ГОСТ EN 14132-2013

    
МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

ПРОДУКТЫ ПИЩЕВЫЕ

Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта

Foodstuffs. Determination of ochratoxin A in barley and roasted coffee. HPLC method with immunoaffinity column cleanup

МКС 67.140.20

Дата введения 2015-07-01

Предисловие

Цели, основные принципы и общие правила проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены"

     Сведения о стандарте

1 ПОДГОТОВЛЕН Открытым акционерным обществом "Всероссийский научно-исследовательский институт сертификации" (ОАО "ВНИИС") при участии специалистов Государственного научного учреждения "Всероссийский научно-исследовательский институт консервной и овощесушильной промышленности" Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИИКОП Россельхозакадемии) на основе собственного перевода на русский язык европейского стандарта, указанного в пункте 5

2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 14 ноября 2013 г. N 44)

За принятие проголосовали:

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 22 ноября 2013 г. N 1916-ст межгосударственный стандарт ГОСТ EN 14132-2013 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2015 г.

5 Настоящий стандарт идентичен европейскому региональному стандарту EN 14132:2009* "Продукты пищевые. Определение охратоксина А в ячмене и жареном кофе. Метод ВЭЖХ с применением иммуноаффинной колоночной очистки экстракта ("Foodstuffs. Determination of ochratoxin A in barley and roasted coffee. HPLC method with immunoaffinity column cleanup, IDT).

________________

* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей. - Примечание изготовителя базы данных.

При применении настоящего стандарта рекомендуется использовать вместо ссылочных европейских международных стандартов соответствующие им межгосударственные стандарты, сведения о которых приведены в дополнительном приложении ДА

6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

7 ПЕРЕИЗДАНИЕ. Декабрь 2019 г.

     Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта и изменений к нему на территории указанных выше государств публикуется в указателях национальных стандартов, издаваемых в этих государствах, а также в сети Интернет на сайтах соответствующих национальных органов по стандартизации.
     
     В случае пересмотра, изменения или отмены настоящего стандарта соответствующая информация будет опубликована на официальном интернет-сайте Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации в каталоге "Межгосударственные стандарты"

     1 Область применения

Настоящий стандарт устанавливает метод определения охратоксина А в ячмене и жареном кофе с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с применением очистки экстракта на колонке с иммуноаффинным сорбентом. Метод прошел валидацию для диапазона содержания охратоксина А в ячмене от 0,1 до 4,5 мкг/кг и в жареном кофе от 0,2 до 5,5 мкг/кг.

     2 Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты. Для датированных ссылок применяют только указанное издание ссылочного стандарта, для недатированных - последнее издание (включая все изменения).

EN ISO 3696 Water for analytical laboratory use - Specification and test methods (ISO 3696:1987) (Вода для лабораторного анализа. Технические требования и методы испытаний)

     3 Сущность метода

При испытании ячменя охратоксин А экстрагируют из пробы водно-ацетонитрильной смесью, экстракт подвергают очистке на иммуноаффинной колонке. При испытании жареного кофе охратоксин А экстрагируют из измельченной пробы смесью метанола с водным раствором двууглекислого натрия. Экстракт подвергают очистке сначала на колонке с силикагелем, модифицированным фенилсилильными группами, затем на иммуноаффинной колонке. Количественное определение охратоксина А проводят методом ВЭЖХ с применением обращенно-фазовой колонки и флуориметрическим детектированием.

     4 Реактивы

4.1 Общие положения

Для проведения анализа при отсутствии особо оговоренных условий используют только реактивы гарантированной аналитической чистоты и дистиллированную воду или воду не ниже первой степени чистоты по EN ISO 3696:1995. Используемые растворители по степени чистоты должны быть пригодны для применения в анализе с помощью ВЭЖХ. Допускается использование доступных для приобретения готовых растворов при условии, что их характеристики не отличаются от приведенных ниже.

4.2 Натрий хлористый.

4.3 Натрий фосфорнокислый двузамещенный.

4.4 Калий фосфорнокислый однозамещенный.

4.5 Калий хлористый.

4.6 Натрия гидроксид, раствор массовой концентрации (NaOH)=8,0 г/дм

Растворяют 8 г гидроксида натрия в 900 см воды, объем полученного раствора доводят водой до 1 дм.

