM/GLM, и т.д. (ISO 11095). Таким образом, если после сбора данных и изучения графиков регрессии вопрос о линейности остается сомнительным, рекомендуется использовать статистическую экспертизу для данного анализа.

6.2.1.3.2 Оценки с помощью метода регрессии

6.2.1.3.2.1 Принцип метода регрессии

В общем случае вертикальную ось ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов (зависимую переменную) используют для альтернативного метода, а горизонтальную ось ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов (независимую переменную) - для референтного метода. Эта независимая переменная ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов должна быть точной, прецизионной и иметь вполне известные значения.

Если есть основания предполагать, что погрешность повторяемости ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов, которая может возникнуть по ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов, сравнительно сопоставима или превышает таковую для ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов по ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов, то подгоночная функция ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов или ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов может привести к значительно отличающимся прямым линиям. В случае, когда среднеквадратичные отклонения повторяемости ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов и ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов сравнимы (соответственно по ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов и по ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов), вычисляют другие оценки (см. приложение R.3). Если повторяемость для ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов намного больше, чем для ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов, то меняют оси ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов на ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов и ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов на ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов для проведения регрессии ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов или используют регрессию ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов без перестановки осей (см. приложение R.4). При таких выборах (см. приложение R.2) используют критическую точку отсечения, равную 2, для отношения погрешностей повторяемости по ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов и ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов или обратного значения.

Подробности вычислений приведены в приложении R.

6.2.1.3.2.2 Дополнительные оценки

Если погрешности повторяемости ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов или остаточная погрешность ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов сильно зависят от ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов (или от ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов), то есть остатки, кажется, явно увеличиваются или уменьшаются с ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов (или с ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов, то есть ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов не является константой), то подгоночная линия регрессии может быть неверной и может не проходить через точки с большей точностью. Более того, соотношение между ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов и ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов (или и ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов) может быть ненадежным в основной части диапазона измерений. В этом случае используют метод взвешенной регрессии.

Когда это представляется необходимым и для того, чтобы упростить этот шаг, можно использовать монотонные математические преобразования обеих осей ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов и ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов. Например, преобразования ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов и ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов или ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов и ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов можно использовать для получения хорошей оценки для ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов (отрицательного или положительного, полуцелого или нет): выбор производят по визуальной оценке остатков или повторяемости ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов для каждого ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов. Постоянные погрешности соответствуют идеальному преобразованию.

При использовании такого преобразования отсекаемый на оси отрезок ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов не должен очень сильно отличаться от нуля. Затем, когда проведены все оценки, как, например, оценки значений ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов и ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов, могут быть выполнены их обратные преобразования.

6.2.1.4 Интерпретация

6.2.1.4.1 Соотношение относительных точностей альтернативного и референтного методов оценивают с помощью линейной модели: ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов.

При отсутствии систематической погрешности между методами (т.е. при идеальной точности) это уравнение переходит в уравнение ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов, которое применимо в случае, когда характеристики методов эквивалентны. В этом случае отсекаемый отрезок теоретически равен нулю. Оценку величины отсекаемого отрезка ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов получают для обоих методов путем проверки гипотезы ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов . Если альтернативный метод имеет систематическое смещение относительно референтного метода, то вероятность ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов менее ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=0,005 (двухсторонний доверительный интервал).

Теоретический наклон линии, проходящей через точки, соответствующие общей истинной эквивалентности методов, равен единице. Оценочный наклон ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов, полученный обоими методами, должен быть проверен при помощи гипотезы ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов. Если альтернативный метод не дает достоверно совпадающих значений со значениями референтного метода, то вероятность ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов менее ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=0,05 (двухсторонний доверительный интервал). В этом случае альтернативный метод имеет систематическую погрешность относительно стандартного метода, зависящую от значений концентрации (ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов или ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов) и достигающую максимума на границах области.

6.2.1.4.2 Линейность или несогласование может быть представлено графически (приложение N). Лучшим является график остатков (см. приложение R.1). Строится не график зависимости значений ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов от ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов (ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=1 до ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов, ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов), а график зависимости оценочных остатков ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов от ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов, который характеризует характер нелинейности, если она обнаружена с помощью функции ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов, приведенной в приложении R.5.

6.2.1.4.3 Оценку точности методов с использованием ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов получают, главным образом, на основании остаточного среднеквадратического отклонения ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов (см. приложение R). Такая оценка характеризует границы, в пределах которых специфицированная точность результата определяется с вероятностью 95% при ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов, приблизительно равном 2.

Соответствующие ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов (см. приложение R) предпочтительнее для использования, так как они включены в справочную систему.

6.2.2 Обнаружение и предел количественного определения

6.2.2.1 Общие требования

Следующая характеристика связана с надежностью сигнала (или результата), полученного альтернативным методом, для определения ненулевой концентрации, измеренной референтным методом. Такая характеристика дает пределы прецизионности, включающие систематическую погрешность на нижнем крае области концентраций.

Фоновый шум, или "фон", (инструментального или иного происхождения) обычно определяют как минимум шестью независимыми холостыми измерениями. Результат такого измерения используют для корректировки общей систематической погрешности реальных измерений с помощью центрального (среднего) значения, и он служит важной оценкой разброса ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов.

Часто, когда невозможно измерить или обнаружить величину ниже данного нижнего уровня, выбирают образцы с концентрацией микроорганизмов, близкой к первой оценке ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов, взятой из предыдущей прямой линии для проверки градуировки:

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов,

где ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов определено в приложении R. В окрестности такой концентрации оценивают среднеквадратическое отклонение, ожидаемое значение которого близко к ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов и которое используется вместо него. Другая процедура предусматривает использование среднего значения и среднеквадратического отклонения всех данных измерений самых низких доз, обнаруженных после реплицирования разведений по одной и той же схеме (коэффициент разведения от 1:2 до ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов1:10).

Примечание - Оценка среднеквадратического отклонения ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов включает в себя много неопределенностей, в основном, связанных с диапазоном ниже нижнего уровня разведения. Таким образом, исходная оценка ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов (проводимая, по возможности, устойчивым методом ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов, приведенным в приложении Q) часто является достаточной для получения дополнительных оценок.

6.2.2.2 Определения

6.2.2.2.1 критический уровень (ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов) (critical level): Наименьшее (ненулевое) количество, которое можно обнаружить, но для которого нельзя получить точное количественное значение. Ниже этого уровня нельзя быть уверенным, что истинное значение не равно нулю.

Примечание - На этом уровне вероятность ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов ложноотрицательных результатов равна 50% (ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов - статистическая ошибка второго типа, см. 6.2.2.4).

6.2.2.2.2 предел обнаружения (ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов) (detection limit): Больше, чем критический уровень (6.2.2.2.1), поскольку он включает показатель, т.е. доверительную вероятность ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов, который должен быть намного выше 50%, например 95%.

Например, ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методовсреднее значение (холостое)+ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов (холостое), где ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов есть гауссовское критическое значение при ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов (односторонний доверительный интервал, см. 6.2.2.4) для достаточно большого числа ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов холостых образцов.

6.2.2.2.3 предел количественного определения (ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов) (quantification limit): Наименьшее количество аналита (т.е. наименьшее реальное число организмов), которое можно измерить и количественно оценить с заданной прецизионностью и точностью в экспериментальных условиях метода, подлежащего валидации.

Примечание - Ассоциация химиков-аналитиков, состоящих на государственной службе, (AOAC), определяет предел количественного определения для количественных методов как ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов. Это равноценно утверждению, что коэффициент изменчивости ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов должен быть ниже 10% , см. [2].

6.2.2.3 Протокол измерений и образцы

Для оценки базового или порогового разброса ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов проводят по меньшей мере шесть (лучше 10) определений холостых образцов (отрицательных, с нулевой дозой или дозой, близкой к нулю).

Примечание - При подсчете числа организмов достаточно более пяти образцов на минимальном, не равном нулю, уровне, для того, чтобы удостовериться, что степень контаминации составляет ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов<50%, когда не обнаруживается положительных образцов (доверительный уровень 95%). Если обнаруживается один положительный образец из пяти, то можно считать, что ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов>1%. Таким образом, если начать с трех доз аналита стандартного материала, выбранных из 3, 10, 30, 100, 300 и т.д. КОЕ/единица, и реплицируя каждый из них минимум шесть раз, можно оценить критический уровень (50%-ное обнаружение): например, в идеальном случае может быть следующее: 0/6 при 10, 2/6 при 30, 5/6 при 100, что дает оценку, близкую к 30 КОЕ/единица. Тем не менее, оценку, которую дает эта процедура, можно использовать (Данные о когерентном оценивании см. в приложении Р).

6.2.2.4 Вычисления

В общем случае критический уровень и предел обнаружения включают статистические ошибки двух типов: ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов (соответствует определению несуществующей разницы (ложноположительный результат) и ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов (соответствует необнаружению истинной разницы (ложноотрицательный результат)). Показатель ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов является вероятностью достоверного определения значения, превышающего критический уровень (ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов).

Из результатов определений ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов на холостом образце оценивают их среднеквадратическое отклонение ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов (по ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов, приложение R) и систематическую погрешность ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методовмедиане ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов, что свидетельствует об общей недостаточной специфичности, которая является статистически значимой, если

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов (см. ниже).

Критический уровень ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов (ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов для альтернативного метода) для ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=5% (и ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=50%).

(Точнее, ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов, где ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов является значением коэффициента Стьюдента для одностороннего уровня ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов и ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов степени свободы, для ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=5% и ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=6 ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=2,015, и при этом ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов; если ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов, то ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов).

