Статус документа

ГОСТ ISO 16649-1-2015 Микробиология пищевой продукции и кормов. Горизонтальный метод подсчета бета-глюкуронидаза-положительных Escherichia coli (кишечная палочка). Часть 1. Методика подсчета колоний при температуре 44°С с применением мембран и 5-бром-4-хлор-3-индолил бета-D-глюкуронида (с Поправкой)

5 Разбавитель и питательная среда

См. действующую лабораторную практику в ISO 7218.

5.1 Разбавитель

См. ISO 6887-1 или соответствующий стандарт, касающийся исследуемого продукта.

5.2 Питательная среда

5.2.1 Среда для восстановления: модифицированный минеральный агар с глутаматом натрия (MMGA).

5.2.1.1 Состав


Глутамат натрия	6,35 г
Лактоза	10,0 г
Формиат натрия	0,25 г
L-(-)-Цистин	0,02 г
L-(-)-Аспарагиновая кислота	0,02 г
L-(+)-Аргинин	0,024 г
Тиамин	0,001 г
Никотиновая кислота	0,001 г
Пантотеновая кислота	0,001 г
Гептагидрат сульфата магния (MgSO·7HO)	0,100 г
Железоаммониевый (III) цитрат	0,010 г
Дигидрат кальция хлорид (CaCl·2HO)	0,010 г
Калий фосфорнокислый двузамещенный (KHPO)	0,900 г
Хлорид аммония	2,5 г
Агар	от 9 до 18 г
Вода	1000 см
Содержание железа не менее 15% (массовая доля). В зависимости от прочности агарового геля. Примечание - Используемые реактивы должны быть признанного аналитического качества и пригодными для микробиологических исследований.

5.2.1.2 Подготовка

Растворить хлорид аммония в воде. Добавить другие компоненты и нагреть до кипения. При необходимости отрегулировать рН таким образом, чтобы после стерилизации он составлял (6,7±0,2) при температуре 25°С. Разлить по 500 см в подходящие флаконы (6.10). Провести стерилизацию в автоклаве (6.1) при температуре 115°С в течение 10 мин.

5.2.1.3 Подготовка чашек Петри с агаром

Вливают 12-15 см среды в стерильные чашки Петри (6.11) и дают застыть. Подсушивают чашки с агаром (см. ISO 7218). Чашки можно хранить при температуре (3±2)°С в течение пяти дней.

Поверхность агара должна быть достаточно сухой, чтобы позволить излишней влаге исчезнуть в течение 15 мин после распределения инокулята (1 см).

5.2.2 Селективная среда: среда с триптоном, солями желчных кислот и Х-глюкуронидом (ТВХ)

5.2.2.1 Состав


Ферментативный гидролизат казеина	20,0 г
Соли желчных кислот N 3	1,5 г
5-Бром-4-хлор-3-индолил-бета-D-глюкуроновая кислота (BCIG)	144 мкмоль
Диметилсульфоксид (DMSO)	3 см
Агар	от 9 до 18 г
Вода	1000 см
Например, 0,075 г соли циклогексиламмония. Диметилсульфоксид вреден при вдыхании и контакте. При работе с ним рекомендуется использовать вытяжной шкаф. В виду токсичности можно использовать рекомендованный изготовителем разбавитель. В зависимости от прочности агарового геля. Примечание - Используемые реактивы должны быть признанного аналитического качества и пригодными для микробиологических исследований.

5.2.2.2 Подготовка

Растворяют BCIG в диметилсульфоксиде или в рекомендованном изготовителем разбавителе. Растворяют все компоненты в воде и нагревают до кипения.

При необходимости отрегулировать рН таким образом, чтобы после стерилизации он составлял (7,2±0,2) при температуре 25°С. Разливают по 500 см в подходящие флаконы (6.10). Проводят стерилизацию в автоклаве (6.1), при температуре 121°C в течение 15 мин.

5.2.2.3 Подготовка чашек Петри

Производят действия, приведенные в 5.2.1.3.