• Текст документа
  • Статус
  • Скан-копия


ГОСТ Р 52830-2007
(ИСО 7251:2005)

Группа Н09

     
     
НАЦИОНАЛЬНЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

МИКРОБИОЛОГИЯ ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТОВ И КОРМОВ

Метод обнаружения и определения количества презумптивных бактерий
Escherichia coli. Метод наиболее вероятного числа

Microbiology of food and feeding stuffs.
Method for the detection and enumeration of presumptive Escherichia coli.
Most probable number technique



ОКС 67.040,
65.120

Дата введения 2009-01-01

     
     
Предисловие


Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. N 184-ФЗ "О техническом регулировании", а правила применения национальных стандартов Российской Федерации - ГОСТ Р 1.0-2004 "Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения"

Сведения о стандарте

1 ПОДГОТОВЛЕН ОАО "ВНИИС" совместно с ГУ "Ярославская государственная испытательная лаборатория молочного сырья и продукции" на основе аутентичного перевода стандарта, указанного в пункте 4

2 ВНЕСЕН Техническим комитетом по стандартизации ТК 335 "Методы испытаний агропромышленной продукции на безопасность"

3 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 27 декабря 2007 г. N 457-ст

4 Настоящий стандарт является модифицированным по отношению к международному стандарту ИСО 7251:2005 "Микробиология пищевых продуктов и кормов. Метод обнаружения и определения количества презумптивных бактерий Escherichia coli. Метод наиболее вероятного числа" (ISO 7251:2005 "Microbiology of food and animal feeding stuffs - Horizontal method for the detection and enumeration of presumptive Escherichia coli - Most probable number technique"). При этом дополнительные слова, фразы, абзацы, включенные в текст стандарта для учета потребностей национальной экономики Российской Федерации и особенностей российской национальной стандартизации, выделены курсивом.

Наименование настоящего стандарта изменено относительно наименования указанного международного стандарта для приведения в соответствие с ГОСТ Р 1.5-2004 (подраздел 3.5)

5 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ


Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячно издаваемых информационных указателях "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

     1 Область применения


Настоящий стандарт устанавливает метод обнаружения и определения количества презумптивных бактерий Escherichia coli методом культивирования в жидких питательных средах и расчета наиболее вероятного числа (НВЧ) после инкубации при температуре 37 °С и 44 °С.

Настоящий стандарт применяется при исследовании продуктов, предназначенных для употребления в пищу человеком и для кормления животных, а также образцов окружающей среды в местах производства и оборота пищевых продуктов.

Примечание - Некоторые патогенные штаммы Escherichia coli не растут при температуре 44 °С.

2 Нормативные ссылки


В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ Р 51426-99 (ИСО 6887-83) Микробиология. Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Общее руководство по приготовлению разведений для микробиологических исследований

ГОСТ Р 51446-99 (ИСО 7218-96) Микробиология. Продукты пищевые. Общие правила микробиологических исследований

ГОСТ Р 51448-99 (ИСО 3100-2-88) Мясо и мясные продукты. Методы подготовки проб для микробиологических исследований

ГОСТ 26668-85 Продукты пищевые и вкусовые. Методы отбора проб для микробиологических анализов

ГОСТ 26669-85 Продукты пищевые и вкусовые. Подготовка проб для микробиологических анализов

Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информационному указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

3 Термины и определения


В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями:

3.1 презумптивная Escherichia coli (presumptive Escherichia coli): Бактерия, ферментирующая при температуре 44 °С лактозу с образованием газа и образующая индол из триптофана при проведении опыта в соответствии с методом, указанным в настоящем стандарте.

3.2 количество презумптивных бактерий Escherichia coli: Наиболее вероятное число E.coli в смГОСТ Р 52830-2007 (ИСО 7251:2005) Микробиология пищевых продуктов и кормов. Метод обнаружения и определения количества презумптивных бактерий Escherichia coli. Метод наиболее вероятного числа или г образца при условии проведения опыта в соответствии с методом, указанным в настоящем стандарте.

4 Принцип метода

4.1 Метод качественного определения

4.1.1 Определенное количество первичного разведения образца вносят в пробирку с жидкой селективной обогатительной средой.

4.1.2 Пробирку инкубируют до 48 ч при температуре 37 °С. Для обнаружения газообразования пробирку проверяют через 24 и 48 ч инкубации.

4.1.3 При обнаружении затемнения, образования хлопьев или вспенивания среды проводят пересев в пробирку с жидкой селективной средой (ЕС-бульон).

4.1.4 После пересева согласно 4.1.3 пробирку инкубируют до 48 ч при температуре 44 °С. Для обнаружения газообразования пробирку проверяют через 24 и 48 ч инкубации.

4.1.5 При обнаружении вспенивания среды в пробирке после инкубации согласно 4.1.4 проводят пересев в пробирку с безиндольной пептонной водой.

4.1.6 После пересева согласно 4.1.5 пробирку инкубируют до 48 ч при температуре 44 °С. Пробирку проверяют для обнаружения образования индола при распаде триптофана в составе пептона.

4.1.7 Пробирки с затемнением, образованием хлопьев или газообразованием в жидкой селективной обогатительной среде (см. 4.1.1), при пересеве из которых в ЕС-бульон обнаружилось газообразование и образование индола в пептонной воде при температуре 44 °С, расцениваются как содержащие презумптивную Escherichia coli. Результат выражается как "презумптивная Escherichia coli обнаружена" или "презумптивная Escherichia coli не обнаружена (отсутствует)" в граммах или смГОСТ Р 52830-2007 (ИСО 7251:2005) Микробиология пищевых продуктов и кормов. Метод обнаружения и определения количества презумптивных бактерий Escherichia coli. Метод наиболее вероятного числа продукта.