Предел обнаружения равен ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов (ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов для альтернативного метода) для ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=5% и ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=95%.

(Точнее, ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов, где ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов является значением коэффициента Стьюдента для одностороннего уровня ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов и ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов степени свободы, например, для ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=90% и ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=6 ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=1,476, и при этом ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов; для ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=80%, ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=0,920).

Предел количественного определения ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов (ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов для альтернативного метода).

6.2.3 Относительная чувствительность и определение неизвестных образцов

6.2.3.1 Общие требования

Оценку чувствительности применяют для того, чтобы убедиться, что значения, получаемые альтернативным методом, заметно не отличаются от таковых для стандартного метода (разница менее 30%).

6.2.3.2 Определение

6.2.3.2.1 относительная чувствительность метода (ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов) (relative sensitivity): Способность альтернативного метода обнаруживать два разных количества аналита, измеренных референтным методом в заданной матрице с заданным средним значением или по всему диапазону измерения; т.е. это - минимальное изменение количества (увеличение концентрации ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов аналита), которое приводит к значимому изменению измеряемого сигнала (результат ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов).

Примечание - Относительная чувствительность отличается от предела обнаружения (6.2.2), так как ее вычисляют для каждого значения в диапазоне измерений. Она связана со статистическими ошибками двух типов ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов (двухсторонний доверительный интервал) и ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов.

6.2.3.3 Вычисления

Протокол измерений и образцы описаны в 6.2.1.2.

Относительная чувствительность: ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов для двухстороннего доверительного интервала с ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=5% и показателя ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=95% при ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов в соответствии с приложением R.6.2.

(Точнее, ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов. Для ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=5% статистической мощности ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=95% и ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=5 ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=2,776 и ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=1,533, при этом ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов).

Идентификация и определение неизвестных образцов: ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов.

Строят график профиля прецизионности ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов или график зависимости ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов от ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов.

6.2.4 Специфичность, инклюзивность и эксклюзивность

6.2.4.1 Определения

6.2.4.1.1 специфичность (specificity): В настоящем стандарте определяется как степень, в которой на метод влияют (или не влияют) другие компоненты, присутствующие в многокомпонентном образце, т.е. способность метода точно обнаруживать данный аналит или измерять его количество в образце без интерференции со стороны нецелевых компонентов, таких как влияние матрицы или фоновый шум.

6.2.4.1.2 инклюзивность и эксклюзивность (inclusivity, exclusivity): В настоящем стандарте избирательность определяется как мера степени отсутствия интерференции при наличии нецелевых аналитов. Метод избирателен, если его можно использовать для обнаружения исследуемого аналита и если он гарантирует, что обнаруживаемый сигнал может происходить только от такого специфического аналита.

Критерий неприменим к суммарному числу жизнеспособных организмов.

6.2.4.1.2.1 Инклюзивность: Способность альтернативного метода обнаружить целевой аналит в широком спектре штаммов.

6.2.4.1.2.2 Эксклюзивность: Отсутствие интерференции от сопутствующего спектра нецелевых штаммов в альтернативном методе.

6.2.4.2 Протокол измерения

6.2.4.2.1 Образцы

В микробиологии (за исключением случая суммарного определения числа микроорганизмов, посеянных в чашки Петри) инклюзивность и эксклюзивность устанавливаются с помощью анализа:

- минимум 30 положительных чистых штаммов (исследуемого аналита);

- минимум 20 отрицательных чистых штаммов (аналитов, отличных от исследуемого) из культур, отличающихся тем, что они обычно создают постоянную и устойчивую интерференцию с целевым аналитом.

Выбирают положительные и отрицательные штаммы, которые часто контаминируют исследуемый пищевой продукт(ы). Для штаммов, не принадлежащих к данному набору, проводят полную идентификацию различных испытываемых штаммов. Необходимо знать источник происхождения штаммов, не входящих в набор.

Критерии для выбора штаммов приведены в приложении G.

Чистые штаммы из лабораторных культур составляют испытываемые образцы. Уровень инокуляции для каждого микроорганизма фиксируют на уровне, в 100 раз превышающем порог обнаружения целевых штаммов.

Каждый образец, содержащий штамм, анализируют дважды.

6.2.4.2.2 Протокол измерений

Специфичность, инклюзивность и эксклюзивность референтного метода не нужно устанавливать, если они уже известны.

6.2.4.3 Представление результатов

Характеристика избирательности дается только описательно (см. таблицу 8) относительно предела обнаружения целевого аналита, и поэтому вычисления не требуются. Отсутствие инклюзивности и эксклюзивности - это часть общей недостаточности специфичности (см. также систематическую погрешность в п.6.2.1.4).


Таблица 8 - Представление результатов для инклюзивности и эксклюзивности

Испытанный штамм

Референтный метод. Ожидаемый или полученный результат, уровень инокулята и т.д.

Альтернативный метод. Результаты (указать уровень обнаружения, и т.д.)

(Единичное испытание)

Дупликат

Целевые штаммы



и т.д.

Нецелевые штаммы



и т.д.



Опубликованные данные, соответствующие требованиям настоящего стандарта, лаборатория-организатор, на которую возложена ответственность за сравнительное исследование методов, также могут использовать для получения информации, дополнительной к вышеуказанным критериям (см. приложение А, в котором приведены критерии для признания сторонних результатов).

6.2.4.4 Интерпретация

Для надежного использования необходимо оценить, соответствует ли альтернативный метод спецификациям изготовителя, а также конкретным требованиям.

6.2.5 Дополнительные характеристики альтернативного метода

Для альтернативного метода документируют все относящиеся к делу характеристики, влияющие на работу метода, например стабильность, достоверность, устойчивость или повышенная надежность и т.д.

6.3 Межлабораторное исследование

6.3.1 Общие требования

Проводят совместное исследование для сравнения рабочих характеристик (точности и прецизионности) альтернативного метода и референтного метода.

Рекомендации для лаборатории-организатора, относящиеся к совместному исследованию, приведены в приложении Н (также см. ISO 5725-2).

6.3.2 Термины и определения

В настоящем стандарте используются следующие термины и определения:

6.3.2.1 точность (accuracy): Степень близости результатов измерений к принятому опорному значению (ISO 3534-1).

Примечание - Это примерно оценивается как систематическая ошибка, которая является системной частью ошибки.

6.3.2.2 прецизионность (precision): Степень близости независимых результатов испытаний, полученных в конкретных регламентированных условиях повторяемости и воспроизводимости (см. 6.3.5 и 6.3.6) (ISO 3534-1).

6.3.2.3 выброс - резко отклоняющееся значение (outlier): Экстремальное значение, которое обычно случайным образом проявляется менее чем в 1% испытаний, но более часто в случае возникновения аномальных ситуаций. Для количественной оценки соответствующей вероятности нужно использовать соответствующие критерии.

Примечание - "Устойчивый" подход, используемый в настоящем стандарте, не исключает из рассмотрения выброс, за исключением того случая, когда имеются явные свидетельства разумного микробиологического обоснования. Такой подход можно использовать или в виде испытательной процедуры для обнаружения выброса, или для "устойчивых" статистических оценок.

6.3.3 Протокол измерений и образцы

6.3.3.1 Межлабораторное исследование проводят минимум в восьми сотрудничающих лабораториях, имеющих результаты без выбросов.

Оценки точности и прецизионности вычисляют по большому числу дублирующих результатов испытаний. Полученное значение должно включать в себя минимум 96 результатов для одной выбранной пищевой матрицы.

Рекомендации и требования к организации, координации и проведению межлабораторных исследований приведены в приложении Н.

На лабораторию-организатор возложена также ответственность за подготовку протокола испытаний и таблицы данных (см. ниже) для записи всех экспериментальных данных и критических экспериментальных условий, использованных каждой лабораторией (см. приложение Н.3).

Необходимо, чтобы специалист по анализу результатов из каждой сотрудничающей лаборатории проявил достаточную компетентность в применении альтернативного и референтного методов до участия в самом исследовании.

6.3.3.2 Протокол включает в себя следующие требования:

- нужно использовать одну подходящую пищевую матрицу (см. приложение В);

- концентрации аналита должны быть выбраны так, чтобы они включали, по меньшей мере, нижний, средний и верхний уровни всего диапазона для альтернативного метода. Лаборатория-организатор должна подтвердить гомогенность образцов;

- должен быть включен отрицательный контрольный образец; можно использовать пищевые образцы, искусственно контаминированные целевым аналитом;

- для сравнения альтернативного и референтного методов должны использоваться одни и те же образцы для обоих методов. Четыре подобразца на каждом уровне (или две аликвотные пробы, каждую из которых измеряют обоими методами) приготовляют для каждой лаборатории. Такие образцы кодируют слепым образом, но снабжают этикетками так, чтобы два из них измерялись референтным методом и два - альтернативным;

- жидкие образцы (по сравнению с твердыми образцами) обеспечивают большую гарантию гомогенности, если их приготавливают и рассылают без изменения микробиологического состава и правильно используют. В особых случаях может оказаться необходимым разделить образцы прямо перед измерением обоими методами;

- анализ образцов нужно проводить в каждой сотрудничающей лаборатории и в лаборатории-организаторе в указанный день с использованием сходных партий сред и комплектов оборудования для испытаний;

- округление результатов должна проводить лаборатория-организатор. После группировки результатов каждой из лабораторий окончательные табулированные данные для каждого уровня (ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов) аналита должны быть представлены, как показано в таблице 9.


Таблица 9 - Представление результатов межлабораторного исследования для каждого уровня (ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов) аналита

Лаборатории (ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов)

Методы (ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов) и дупликаты (ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов)

Референтный метод (кодированный)

Альтернативный метод (кодированный)

Дупликат 1

Дупликат 2

Дупликат 1

Дупликат 2

1

2

и т.д.

