ГОСТ EN 12823-2-2014

     

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ

Определение содержания витамина А методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

Часть 2

Измерение содержания бета-каротина

Foodstuffs. Determination of vitamin A by high performance liquid chromatography. Part 2. Measurement of -carotene

МКС 67.050

Дата введения 2017-07-01

Предисловие

Цели, основные принципы и общие правила проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены"

Сведения о стандарте

1 ПОДГОТОВЛЕН Республиканским государственным предприятием "Казахстанский институт стандартизации и сертификации" Комитета технического регулирования и метрологии и Техническим комитетом по стандартизации ТК 71 "Экологическая безопасность сырья, материалов, веществ и сооружений" на основе собственного перевода немецкоязычной версии стандарта, указанного в пункте 5

2 ВНЕСЕН Комитетом технического регулирования и метрологии Министерства индустрии и новых технологий Республики Казахстан

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 25 июня 2014 г. N 45)

За принятие проголосовали:

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 5 мая 2016 г. N 289-ст межгосударственный стандарт ГОСТ EN 12823-2-2014 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2017 г.

5 Настоящий стандарт идентичен европейскому стандарту EN 12823-2:2000* "Продукты пищевые. Определение содержания витамина А методом жидкостной хроматографии высокого разрешения. Часть 2. Измерение содержания бета-каротина" ("Foodstuffs - Determination of vitamin A by high performance liquid chromatography - Part 2: Measurement of (-carotene", IDT).

________________

* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей. - Примечание изготовителя базы данных.

Европейский стандарт EN 12823-2:2000 подготовлен Техническим комитетом CEN/ТС 275 "Анализ пищевых продуктов. Горизонтальные методы" Европейского комитета по стандартизации (CEN).

При применении настоящего стандарта рекомендуется использовать вместо ссылочных международных и европейских стандартов соответствующие им межгосударственные стандарты, сведения о которых приведены в дополнительном приложении ДА

6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

7 ПЕРЕИЗДАНИЕ. Ноябрь 2019 г.

          Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта и изменений к нему на территории указанных выше государств публикуется в указателях национальных стандартов, издаваемых в этих государствах, а также в сети Интернет на сайтах соответствующих национальных органов по стандартизации.

В случае пересмотра, изменения или отмены настоящего стандарта соответствующая информация будет опубликована на официальном интернет-сайте Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации в каталоге "Межгосударственные стандарты"

     1 Область применения

Настоящий стандарт устанавливает метод определения полного -каротина в пищевых продуктах при помощи высокоэффективной жидкостной хроматографии (далее - ВЭЖХ).

     2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты. Для датированных ссылок применяют только указанное издание ссылочного стандарта, для недатированных - последнее издание (включая все изменения).

EN ISO 3696, Water for analytical laboratory use. Specification and test methods (Вода для лабораторного анализа. Технические требования и методы испытаний)

ISO 5555, Animal and vegetable fats and oils. Sampling (Масла и жиры животные и растительные. Отбор проб)

EN 12823-1:2000, Foodstuffs. Determination of vitamin A by high performance liquid chromatography. Measurement of all-trans-retinol and 13-cis-retinol (Продукты питания. Определение содержания витамина А методом жидкостной хроматографии высокого разрешения. Часть 1. Измерение содержания полного транс-ретинола и 13-цис-ретинола)

     3 Сущность метода

Сумму изомеров -каротина в испытуемом растворе пробы определяют методом ВЭЖХ с помощью спектрофотометрического детектора в видимом диапазоне. Экстракт, полученный после омыления, описанного в EN 12823-1, может использоваться для количественного анализа. Информация по идентификации на основании времени удерживания и определению по площади или высоте пиков указана в [3], [7].

Может быть также использован метод внутреннего стандарта, если соответствующие проверки полноты обнаружения подтверждают, что поведение внутреннего стандарта и аналита тождественно.

     4 Реактивы

Для испытаний используют реактивы гарантированной чистоты и воду не ниже 1-й степени чистоты в соответствии с EN ISO 3696.

4.1 Метанол.