4.7 Раствор фосфатно-хлоридный буферный

Растворяют 8,0 г хлористого натрия по 4.2, 1,2 г двузамещенного фосфорнокислого натрия по 4.3, 0,2 г однозамещенного фосфорнокислого калия по 4.4 и 0,2 г хлористого калия по 4.5 в 900 см воды. Значение рН полученного раствора доводят до 7,4 ед. рН путем добавления раствора гидроксида натрия по 4.13, после чего объем раствора доводят водой до 1 дм. В качестве альтернативы допускается использовать доступный для приобретения таблетированный препарат аналогичного состава.

4.8 Натрий двууглекислый, раствор массовой концентрации 30 г/дм

Растворяют 30 г двууглекислого натрия в 900 см воды в мерной колбе вместимостью 1 дм. Объем содержимого колбы доводят до метки водой.

4.9 Кислота уксусная ледяная массовой долей w 98%.

4.10 Метанол.

4.11 Ацетонитрил.

4.12 Толуол.

4.13 Смесь толуола с уксусной кислотой

Смешивают 99 объемных частей толуола по 4.12 с одной объемной частью уксусной кислоты по 4.9.

4.14 Экстрагент для ячменя

Смешивают шесть объемных частей ацетонитрила по 4.11 с четырьмя объемными частями воды.

4.15 Экстрагент для кофе

Смешивают одну объемную часть метанола по 4.10 с одной объемной частью раствора двууглекислого натрия по 4.8.

4.16 Дилюент для приготовления раствора пробы для анализа с помощью ВЭЖХ

Смешивают 30 объемных частей метанола по 4.10 с 70 объемными частями воды и одной объемной частью уксусной кислоты по 4.9.

4.17 Подвижная фаза

Смешивают 102 объемные части воды с 96 объемными частями ацетонитрила по 4.11 и двумя объемными частями уксусной кислоты по 4.9. Подвижную фазу фильтруют через мембранный фильтр диаметром пор 0,2 мкм по 5.12. Перед использованием подвижную фазу дегазируют.

4.18 Раствор 1 для промывания колонки с фенилсилильным сорбентом

Смешивают 20 объемных частей метанола по 4.10 с 80 объемными частями раствора двууглекислого натрия по 4.8.

4.19 Раствор 2 для промывания колонки с фенилсилильным сорбентом массовой концентрации двууглекислого натрия 1 г/100 см

Растворяют 1 г двууглекислого натрия в 90 см воды в мерной колбе вместимостью 100 см, объем содержимого в колбе доводят водой до метки.

4.20 Элюент для очистки экстракта на фенилсилильной колонке

Смешивают семь объемных частей метанола по 4.10 с 93 объемными частями воды.

4.21 Охратоксин А, основной раствор

Для приготовления основного раствора 1 мг кристаллического охратоксина А или, при использовании ампульного препарата в пленочной форме, содержимое одной ампулы растворяют в таком объеме смеси толуола с уксусной кислотой по 4.13, чтобы массовая концентрация охратоксина А в полученном растворе составила от 20 до 30 мкг/см.

Для определения точной массовой концентрации охратоксина А в основном растворе регистрируют его оптическую плотность в диапазоне длин волн от 300 до 370 нм с интервалом 5 нм в кварцевой кювете длиной оптического пути 1 см по 5.14. В качестве раствора сравнения используют смесь толуола с уксусной кислотой по 4.13. По полученному спектру определяют длину волны, соответствующую максимальной оптической плотности. Массовую концентрацию охратоксина А, , мкг/см, рассчитывают по формуле

,                                               (1)

где - максимальное значение оптической плотности в данном диапазоне длин волн (333 нм);

М - молярная масса охратоксина А, г/моль (М=403,8 г/моль);

- молярный коэффициент поглощения охратоксина А в смешанном растворителе по 4.13, м/моль (544 м/моль);

b - длина оптического пути кюветы, см.

Основной раствор хранят при температуре около минус 18°С, при этом срок его годности составляет не менее четырех лет.

4.22 Охратоксин А, стандартный раствор промежуточной массовой концентрации

Раствор готовят разбавлением основного раствора по 4.21 смесью толуола с уксусной кислотой по 4.13 до получения раствора массовой концентрации охратоксина А 10 мкг/см.