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов


6.3.4 Вычисления

6.3.4.1 В микробиологии данные ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов не всегда подчиняются нормальному, т.е. гауссовскому, статистическому распределению.

Распределение данных можно проверить, если имеется достаточное число значений (намного более 30 результатов) - все для одного уровня. Часто для получения более симметричного распределения немногочисленные отсчеты лучше преобразовать в логарифмы. Также можно использовать более сложные процедуры.

Часто бывает трудно получить надежные оценки (среднее, среднеквадратическое отклонение и т.д.) с малой систематической погрешностью, особенно при наличии выбросов. ISO 5725 включает в себя критерии резко отклоняющихся значений, т.е. выбросов, для того чтобы отбросить неблагоприятно влияющие значения и получить лучшую оценку; однако при этом уменьшается число значений, используемых для статистического анализа.

Поэтому для того, чтобы избежать таких трудностей, в настоящем стандарте используют устойчивые оценочные алгоритмы, которые нечувствительны к экстремальным значениям и, более того, не слишком зависят от распределения данных. Кроме того, такие алгоритмы позволяют сохранить данные лабораторий с экстремальными значениями, если исключение данных не подтверждено вескими микробиологическими обоснованиями. Используют три согласованных значения для каждой из лабораторий-участников:

- оценку глобального центра (для оценок систематической погрешности): срединное значение (медиану) ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов (вместо среднего значения ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов);

- оценку разброса между средними значениями дупликатов, включая воспроизводимость ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов, основанную на значении рекурсивной медианы ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов (6) (см. приложение Q), вместо классического среднеквадратического отклонения (ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов);

- оценку типичного внутреннего разброса, среднеквадратического отклонения повторяемости, полученного из срединного значения (медианы) среднеквадратических отклонений дупликатов: ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов, вместо классического обобщенного среднеквадратического отклонения, основанного на среднем значении дисперсий.

6.3.4.2 Для каждого метода ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов (например, 1 - стандартный, 2 - альтернативный) и уровня ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов аналита производят вычисления в соответствии с таблицей 10.


Таблица 10 - Представление результатов межлабораторного исследования по оценке согласованных значений для каждого метода

Уровень ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов

Метод ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов

Реплики

1

2

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов

Лаборатория (ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов) 1

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов

2

...

...

...

...

...

N

...

...

...

...

МЕДИАНА:

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов

Устойчивая ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов



Константы ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=1,1926 и ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=1,4826; только последняя константа зависима от того, что используются только дупликаты (значения двух лабораторий), а не большее число репликГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов.
__________________
ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов Константа вычисляется по формуле ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов, где ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методовзначению ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов - квадрат для ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=0,5 {здесь ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=0,455} и ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов степеней свободы в повторных результатах (здесь для дубликата ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=2-1).


ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов соответствует следующей процедуре, в которой не используется оценка центра:

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов. Она включает два этапа последовательного вычисления медианы:

- по каждому из ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов значений вычисляют медиану (ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов) абсолютных разностей этого значения с другими значениями; и

- оценка разброса - это медиана ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов медиан этих отклонений, подсчитанных в предыдущем шаге (например, см. приложение Р).

Примечание - Более совершенные процедуры отсутствуют. Абсолютное отклонение медианы для значений, вычисленных по процедуре ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методовианы (или ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов), равно ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов. Это устойчивая оценка разброса симметрична относительно оценки центра (ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов).

Для распределения Гаусса: ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов. Другая сопоставимая альтернатива основана на межквантильном диапазоне ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов3-я - 1-я квартили; для распределения Гаусса ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов. Последний результат легко получить с помощью процедур программы EXCELГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов.
__________________
ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов Использовать следующие статистические функции Excel: ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов (диапазон) для 2-й квартили и ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов (диапазон; ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов), где ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=1,2 или 3 для 1-й, 2-й и 3-й квартилей.

6.3.5 Относительная точность

6.3.5.1 Определение

В настоящем стандарте принятые опорные значения, используемые в определении правильности, задаются только результатами, полученными референтным методом на идентичных образцах.

Таким образом, отклонение результатов измерений, полученных альтернативным методом, лучше соответствует относительной точности.

6.3.5.2 Вычисления

Для каждого уровня ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов аналита вычисляют ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов для всех лабораторий ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=1 до ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов,

где ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов - среднее дупликатов лаборатории ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов, полученное альтернативным методом;

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов - среднее дупликатов лаборатории ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов, полученное стандартным методом.

Таким образом, медиана ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов, равная систематической погрешности ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов, и устойчивое среднеквадратическое отклонение ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов порождают ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов-образную статистику:

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов с ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов степенями свободы (ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов).


По таблице распределения Стьюдента ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов находят вероятность того, что ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=0. (Например, для ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов критическое значение для двухстороннего доверительного интервала с ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=0,05 равняется

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=2,201). Если ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов, то систематическая погрешность ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов между двумя сравниваемыми методами значима, т.е. альтернативный метод имеет недостаточную точность относительно референтного метода для такого уровня ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов.

Соотношение между относительной точностью и уровнями можно моделировать (постоянная или пропорциональная систематическая погрешность и т.д.) с учетом линейности градуировочной характеристики.

6.3.5.3 Интерпретация

Предполагается нулевая систематическая погрешность (ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=0). Однако если оцененное абсолютное значение ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов слишком большое для цели данного метода или достигнута статистическая значимость, то альтернативный метод отличается от референтного.

6.3.6 Повторяемость

6.3.6.1 Термины и определения

6.3.6.1.1 повторяемость (сходимость) (repeatability): Характеристика близости согласования последовательных и независимых результатов анализа, полученных одним и тем же методом на идентичном испытуемом материале при одних и тех же условиях (оборудование, оператор, лаборатория и короткий промежуток времени, т.е. в условиях повторяемости).

6.3.6.1.2 предел повторяемости (ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов) (repeatability limit): Значение, которое с доверительной вероятностью 95% не превышается абсолютной величиной разности между результатами двух измерений (или испытаний), полученными в условиях повторяемости.

На практике, если разность между двумя результатами превышает (ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов), результаты должны считаться сомнительными.

6.3.6.2 Вычисления

Для каждого метода ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов и уровня ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов аналита вычисляют:

- предел повторяемости ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов соГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов среднеквадратическим отклонением повторяемости ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов;

- относительное среднеквадратическое отклонение повторяемости ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов.
__________________
ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов Константа ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов с ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов1,960 и двухсторонним ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=0,05 или 95% уровнем доверительной вероятности.


Повторяемость альтернативного и справочного методов проверяют, используя ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов-распределение:

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов с ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов и ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов степенями свободы. По ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов-таблице определяют вероятность ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов того, что ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов; например, для ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=12 критическое значение для двухстороннего доверительного интервала с ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=0,05 равно ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=2,69.

Если ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов или ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов больше ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов, то тогда сравниваемые методы обладают разной повторяемостью для уровня ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов.

Соотношение между повторяемостью и уровнями можно моделировать так же, как относительное среднеквадратическое отклонение повторяемости. Дополнительные сведения содержатся в ISO 5725.

6.3.6.3 Интерпретация

Предполагается сопоставимая повторяемость для каждого уровня аналита. Однако, если получена статистическая значимость ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов (двухсторонний доверительный интервал), альтернативный метод отличается от референтного.

В настоящее время отсутствуют критерии для отбраковки альтернативного метода.

6.3.7 Воспроизводимость

6.3.7.1 Термины и определения

В настоящем стандарте используются следующие термины и определения:

6.3.7.1.1 воспроизводимость (reproducibility): Характеристика близости согласования между отдельными результатами испытаний на идентичном испытательном материале, полученными с использованием одного и того же метода операторами в разных лабораториях с использованием разного оборудования (т.е. в условиях воспроизводимости)

6.3.7.1.2 предел воспроизводимости (ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов) (reproducibility limit): Значение, которое с доверительной вероятностью 95% не превышается абсолютной величиной разности между результатами двух измерений (или испытаний), полученными в условиях воспроизводимости.

На практике, если разность между двумя результатами превышает ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов, результаты должны считаться сомнительными.

6.3.7.2 Вычисления

Значение ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов вычисляют по среднеквадратическому отклонению воспроизводимости ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов и межлабораторному среднеквадратическому отклонению ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов для каждого метода ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов и каждого уровня ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов аналита:

- предел воспроизводимости ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов со среднеквадратическим отклонением воспроизводимости

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов и ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов лабораторной дисперсии при ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов;


- относительное среднеквадратическое отклонение воспроизводимости ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов.

Воспроизводимости альтернативного и референтного методов сравнивают, используя ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов-распределение: ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов с (ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов) и (ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов) степенями свободы. По ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов-таблице определяют вероятность ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов того, что ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов, например, для ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=12 (11ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов) критическое значение для двухстороннего доверительного интервала с ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=0,05 равно ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=2,82. Если ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов или ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов больше ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов, то сравниваемые методы обладают разной воспроизводимостью для уровня ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов.

Можно моделировать соотношение между воспроизводимостью и уровнями, а также относительную воспроизводимость ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов. Дополнительные сведения содержатся в ISO 5725.

После этого оценить вероятность ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов того, что однородность "межлабораторного разброса", представляющего собой лабораторные различия, меньше, чем их собственный типичный разброс измерений: ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов с ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов и ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов степеней свободы. По ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов-таблице определяют вероятность ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов, характеризующую важность межлабораторной дисперсии ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов.