4.2 Этанол абсолютный, объемной долей 100%.

4.3 Этанол, объемной долей 96%.

4.4 Сульфат натрия (сернокислый натрий) безводный.

4.5 Растворы гидроксида калия (KOH) для омыления с соответствующими массовыми концентрациями, например: KOH = 50 г/100 см или 60 г/100 см, или спиртовые растворы, например: 28 г KOH в 100 см смеси этанол/вода (в объемном соотношении 9:1).

4.6 Антиоксиданты: аскорбиновая кислота (АК), аскорбат натрия, сульфид натрия (), бутилгидрокситолуол, пирогаллол или гидрохинон.

4.7 Растворители и экстрагенты: ацетонитрил, диэтиловый эфир (без пероксидов), диизопропиловый эфир, петролейный эфир (кипящий при температуре от 40°С до 60°С), н-гексан, дихлорметан, тетрагидрофуран, толуол или их смеси.

4.8 Раствор ацетата аммония в метаноле, например, c()=0,05 моль/дм.

4.9 Триэтиламин.

4.10 Растворители, выполняющие роль подвижной фазы в ВЭЖХ, например, смесь ацетонитрил (см. 4.7) - метанольный раствор ацетата аммония (см. 4.8) - дихлорметан (см. 4.7) (75:20:5 в объемном соотношении), содержащий 0,1% (по массе) бутилгидрокситолуола (см. 4.6) и 0,05% (по массе) триэтиламина (см. 4.9). Информация о подвижных фазах для альтернативных систем ВЭЖХ приведена в приложении С.

4.11 Образцы сравнения

4.11.1 Общие положения

Чистота образцов сравнения -каротина и -каротина варьируется между 90% и 100%. Поэтому необходимо определить массовую концентрацию градуировочного раствора спектрофотометрическим методом (см. 4.12.2).

4.11.2 -каротин, М () = 536,85 г/моль, с массовой долей -каротина не менее 95%.

4.11.3 -каротин, М () = 536,85 г/моль, для качественного анализа.

4.11.4 Ликопин, М () = 536,85 г/моль, для качественного анализа.

4.12 Приготовление исходного раствора

4.12.1 Исходный раствор -каротина

Растворяют 3 мг образца сравнения -каротина (см. 4.11.2) в 20 смдихлорметана, тетрагидрофурана или толуола (см. 4.7), помещая мерную колбу на 30 с в ультразвуковую баню (см. 5.6).

Разбавляют этот раствор н-гексаном до объема 100 см.

Разбавляют 10,0 см полученного раствора н-гексаном до 100 см.

1 см этого раствора содержит 3 мкг -каротина в смеси н-гексан/дихлорметан (98:2) (по объему), смеси н-гексан/тетрагидрофуран (98:2) (в объемном соотношении) или н-гексан/толуол (98:2) (в объемном соотношении).

Хранят исходный раствор в защищенном от света месте при температуре ниже 4°С.

4.12.2 Проверка концентрации и чистоты

Измеряют оптическую плотность исходного раствора -каротина (см. 4.12.1) при длине волны 453 нм на спектрофотометре (см. 5.1). Вычисляют массовую концентрацию , мкг/см, по формуле

,                                                     (1)

где - оптическая плотность исходного раствора при максимальной длине волны 453 нм;

2592 - значение коэффициента экстинкции Е для раствора -каротина в н-гексане. Оно может значительно отличаться для других растворителей [8].

Соотношение должно быть больше 15, а соотношение должно находиться в диапазоне от 1,14 до 1,18 для чистого полного транс--каротина [8].

4.12.3 Стандартный раствор -каротина

Пипеткой отмеряют 20 см исходного раствора -каротина (см. 4.12.1) в круглодонную колбу и удаляют растворитель в условиях пониженного давления (см. 5.2) при температуре не выше 50°С. Растворяют полученный осадок в 20 см растворителя, совместимого с обращенно-фазовой ВЭЖХ.

Стандартный раствор хранят в защищенном от света месте при температуре ниже 4°С. Раствор стабилен в течение одной недели.