6.3.7.3 Интерпретация

Предполагается сопоставимая воспроизводимость для каждого уровня аналита. Однако, если получена статистическая значимость ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов (двухсторонний доверительный интервал), альтернативный метод отличается от референтного (в худшую или лучшую сторону в зависимости от ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов).

В настоящее время отсутствуют критерии для отбраковки альтернативного метода.

Соотношение ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов в целом верно. Однако это зависит от результатов метода и контекста применения. Вероятность наличия неоднородности при большом разбросе между лабораториями обычно свидетельствует о том, что стандартизацию метода нужно усовершенствовать, т.е. рабочие инструкции не вполне понятны (формулировка, объяснения и т.д.), анализы проводятся некачественно (недостаточность квалификации) или присутствуют аномальные изменения во времени для реакций, культур и т.д., а также всех внешних условий в лаборатории.

Приложение А (обязательное). Особые правила для признания сторонних результатов, полученных ранее при использовании прежней системы валидации


Приложение А
(обязательное)


А.1 Общие требования

Это касается данных, полученных с помощью Международных или Европейских стандартов и других стандартных методов.

А.2 Альтернативные методы, которые претерпели изменения или ранее прошли валидацию в соответствии с Международным или Европейским Стандартом

При оценке возможности того, можно ли имеющиеся сторонние данные признать в соответствии с настоящим стандартом, устанавливают, был ли альтернативный метод каким-либо образом изменен после того, как появились эти данные.

Если изменения были и они считаются серьезными, то результаты не могут быть признаны.

Если изменений не было или они были несущественными, то тогда нужно обратиться в службу менеджмента качества лаборатории, проводящей валидацию.

Если лаборатория-организатор не была аккредитована в соответствии с ISO/IEC 17025, то необходимо провести аудит для проверки калибровки, сред, температуры, оборудования, записей об обучении со времени, когда проводилась валидация. Результаты не могут быть приняты, если результаты аудита неудовлетворительны. Результаты аудита должны быть документированы письменно.

Если, однако, лаборатория-организатор признана на основании результатов аудита или лаборатория имела аккредитацию в соответствии с ISO/IEC 17025, то критерии валидации считаются достаточно надежными.

Также должна быть оценена информация о сотрудничающих лабораториях (их возможности и их практический опыт в обеспечении качества).

А.3 Альтернативные методы, которые не проходили валидацию с использованием референтного метода в соответствии с Международным или Европейским Стандартом

Прежние исследования приемлемы в соответствии с настоящим стандартом при условии, что:

- они были проведены в соответствии с протоколами валидации, одобренными авторитетной группой технических экспертов, и результаты таких исследований были ими полностью признаны;

- технические эксперты работали под эгидой международно признанных организаций, занимающихся методами валидации (например, AFNOR, NORVAL,AOAC International, AOAC Research Institute);

- процедуры валидации включают в себя исследования, соответствующие требованиям настоящего стандарта, по меньшей мере, к полному числу образцов и к пищевой матрице.

Если альтернативный метод прошел сличение с международно признанным референтным методом (как, например, AOAC International), который отличается в несущественных аспектах от референтного метода, соответствующего Международному или Европейскому стандарту, и если протокол близок к настоящему стандарту, то результаты могут быть признаны.

Если метод значительно отличается от референтного метода, соответствующего Международному или Европейскому стандарту, то проводят оценку с целью определения того, существенно ли влияют эти отличия на работу метода. Оценка проводится с учетом дополнительных данных (если они есть), необходимых для выяснения процедурных отличий и/или отличий, связанных с референтным методом (например, разный первичный обогащенный бульон). Если решения содержат утверждения, что стандартные методы имеют существенное отличие, то они должны быть документально обоснованы лабораторией-организатором. Должны быть оговорены данные, требуемые для объяснения предполагаемых отличий.

Приложение В (справочное). Классификация типов образцов для исследований по валидации


Приложение В
(справочное)

В.1 Образцы пищевых продуктов и кормов для животных


Таблица В.1 - Категории пищевых продуктов и связанные с ними основные пищевые патогенные микроорганизмы

Тип продукта

Yersinia spp.

Clostri-
dium per- fringens

Listeria monocy togenes

E.coil O157 & VTEC

Staphy-
lococcus aureus

S.aureus entero- toxins

Campy-
lobacter spp.

Salmo-
nella spp.

Bacillus cereus

Мясные продукты

Сырые

x

x

x

x

x

x

Прошедшие теплообработку

x

x

x

Замороженные

x

Ферментированные

x

x

Вяленые

x

x

x

x

x

Другой

Блюда/
соусы

Паштет

Домашняя птица

Сырые

x

x

x

Прошедшие теплообработку

Замороженные

Другие

Блюда/соусы

Рыба и морепродукты

Сырые

x

x

x

x

Прошедшие теплообработку

Замороженные

Копченые

x

x

Другие

Фрукты и овощные продукты

Сырые

x

x

x

x

x

Прошедшие теплообработку

Замороженные

Сушеные

x

Ферментированные

Вяленые/соленые

Соки/концентраты

x

x

Обезвоженные продукты/ продукты питания с умеренным обезвоживанием

Другие

Переработанные грибы

Молочные продукты

Сырые

x

x

x

x

x

x

x

x

Прошедшие теплообработку

x

Замороженные

x

x

x

x

x

x

Ферментированные

x

x

x

x

x

x

Сушеные

x

x

x

x

Другой

Шоколад/хлебобулочные изделия

Обезвоженные продукты/продукты питания с умеренным обезвоживанием

x

Сушеные

x

Другие

Кондитерские изделия

Завар-
ные кремы

Другие продукты

Пиво

Соусы

Специи

x

x

x

Майонез

x

x

Макароны

x

Яйца и производные

x

Зерновые/рис

x

Корма для животных

Разное

x



Таблица В.2 - Пищевые категории и связанные с ними основные непатогенные микроорганизмы

Тип продукта

Дрожжи и плесневые грибки

Молочно-
кислые бактерии

Общее число жизнеспособных организмов

Кишечная палочка

Escherichia coli

Мясные продукты

Сырые

x

x

x

x

Прошедшие теплообработку

x

x

x

Замороженные

x

x

Ферментированные

x

x

Вяленые

x

Другие

x

x

Продукты из домашней птицы

Сырые

x

x

x

x

Прошедшие теплообработку

x

x

x

Замороженные

x

x

Другие

Рыба и морепродукты

Сырые

x

x

x

x

Прошедшие теплообработку

x

x

x

Замороженные

x

x

Копченые

x

x

x

Другие

Фруктовые и овощные продукты

Сырые

x

x

x

x

Прошедшие теплообработку

x

x

Замороженные

x

x

Сушеные

x

x

x

Ферментированные

x

Вяленые/соленые

x

Соки/концентраты

x

x

Обезвоженные продукты/продукты питания с умеренным обезвоживанием

x

Другие

Молочные продукты

Сырые

x

x

x

Прошедшие теплообработку

x

x

Замороженные

x

x

x

Ферментированные

x

Сушеные

x

x

Другие

Шоколад/хлебобулочные изделия

Обезвоженные продукты/продукты питания с умеренным обезвоживанием

x

x

x

Сушеные

x

x

Другие продукты

Пиво

x

Соусы

x

x

Специи

Майонез

x

x

Макароны

Яйца и производные

Зерновые/рис

Корма для животных

Разное

x

x


В.2 Ветеринарные образцы

Для скрининга сельскохозяйственных животных следующие образцы проверяют на наличие Salmonella.


Таблица В.3 - Ветеринарные образцы для Salmonella

Животное, продукт или его среда

Образец для анализа

Дегенерированные яйца

Смешанная проба фекальных образцов

Куры-несушки

Смешанная проба фекальных образцов

Однодневные цыплята

Подстилочная солома из коробок

Молодки племенной птицы

Объединенная выборка фекальных образцов

Тушки племенной птицы

Объединенная выборка мекония

Свежее мясо домашней птицы

Кусочки кожи с шеи или кусочки тканей

Домашняя птица

Объединенная выборка фекальных образцов

Свежая говядина, телятина и свинина

Мазки с поверхности туш, кусочки тканей и вытекающая жидкость

Приложение С (обязательное). Использование естественно контаминированных образцов и приготовление искусственно контаминированных образцов для исследований по валидации


Приложение С
(обязательное)


Необходимо проводить выбор типа пищевого продукта в категории так, чтобы увеличить долю естественно контаминированных образцов. В случае, если доступно лишь ограниченное число естественно контаминированных образцов, можно воспользоваться вторым вариантом, представленным ниже, для увеличения числа образцов. Третий вариант должен использоваться только в хорошо обоснованных случаях. Можно также использовать стандартные материалы, содержащие микроорганизмы, подвергнутые стрессу, предпочтительно с вполне определенными уровнями целевого аналита (микроорганизмов) и указанным сроком хранения.

1-й вариант

Естественно контаминированные образцы

Используют образцы, собранные из продуктов, которые поточно анализирует лаборатория-организатор или другие лаборатории.

Хранение должно минимизировать микробиологические изменения и уменьшить микробный стресс. Контаминация (качественная или количественная сообразно обстоятельствам) должна быть подтверждена немедленно перед исследованием.

2-й вариант

Контаминирование смесью

Засевают жидкие и полутвердые испытываемые продукты путем разбавления естественно контаминированным образцом сходного типа.

Фоновая микрофлора в "разбавленном продукте" должна быть сходного типа в состоянии стресса, подобным тому, что присутствует в естественно контаминированных продуктах.

3-й вариант

Образцы с добавлением известного количества определяемого вещества

Если референтный материалГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов доступен, то его используют для проведения засевания. Если референтный материал отсутствует, то используемые штаммы изолируют от продукта того же типа.

________________
ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов Испытывают 10 реплик на каждом из трех-четырех уровнях контамации.

Определяют протокол создания стресса целевого микроорганизма, и во время засева должен наблюдаться стресс.

Уровень микрофлоры должен быть представительным для контаминации, которая происходит в этом продукте естественным образом.

4-й вариант

Референтные материалы

Референтные материалы, такие как сертифицированный референтный материал, содержащие подходящие и вполне определенные уровни целевого аналита (микроорганизмов) в стабильном стрессовом состоянии, можно использовать для внесения посевного материала в испытываемые образцы для анализа как качественными, так и количественными методами. Для качественных исследований их использование должно быть ограничено, когда в качестве референтных материалов доступны только несколько штаммов или серологических типов целевого аналита пищевого происхождения.

Приложение D (обязательное). Дупликация образцов для определения относительной точности и относительного уровня обнаружения для качественных методов


Приложение D
(обязательное)

D.1 Случай 1 - Все условия первой стадии культивирования одинаковы для обоих методов


ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов


D.2 Случай 2 - Первая стадия культивирования обоих методов различается


ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов


Примечание - Нужно отметить, что во втором случае из-за разбавления среды образцом и растворителем нельзя применять готовую к использованию среду, и концентрация ингредиентов в лабораторно приготовленном бульоне должна быть увеличена примерно на 10%.

Приложение Е (обязательное). Вычисление доверительных интервалов, связанных с числом испытуемых образцов


Приложение Е
(обязательное)


Для каждого значения (ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов) величин ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов, ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов и ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов, выраженных в процентах (см. 5.1.3.1), вычисляют доверительные интервалы (ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов):

________________

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов Объяснения этих сокращений см. в приложении U.


- если 10%<ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов<90%, приблизительно вычисляют двусторонние доверительные интервалы при 95%

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов с ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов соответственно для ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов (в %)=ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов, ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов, ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов;

- для ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов90% вычислить нижний доверительный предел при 95% (односторонний) с  ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов соответственно для ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов (в %)=ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов, ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов, ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов.

В этом случае предпочтительно использовать биномиальную таблицу для ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=10, 20, 30, 40, 50, 60 (см. таблицу Е.1).


Таблица Е.1 - Нижний доверительный предел при 95% для ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=90% и больше

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов

10

20

30

40

50

60

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=0,90

0,75

0,83

0,82

0,84

0,83

0,84

0,92

0,85

0,83

0,85

0,86

0,87

0,88

0,94

0,85

0,88

0,88

0,89

0,89

0,89

0,96

0,85

0,93

0,92

0,91

0,93

0,93

0,98

0,95

0,93

0,95

0,96

0,95

0,96

0,99

0,95

0,98

0,98

0,96

0,97

0,98



Пример - Для ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=20, ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=94% ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов (ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов; при 95%)=88%.

Приложение F (обязательное). Критерий, используемый для анализа несогласующихся результатов


Приложение F
(обязательное)


Подсчитывают суммарное число несогласующихся результатов ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов следующим образом:

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов (например, ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=2, ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=10, следовательно, ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=12).

Проверяют, могут ли методы различаться из-за соотношения между чувствительностью и специфичностью:

- для ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов6 (менее шести рассогласований): испытание отсутствует;

- для 6ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов22 (т.е. между 6 и 22 рассогласованиями) определяют ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов как наименьшее из двух значений, т.е. ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов и ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов (например, ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов, так как ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов), и используют биномиальный закон распределения в соответствии с таблицей F.1.

Если ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов для заданного ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов, то два метода различны при ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов0,05 (двухсторонний доверительный интервал).


Таблица F.1 - Значения М для рассогласований ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов (6ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов22)

Рассогласования ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов

От 6 до 8

От 9 до 11

От 12 до 14

От 15 до 16

От 17 до 19

От 20 до 22

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов при ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов0,05

0

1

2

3

4

5



Например, для ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=12 рассогласований и ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=2 ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=2 и ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов, и таким образом, два метода различаются с ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов0,05;

- для ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов22 (более 22 рассогласований) использовать критерий Мак-Немара с распределением хи-квадрат для 1 степени свободы:

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов с ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов и ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов.


Методы различаются при ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов0,05 (двухсторонний доверительный интервал), если ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов3,841.

Этот критерий хи-квадрат соответствует минимальному ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов для каждого ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов из следующей таблицы F.2 для ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов0,05 (т.е. для заданного ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов должно быть не меньше значения, приведенного в таблице F.2, чтобы сделать заключение о различии методов).


Таблица F.2 - Значения ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов для рассогласований ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов (ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов22)

Рассогласования ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов

От 22 до 26

От 27 до 31

От 32 до 37

От 38 до 44

От 45 до 51

От 52 до 58

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов

10

11

12

13

14

15

Приложение G (обязательное). Аспекты, подлежащие учету при выборе штаммов для испытания избирательности


Приложение G
(обязательное)

G.1 Общие требования

Это приложение устанавливает минимальные требования к испытаниям для общего пользования. При выборе испытательных штаммов большинство последних должно происходить из диапазона пищевых материалов, используемых в исследовании, и охватывать рекомендованный диапазон целевого аналита с учетом следующих факторов: географическое распределение, распространенность, многообразие идентификационных характеристик, например биохимических характеристик, характеристик серотипа, типа бактериофага и т.д., и любые требования, сделанные разработчиками альтернативного метода.

G.2 Категории целевых групп

- Неопределенная группа, например суммарное число, бактерии группы кишечной палочки, дрожжевые грибки, молочнокислые бактерии;

- семейство, например Enterobacteriaceae;

- род, например Salmonella, Pseudomonas, Listeria;

- вид, например Listeria monocytogenes, Staphylococcus aureus, Escherichia coli;

- штамм, например Salmonella enteritidis тип бактериофага 4.

G.3 В соответствии с целевой группой, определенной в G.1, можно выбрать диапазон положительных микроорганизмов:

- для неопределенных групп, в которых целевая группа определена стандартным методом, используемые штаммы должны выбираться из тех, которые способны на типичный рост в референтном методе;

- для семейств: используют штаммы из диапазона родов в этом семействе и, если это возможно, включают представительный элемент всех родов семейства;

- для родов: используют диапазон видов из этого рода и, если возможно, испытывают все виды из такого рода;

- для видов: диапазон штаммов из этих видов. Определение штамма необходимо учитывать при принятии этого решения. В настоящее время патогены, такие как Salmonella и Listeria, были подразделены на серотипы, однако Listeria spp. также подразделяется на типы фагов; в будущем будут использоваться другие методы подразделения на генетические типы, такие как RAPD, PFGE и риботипирование. При определении положительных штаммов, которые будут использоваться в испытании, лаборатории-организаторы должны пользоваться доступной современной информацией для гарантии того, что эти штаммы в данное время являются подходящими к целевым пищевым категориям;

- для штамма: диапазон источников этого штамма.

G.4 Нецелевые группы, используемые в исследовании на избирательность

- Нецелевые группы (т.е. те, которые, как ожидается, должны дать отрицательный результат и которые используются в испытаниях на перекрестную реактивность) должны быть определены в соответствии с целевой группой;

- когда целевая группа - семейство: нецелевые штаммы должны включать семейства;

- когда целевая группа - род: нецелевые штаммы должны включать другие роды, которые считаются похожими на целевой род;

- когда целевая группа - вид: нецелевые штаммы должны включать другие виды внутри целевого рода;

- когда целевая группа - штамм: нецелевые штаммы должны включать другие штаммы из того же вида.

Приложение Н (обязательное). Рекомендации по организации и проведению совместных исследований


Приложение Н
(обязательное)

Н.1 Подготовка пищевых образцов

Отрицательные (контрольные) образцы

В общем случае должна использоваться только искусственная контаминация, и целевой аналит не должен присутствовать в незасеянной пище. Берут подходящее число образцов в соответствии с приложением J и анализируют их для подтверждения факта отсутствия целевого аналита. Отрицательные контрольные образцы используют в тех случаях, когда это предусмотрено во время пробного испытания.

Положительные образцы, содержащие целевой аналит

При некоторых количественных исследованиях, например испытаниях на суммарное число бактерий, дрожжей и плесневых грибков, бактерий группы кишечной палочки и т.д., для совместных исследований следует использовать естественно контаминированные образцы, содержащие целевой аналит и/или типичную микрофлору. В отсутствие подходящего числа естественно контаминированных образцов или в тех случаях, когда уровень контаминации слишком узок или непригоден, можно использовать искусственно контаминированные образцы. Образцы необходимо контаминировать, используя второй или третий вариант, описанный в приложении С. В случаях, когда используют стандартные материалы (приложение С), на лабораторию-организатора возложена ответственность за рассылку и референтных материалов, и подробных процедур инокуляции каждой сотрудничающей лаборатории.

В случае и качественных, и количественных методов пищевые материалы и целевой аналит/микроорганизмы должны допускать гомогенизацию и должны оставаться стабильными как при перевозке, так и в течение проведения анализов. Исследования на гомогенность и стабильность должны быть проведены перед отправкой испытательного материала из лаборатории-организатора.

Пищевой образец должен содержать характерную фоновую микрофлору или интерферирующие компоненты, которые также должны оставаться стабильными при перевозке и в ходе исследований, как это описано в приложении С.

Альтернативный метод должен испытываться с использованием минимум одного типа пищевого продукта, выбранного из пищевых категорий, ранее описанных в приложении В. Качество и пригодность пищевого продукта должны быть определены до исследования.

Характеристики выбранного на основе сравнительных исследований штамма микроорганизма (см. приложение G), используемого для валидации метода, должны быть типичными для искомого рода или вида, например темп роста, антигенные характеристики и чувствительность к вредным веществам и т.д.

Н.2 Транспортирование образцов

Лаборатория-организатор должна определить используемый тип пищевого продукта и проверить, подходит ли упаковка для предстоящей транспортировки.

Индивидуальные образцы должны быть дважды запечатаны для гарантии отсутствия протекания из одного образца, что нарушило бы целостность всех других образцов.

Каждая сотрудничающая лаборатория несет ответственность за передачу лаборатории-организатору подробных сведений, которые гарантируют то, что рассылка образцов для исследования будет соответствовать международным и национальным почтовым правилам.

Лаборатория-организатор должна проверить правильность рассылки образцов и методов распределения, послав набор образцов в сотрудничающую лабораторию с запросом об их немедленном возврате, для того, чтобы перед исследованием уточнить влияние условий пересылки (безопасность и стабильность микроорганизмов). Любые нежелательные влияния должны быть оценены и приняты меры для минимизации предотвращения их появления в будущем.

Для сохранения целевого аналита или естественно существующей микрофлоры неизменными во время распределения в сотрудничающие лаборатории может оказаться необходимым транспортировать образцы в охлажденном или замороженном состоянии. Лаборатория-организатор должна определить условия упаковки и наилучший способ транспортировки. В идеальном случае желательно предусмотреть средства для контроля температуры образцов при транспортировке.

Для каждой лаборатории должна быть предоставлена дополнительная посылка образцов, идентичная испытываемым образцам, для измерения температуры образцов при получении.

Н.3 Организация совместного исследования (см. ISO/TR 11133-1)

Н.3.1 Рабочие протоколы

Стандартные рабочие протоколы должны быть распределены между сотрудничающими сторонами для ознакомления и внесения комментариев до начала испытаний. Окончательный протокол должен быть опубликован до начала оценивания.

Н.3.2 Подтверждение качества образцов

Каждая сотрудничающая лаборатория должна получить указание подсчитать общее бактериальное число в обозначенном образце. Лаборатория-организатор должна направить каждой сотрудничающей лаборатории стандартный метод подсчета.

Н.3.3 Альтернативный метод и стандартный метод

Операторы, проводящие анализ в каждой сотрудничающей лаборатории, должны владеть навыками соответствующего стандарта (при необходимости их следует обучить) и быть хорошо ознакомлены с выполнением альтернативного метода и референтного метода до начала испытаний.

Н.3.4 Реагенты и рабочие условия

Дополнительные факторы, например качество и состав культуральной среды и реагентов, контроль за температурой инкубации и т.д., могут оказывать большое влияние на исход испытания. В связи с этим такую изменчивость нужно минимизировать (например, путем рассылки сред и/или реагентов всем сотрудничающим лабораториям) или это должно быть учтено при интерпретации результатов.

В протоколе должна быть указана степень допустимого отклонения в отношении всех параметров анализа, например времен, температур, масс, суммарного определения числа микроорганизмов на чашках Петри и дня анализа. Если никакие отклонения не допускаются, то должно быть сделано четкое предупреждение.

Н.3.5 Руководство

В течение всего периода валидации лаборатория-организатор должна быть доступна для предоставления консультации или рекомендации сотрудничающим лабораториям.

Н.3.6 Сбор данных

Лаборатория-организатор должна разработать опросный лист, целью которого является сбор информации, относящейся к критически важным моментам протокола. Все сотрудничающие лаборатории должны документировать такие подробности, как pH среды, время инкубации, начальная и конечная температуры инкубации, данные по контролю качества, состояние образцов по прибытии, время прибытия, температура при прибытии, условия хранения/время хранения и т.д. Содержание опросного листа должно быть согласовано лабораторией-организатором и разработчиком альтернативного метода для обеспечения соответствия критически важным этапам анализа или процедурам испытания альтернативным методом.

Н.3.7 Подтверждение качества испытуемых образцов

Лаборатория-организатор должна провести анализ типичных аликвот образцов в запланированный день начала анализа для подтверждения наличия и гомогенности целевого аналита. Образцы, которые до этого хранились в идеальных условиях, также должны быть проанализированы лабораторией-организатором в день начала анализа сотрудничающими лабораториями. Результаты таких анализов можно использовать только для подтверждения процедуры внесения посевного материала и стабильности аналита. Эти результаты нельзя использовать при статистической оценке испытываемого метода.

Приложение I (обязательное). Определение отсутствия целевого аналита в отрицательных контрольных образцах


Приложение I
(обязательное)


Для того чтобы проверить отсутствие целевого микроорганизма в продукте, который будет использоваться в качестве отрицательных контрольных образцов или перед искусственной инокуляцией, необходимо провести анализ испытываемых материалов. Чем больше число исследованных подобразцов, тем больше уверенность в надежности определения. Отрицательные контрольные образцы также проверяют в ходе исследования.

Существует вероятность того, что очень низкие уровни аналита (единицы микроорганизмов) не обнаруживаются из-за количества испытываемого образца или в случае неоднородного распределения микроорганизмов по образцу.

С точки зрения статистики при испытании восьми образцов вероятность обнаружения наличия 1, 2, 3, 4 или 5 клеток на 600 г продукта составляет 0,33; 0,57; 0,72; 0,83 и 0,90 соответственно.

Разделяют число анализируемых образцов на 2 категории:

- минимум шесть образцов анализируют перед началом эксперимента, чтобы проверить отсутствие микроорганизмов, причем число образцов определяется протоколом испытаний;

- дополнительные отрицательные образцы исследуют в ходе эксперимента, причем число образцов определяется протоколом испытаний.

Приложение J (обязательное). Репликация образцов для межлабораторных исследований качественных методов


Приложение J
(обязательное)

J.1 Случай 1 - Соответствует идентичности 1-го этапа культивирования референтного и альтернативного методов

Каждым методом испытывают на каждом из 3-4 уровней контаминации восемь реплик образцов.


ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов


J.2 Случай 2 - Репликация путем дупликации, когда первые этапы культивирования для каждого метода различаются

Каждым методом испытывают на каждом из 3-4 уровней контаминации восемь реплик образцов.


ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов

Приложение K (обязательное). Учет и обсуждение данных


Приложение K
(обязательное)


По завершении межлабораторного исследования вся информация на таблицах данных и результаты должны быть представлены в лабораторию-организатор и изучены следующим образом:

- проверяют, что образцы/комплект испытательного оборудования и т.д. не были повреждены при перевозке;

- указывают товарный знак и номер партии используемой среды. Экспертная лаборатория проверяет, соответствует ли формула референтному методу;

- в случае повреждения образца данные должны быть отбракованы. Нужно также учитывать возможность перекрестной контаминации других образцов в этой упаковке;

- отбраковывают данные, если условия или время транспортировки выходят за рамки специфицированных допустимых отклонений;

- отбраковывают данные, если значения подсчета выходят за рамки специфицированных допустимых отклонений;

- отбраковывают данные, если из данных опросного листа видно, что лаборатория отклонилась от стандартного протокола или от критических рабочих условий.

Приложение L (справочное). Межлабораторное исследование качественных методов: критерии согласованности, соответствия и коэффициент расхождения между согласованностью и соответствием


Приложение L
(справочное)


L.1 Общие требования

Критерии точности, чувствительности и специфичности (см. 5.2.2) не в полной мере характеризуют изменчивость метода внутри и между лабораториями (прецизионность метода).

Это приложение содержит дополнительные критерии (согласованность, соответствие и коэффициент расхождения между согласованностью и соответствием), которые позволяют проанализировать такую изменчивость.

Критерии повторяемости и воспроизводимости характеризуют возможную разницу между двумя образцами, отправленными в одну или разные лаборатории. Поскольку разность неколичественных данных нельзя использовать, статистика качественных методов основана на вероятности (выраженной в процентах) того, что два образца дадут одинаковый результат.

Такие критерии разработаны в Европейском проекте SMT CT 96 2098, финансируемом Европейской комиссией/DG XII, для валидации шести основных стандартизованных методов, используемых в микробиологии пищевых продуктов (координатор - Др. C.Lahellec, AFSSA, Франция) [9].

Вычисления представлены в таблице L.1.


Таблица L.1 - Примеры числовых данных

Лаборатории

Номер реплики

Число положительных результатов (из 5)

1

2

3

4

5

1

+

+

+

+

+

5

2

+

+

+

+

+

5

3

+

+

+

+

+

5

4

+

+

+

+

+

5

5

-

-

+

+

+

3

6

+

+

+

+

+

5

7

-

-

+

+

+

3

8

+

+

+

+

+

5

9

+

+

+

+

+

5

10

+

+

+

+

+

5



Данные, приведенные в этой таблице, относятся только к одному уровню одного типа пищевого продукта. На практике совместное испытание является более обширным, но меньший набор данных облегчает объяснение вычислений.

L.2 Согласованность (accordance)

L.2.1 Определение

Согласованность (accordance) - это выраженная в процентах вероятность получения одинакового результата (т.е. оба положительные или оба отрицательные) от двух идентичных подобразцов, анализируемых в одной лаборатории, в условиях повторяемости (т.е. один оператор, использующий то же оборудование и те же реагенты с минимальным разумным временным интервалом).

Согласованность, таким образом, эквивалентна повторяемости в количественных методах.

L.2.2 Вычисления

Для получения согласованности по результатам межлабораторного исследования для каждой лаборатории-участника поочередно вычисляют вероятность того, что два образца дадут один и тот же результат. Затем находят среднюю вероятность по всем лабораториям.

Например, см. таблицы L.1 и L.2.

Для тех лабораторий (как, например, лаборатория 1), где все образцы оказались положительными, наилучшая оценка вероятности получения того же результата точно равна 1,00 или 100%.

Для других (например, лаборатории 5 и 7) вероятность того, что одна реплика окажется положительной, равна 3/5=0,60. Для получения вероятности положительности пары реплик возводят эту вероятность в квадрат (0,6ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=0,36). Проделывают ту же операцию для получения вероятности отрицательности пары реплик (0,4ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=0,16). Затем суммируют эти цифры для получения полной вероятности того, что две реплики дадут одинаковый результат (0,36+0,16=0,52).

Проводят такие вычисления для всех лабораторий (см. таблицу L.2).


Таблица L.2 - Вычисление согласованности

Лабора-
тории

Число положи-
тельных образцов

Вероятность положи-
тельного образца

Вероятность пар положи-
тельных образцов

Вероятность отрица-
тельного образца

Вероятность пар отрица-
тельных образцов

Вероятность пар с одинаковыми результатами

1

5

1,00

1,00

0,00

0,00

1,00

2

5

1,00

1,00

0,00

0,00

1,00

3

5

1,00

1,00

0,00

0,00

1,00

4

5

1,00

1,00

0,00

0,00

1,00

5

3

0,60

0,36

0,40

0,16

0,52

6

5

1,00

1,00

0,00

0,00

1,00

7

3

0,60

0,36

0,40

0,16

0,52

8

5

1,00

1,00

0,00

0,00

1,00

9

5

1,00

1,00

0,00

0,00

1,00

10

5

1,00

1,00

0,00

0,00

1,00

Среднее: 0,904=90,4%



Согласованность - это среднее значение вероятностей, что для двух реплик будет получен одинаковый результат для каждой лаборатории. В данном случае согласованность составляет 90,4%.

Примечание - Так как повторяемость характеризует разницу, в то время как согласованность измеряет сходство, высокие значения согласованности означают, что метод надежен в отличии от количественных методов, где желательны низкие значения повторяемости.

L.3 Соответствие (concordance)

L.3.1 Определение

Соответствие (concordance) - это выраженная в процентах вероятность получения одинакового результата от двух идентичных образцов, анализируемых в разных лабораториях.

Соответствие, таким образом, является эквивалентом воспроизводимости в количественных методах.

L.3.2 Вычисления

Для вычисления соответствия по результатам межлабораторного исследования используют поочередно каждую реплику в каждой лаборатории-участнике и группируют по парам с идентичными результатами всех других лабораторий.

Соответствие - это выраженная в процентах доля всех пар, дающих одинаковые результаты, от всех возможных упомянутых пар данных.

Например, см. таблицы L.1 и L.3.


Таблица L.3 - Вычисление соответствия

Лаборатории

Число положительных образцов

Межлабораторные пары с одинаковыми результатами

Суммарное число межлабораторных пар

1

5

205

225

2

5

205

225

3

5

205

225

4

5

205

225

5

3

133

225

6

5

205

225

7

3

133

225

8

5

205

225

9

5

205

225

10

5

205

225

Всего

1906

2250



Поочередно используют каждую реплику из каждой лаборатории, начиная с первой реплики из лаборатории 1, которая положительна. Ее можно объединить в пару с любой из 45 реплик из других лабораторий, и все, кроме 4, из этих пар (а именно, кроме тех, что составлены из реплик из лабораторий 5 и 7) сочетаются (т.е. являются парой с двумя положительными репликами), и, таким образом, для 41 пары получают одинаковый результат.

То же самое проделывают с остальными 4 репликами лаборатории 1 так, что получается суммарное число в 225 (5·45) межлабораторных пар реплик, включающих реплики из лаборатории 1, из которых 205 (5·41) дают одинаковый результат.

То же выполняют во всех других лабораториях со всеми репликами, которые оказались положительными.

Для лаборатории 5, где 3 реплики из 5 положительны, 2 отрицательных результата совпадают лишь с 2 другими отрицательными результатами лаборатории 7, в то время как из 3 положительных каждый совпадает с 43 положительными репликами. Таким образом, суммарное число пар с одинаковым результатом 133 (2·2+3·43).

Соответствие - это процентная доля всех пар дупликатов, дающих одинаковый результат; в этом примере соответствие равно 84,7% (1906/2250·100).

Примечание - Так как воспроизводимость характеризует разницу, а соответствие характеризует подобие, высокие значения соответствия свидетельствуют о надежности метода в отличие от количественных методов, где желательны низкие значения воспроизводимости.

L.4 Коэффициент расхождения между согласованностью и соответствием

L.4.1 Общие положения и определение

Если соответствие меньше согласованности, то это свидетельствует о том, что вероятность получения одного и того же результата для двух идентичных образцов, анализируемых в одной лаборатории, больше, чем в случае анализа в разных лабораториях, что дает основание предполагать, что может существовать изменчивость рабочих характеристик между лабораториями. В случае количественного метода эта ситуация соответствует тому, что воспроизводимость больше повторяемости.

К сожалению, величины соответствия и согласованности сильно зависят от уровня точности, что затрудняет процесс оценки степени межлабораторной вариации.

Поэтому полезно вычислить коэффициент расхождения между согласованностью и соответствием (ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов), определяемый следующим образом:

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов.

L.4.2 Критерии значимости

Значение 1,00 коэффициента расхождения между согласованностью и соответствием указывает, что согласованность и соответствие одинаковы, и чем больше этот коэффициент, тем более доминирующую роль играет межлабораторная вариация.

Тем не менее значения, превышающие 1,00, могут появляться из-за случайной вариации, поэтому необходимо провести испытания на статистическую значимость для подтверждения, доказательны ли данные о повышенной межлабораторной вариации. "Точным критерием" является наилучший рекомендованный для этого критерийГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов. Основной принцип, лежащий в основе таких критериев, заключается в том, что вероятность события вычисляется для всех наборов результатов для реплик, которые могли привести к общему числу положительных и отрицательных результатов.
_________________
ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов Этот критерий можно вычислить, используя, например, статистические пакеты программ ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов.


Например, см. таблицу L.1.

Возможные распределения общего числа 46 положительных и 4 отрицательных реплик приведены в столбцах в таблице L.4.


Таблица L.4 - Возможные распределения положительных реплик (столбцы) для получения общего числа 46 положительных

4

3

3

2

1

4

4

3

4

5

4

4

5

5

5

4

5

5

5

5

5

5

5

5

5

5

5

5

5

5

5

5

5

5

5

5

5

5

5

5

5

5

5

5

5

5

5

5

5

5



Реальное распределение показано жирным шрифтом (третий столбец)* в таблице L.4. По критерию в ходе вычислений складываются вероятности ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов для всех тех возможных вариантов размещения результатов, которые, по меньшей мере, столь же доказательно свидетельствуют о наличии межлабораторной вариации, как и реальное распределение, - здесь это означает использование всех перестановок в трех столбцах справа. Если эта вероятность меньше, чем принятое значение в 0,05% или 5%, то маловероятно, что эта степень межлабораторных вариаций могла появиться случайно, и, таким образом, можно сделать вывод, что существует значимая межлабораторная вариация в рабочих характеристиках.
________________
* Текст документа соответствует оригиналу. Выделение жирным шрифтом в Таблице L.4 не приводится. - Примечание изготовителя базы данных.

В иллюстративной таблице L.4 значение ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=0,039 указывает, что межлабораторная вариация значима с уровнем 5%.

В случаях, когда программное обеспечение для "Точного критерия" недоступно, в качестве альтернативы можно использовать обычный статистический анализ с помощью критерия хи-квадрат таблиц сопряженности признаков. Результаты этого критерия менее надежны, чем результаты "точного критерия" при количестве реплик, обычно используемом в совместных исследованиях, но результаты моделирования дают основания полагать, что такой критерий является разумным указателем значимости межлабораторных расхождений.

При использовании любого критерия следует учитывать, что способность обнаруживать межлабораторные расхождения зависит от числа лабораторий и числа повторных образцов, проанализированных каждой лабораторией. Незначимый результат таких критериев не должен приниматься как указание на то, что рабочие характеристики лабораторий не отличаются, а является свидетельством того, что расхождения не доказаны, особенно если значение ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов чуть превышает 0,05. Идеальным решением было бы приводить значение коэффициента расхождения между согласованностью и соответствием с указанием среднеквадратической погрешности или доверительных пределов, но распределение коэффициента расхождения между согласованностью и соответствием сильно асимметрично, что затрудняет получение надежных пределов.

Приложение М (обязательное). Репликация образцов для определения относительной точности количественных методов


Приложение М
(обязательное)

M.1 Случай 1 - И в референтном, и в альтернативном методах используют одинаковые десятичные разбавления каждого подобразца

Обоими методами культивируется одинаковое число подобразцов (минимум 2, а желательно - от 5 до 10).


ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов


Случай 2 - Только референтный метод требует десятичных разбавлений

Обоими методами культивируется одинаковое число подобразцов (минимум 2, а желательно - от 5 до 10).


ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов

Приложение N (обязательное). Примеры приемлемых и неприемлемых ситуаций и диапазон измерений для оценки линии регрессии для количественных методов


Приложение N
(обязательное)


Неприемлемые ситуации

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов

Рисунок N.1 - Отсутствие центральных точек

Рисунок N.2 - Плохое разделение на кластеры


ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов


N.1 Приемлемая ситуация


ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов


Рисунок N.5 - Приемлемая ситуация

Приложение О (обязательное). Оценка линейности количественных методов при помощи графического представления


Приложение О
(обязательное)

О.1 Случаи нелинейности


ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов


Рисунок О.1


ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов


Рисунок О.2


ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов


Рисунок О.3

О.2 Случаи линейности

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов


Приложение Р (обязательное). Предел обнаружения и предел количественного определения числа микроорганизмов

Приложение Р
(обязательное)

Р.1 Предел обнаружения

Обычно при наличии неопределенности метода, связанной, например, с используемым образцом, наблюдение только одной колониеобразующей единицы (КОЕ) на среде не достаточно для предположения о присутствии аналита. На таком низком уровне для качественных методов необходим дихотомический подход к событию, т.е. выявление присутствия (1 и более КОЕ) и отсутствия (нет КОЕ). Таким образом, процесс подчиняется закону Пуассона (низкие или высокие значения) или биномиальному закону (промежуточные значения) с частотой присутствия ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов.

Учитывая, что теоретический отрицательный контрольный образец не дает результата о присутствии аналита, предел обнаружения для низкой контаминации (пуассоновский) достигается минимум по ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов присутствиям, соответствующим порогам принятия решения ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=3 (при ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=95%) или 5 (при 99%). Пределы обнаружения также получают, включая статистическую ошибку 2-го типа ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов, например ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=7 при односторонней ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=5% и ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов90%.

Пуассоновский закон дает минимальное число ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов положительных результатов из ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов (пропорционально ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов) для достижения значимо положительного утверждения на уровне доверительной вероятности ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов (см. таблицу Р.1).


Таблица Р.1 - Минимальное число ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методовположительных результатов из ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов, если ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=0,95

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов, если ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=0,99

1

1

1

2

2

2

3

2

3

4

3

3

От 5 до 15

3

4

16 и больше

3

5



Однако не исчезает другой тип ошибки: недостаточная статистическая мощность, если размер выборки ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов слишком мал. Например, отсутствие положительных при ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=2 образцах означает, что вероятность контаминации меньше 78% (с 95% доверительной вероятности). Один положительный из двух соответствует вероятности контаминации 2,5% или более с той же доверительной вероятностью. Можно видеть, что для достижения значимо положительного утверждения при уровнях доверительной вероятности 95% или 99% минимальная вероятность ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов контаминации уменьшается с увеличением ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов: ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов и соответственно 5/ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов (точнее 2,996/ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов и 4,605/ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов). Из этого в основном следует, что если нужно получить вероятность контаминации ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=10% (при 95%), то необходимо взять более 30 образцов (ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов). Минимальный уровень ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов, таким образом, является показательным.

Р.2 Предел определения

Применение правила Ассоциации АОАС к общему числу микроорганизмов позволяет получить значение ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов100. В данном стандарте априори используется Пуассоновское распределение со значениями ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов и ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов%, что дает ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов100.

Р.3 Объем образца

До сих пор объем образца не учитывался. При разделении образца на множество подобразцов и использовании всех их для определения наличия контаминации необходимо обнаружение по меньшей мере трех (или пяти) КОЕ во всем образце. Следовательно, вышеуказанные пределы можно представить в виде числа КОЕ для данного подобразца. Повторять выбор образца, пока не получатся по меньшей мере три колонии для определения окончательной оценки объема.

В общем, полученный минимальный объем нужен для микробиологического определения; его также можно получить путем разбавления. Таким образом, теоретический предел ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов КОЕ на среде при разбавлении, в конце концов, корректируется умножением на коэффициент разбавления ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов, т.е. получается ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов. Например, ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=7 КОЕ/мг во взвеси с разбавлением 1 к 10 твердого образца соответствовал бы пределу ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=70 КОЕ/мг в твердом образце.

Приложение Q (обязательное). Устойчивая оценка дисперсии, основанная на рекурсивной медиане Sn


Приложение Q
(обязательное)

Устойчивая оценка дисперсии, основанная на рекурсивной медиане ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов, [1]


ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов

Приложение R (обязательное). Вычисления с помощью метода регрессии


Приложение R
(обязательное)

R.1 Обозначения и предварительные оценки

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов - уровень (концентрации аналита), включая ноль, если не преобразован в логарифмы (ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов от 1 до ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов);

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов - число уровней;

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов - одно повторение, проведенное альтернативным методом, а также стандартным методом (ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов от 1 до ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов);

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов - число повторений, одно и то же число для каждого уровня ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов;

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов - число образцов (ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов).

Априори используют ось ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов для референтного метода и ось ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов для альтернативного метода. При необходимости можно сделать более адекватный выбор в S.2.

R.1.1 Оценивают для уровня среднее значение для каждого образца на этом испытываемом уровне (по всем повторениям), для референтного метода (ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов) и для альтернативного метода (ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов).

Для каждого уровня образца ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов от 1 до ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов и ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов.

R.1.2 Вычисляют среднеквадратические отклонения повторяемости на каждом уровне: (ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов) для референтного метода и (ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов) для альтернативного метода.

Среднеквадратические отклонения повторяемости на каждом уровне образцов от
ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=1 до ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов:

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов, где ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов для ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=2: ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов;

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов, где ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов [аналогично].

R.1.3 Вычисляют глобальное среднеквадратическое отклонение повторяемости ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов на всех уровнях: (ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов) для референтного метода и (ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов) для альтернативного. Глобальное среднеквадратическое отклонение повторяемости ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов всех уровней равно

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов, где ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов в пределах дисперсии;

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов, где ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов в пределах дисперсии.

R.1.4 Оценивают глобальные средние ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов и ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов обоих методов (ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов от 1 до ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов уровней), как показано ниже:

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов и ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов.

R.2 Выбор

Выбирают ортогональную линейную регрессию (см. R.3, GMFR) или линейную регрессию обычных наименьших квадратов (см. R.4, OLSГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов).
________________
ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов OLS - обычный метод наименьших квадратов.


Коэффициент выбора ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов.

- Если ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов, продолжают использовать ось ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов (независимая переменная) для стандартного метода и затем используют оценки по методу OLS (S.4: ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов).

- Если ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов, используют ось ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов для альтернативного метода и ось ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов для референтного и затем используют оценки по методу OLS (см. S.4: ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов). Потом проводят замену всех оценок для ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов на оценки для ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов, и наоборот, т.е.

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов, ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов, ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов, ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов.


Если ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов (случай квазиравной повторяемости по ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов и ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов), используют (ортогональные) оценки по методу GMFR (см. R3), сохраняя ось ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов за референтным методом.

R.3 Ортогональная линейная регрессия (GMFR)

R.3.1 Глобальные среднеквадратические отклонения

Вычисляют глобальные среднеквадратические отклонения: (ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов) для референтного метода и (ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов) для альтернативного метода, как показано:

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов, где ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов;

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов, где ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов.

R.3.2 Оценивают коэффициент корреляции ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов как показано:

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов с ковариацией ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов.


R.3.3 Оценивают отсекаемый отрезок ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов и наклон ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов линии регрессии ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов следующим образом: наклон ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов, отсекаемый отрезок ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов.

R.3.4 Путем регрессии оценивают остаточное среднеквадратическое отклонение ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов по точкам, вычисленным при помощи регрессии:

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов,


где ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов

получено по точкам, вычисленным при помощи регрессии ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов; ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов от 1 до ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов.

R.3.5 Оценивают среднеквадратическое отклонение ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов отсекаемого отрезка ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов и проверяют гипотезу ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=0

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов.


Проверка гипотезы ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=0: ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов с (ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов) степенями свободы.

По таблице Стьюдента получаем: ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов; критическое значение ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов2 для двухсторонней ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=0,05.

R.3.6 Оценивают среднеквадратическое отклонение ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов наклона ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов и проверяют гипотезу ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=1.

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов.


Проверка гипотезы ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=1: ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов с (ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов) степенями свободы.

По таблице Стьюдента получаем: ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов; критическое значение ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов2 для двухсторонней ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=0,05.

Затем переходят к пункту R.4.

R.4 Линейная регрессия, с использованием обычного метода наименьших квадратов (OLS)

R.4.1 Глобальные среднеквадратические отклонения


ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов,

где ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов;

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов,

где ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов.

R.4.2 Коэффициент корреляции

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов

с ковариацией ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов.

R.4.3 Наклон ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов, отсекаемый отрезок ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов для линии регрессии ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов.

R.4.4 Определяют остаточное среднеквадратическое отклонение

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов

по точкам, оцененным при помощи регрессии ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов (ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=1 до ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов, ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов).

R.4.5 Среднеквадратическое отклонение отсекаемого отрезка ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов.


Проверка гипотезы ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=0: ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов с (ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов) степенями свободы.

Статистические функции Excel, которые здесь используются:: ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов для коэффициента корреляции, ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов для ковариации, но эта последняя функция смещена и умножается на ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов, где ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов, а ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов и ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов, которые являются оценками для ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов и ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов, ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов для остаточного ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов на ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов, ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов для вероятности ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов-распределения Стьюдента и ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов для вероятности из ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов-распределения Snedecor-Fisher.

По таблице Стьюдента получаем: ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов; критическое значение ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов2 для двухсторонней ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=0,05.

R.4.6 Стандартное отклонение наклона ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов.


Проверка ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=1:

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов с (ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов) степенями свободы.

По таблице Стьюдента получаем: ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов; критическое значение ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов2 для двухсторонней ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=0,05.

R.5 Критерий линейности (недостаточная подгонка)ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов
________________
ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов Эти сведения отсутствуют в Excel (см. ISO 11095).

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов


с ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов степенями свободы для числителя ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов и ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов для его знаменателя.

По ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов-таблице Снедекора можно получить ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов и критические значения ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов для ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов0,05, как показано в таблице R.1.


Таблица R.1 - ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов и критические значения ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов для ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов0,05

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=2

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=5

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=5

5,41

3,10

ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов=6

4,53

2,78



Это соотношение нелинейно, если ГОСТ ISO 16140-2011 Микробиология продуктов питания и кормов для животных. Протокол валидации альтернативных методов или