4.2 Метод количественного определения

4.2.1 Определенное количество первичного разведения образца вносят в три пробирки с жидкой селективной обогатительной средой двойной концентрации.

4.2.2 Определенное количество первичного разведения образца вносят в три пробирки с жидкой обогатительной средой одинарной концентрации. Затем в аналогичных условиях определенные количества десятикратного разведения образца вносят в другие три пробирки с жидкой обогатительной средой одинарной концентрации.

4.2.3 Пробирки со средами двойной и одинарной концентрации инкубируют до 48 ч при температуре 37 °С. После 24 и 48 ч инкубации пробирки исследуют для обнаружения газообразования.

4.2.4 Из каждой пробирки со средой двойной концентрации, в которой обнаружено затемнение, образование хлопьев или вспенивание среды, а также из каждой пробирки со средой одинарной концентрации, в которой обнаружено вспенивание, осуществляют пересев в пробирку с жидкой селективной средой (ЕС-бульон).

4.2.5 После пересева согласно 4.2.4 пробирки инкубируют до 48 ч при температуре 44 °С. Для обнаружения газообразования пробирки проверяют через 24 и 48 ч инкубации.

4.2.6 При обнаружении вспенивания среды в пробирках после инкубации согласно 4.2.5 проводят пересев из них в пробирки с безиндольной пептонной водой.

4.2.7 После пересева согласно 4.2.6 пробирку инкубируют до 48 ч при температуре 44 °С. Пробирки проверяют для обнаружения образования индола при распаде триптофана в составе пептона.

4.2.8 Наиболее вероятное число Escherichia coli рассчитывают с помощью таблицы НВЧ (приложение А), в зависимости от числа пробирок с селективной обогатительной средой одинарной и двойной концентрации, при пересеве из которых в ЕС-бульон обнаружилось газообразование и образование индола в пептонной воде при температуре 44 °С.

5 Разведение, питательные среды и реактивы


Для текущей лабораторной практики применяют ГОСТ Р 51446.

5.1 Разведения

В общем случае согласно ГОСТ Р 51426, для молочных продуктов - [1].

5.2 Селективная обогатительная среда (бульон с лаурилсульфатом)

5.2.1 Состав среды - в соответствии с таблицей 1.

Таблица 1

Состав среды

а)
Для среды двойной концентрации

b)
Для среды одинарной концентрации

Ферментативный перевар растительных и животных тканей, г

40,0

20,0

Лактоза, г

10,0

5,0

Моногидрофосфат калия (KГОСТ Р 52830-2007 (ИСО 7251:2005) Микробиология пищевых продуктов и кормов. Метод обнаружения и определения количества презумптивных бактерий Escherichia coli. Метод наиболее вероятного числаНРOГОСТ Р 52830-2007 (ИСО 7251:2005) Микробиология пищевых продуктов и кормов. Метод обнаружения и определения количества презумптивных бактерий Escherichia coli. Метод наиболее вероятного числа), г

5,5

2,75

Дигидрофосфат калия (KHГОСТ Р 52830-2007 (ИСО 7251:2005) Микробиология пищевых продуктов и кормов. Метод обнаружения и определения количества презумптивных бактерий Escherichia coli. Метод наиболее вероятного числаPOГОСТ Р 52830-2007 (ИСО 7251:2005) Микробиология пищевых продуктов и кормов. Метод обнаружения и определения количества презумптивных бактерий Escherichia coli. Метод наиболее вероятного числа), г

5,5

2,75

Хлорид натрия, г

10,0

5,0

Лаурилсульфат натрия [СНГОСТ Р 52830-2007 (ИСО 7251:2005) Микробиология пищевых продуктов и кормов. Метод обнаружения и определения количества презумптивных бактерий Escherichia coli. Метод наиболее вероятного числа(СНГОСТ Р 52830-2007 (ИСО 7251:2005) Микробиология пищевых продуктов и кормов. Метод обнаружения и определения количества презумптивных бактерий Escherichia coli. Метод наиболее вероятного числа)ГОСТ Р 52830-2007 (ИСО 7251:2005) Микробиология пищевых продуктов и кормов. Метод обнаружения и определения количества презумптивных бактерий Escherichia coli. Метод наиболее вероятного числаOSOГОСТ Р 52830-2007 (ИСО 7251:2005) Микробиология пищевых продуктов и кормов. Метод обнаружения и определения количества презумптивных бактерий Escherichia coli. Метод наиболее вероятного числаNa], г

0,2

0,1

Вода, смГОСТ Р 52830-2007 (ИСО 7251:2005) Микробиология пищевых продуктов и кормов. Метод обнаружения и определения количества презумптивных бактерий Escherichia coli. Метод наиболее вероятного числа

1000

1000


5.2.2 Приготовление среды

Растворяют компоненты среды или готовую дегидратированную питательную среду в воде, при необходимости подогревают. Устанавливают уровень рН, чтобы после стерилизации он соответствовал (6,8±0,2) при температуре 25 °С.

Среду одинарной концентрации разливают по 9 смГОСТ Р 52830-2007 (ИСО 7251:2005) Микробиология пищевых продуктов и кормов. Метод обнаружения и определения количества презумптивных бактерий Escherichia coli. Метод наиболее вероятного числа в пробирки 16х160 мм (см. 6.4) с пробирками-поплавками Дарема (Уленгута) (см. 6.6), среду двойной концентрации разливают по 10 смГОСТ Р 52830-2007 (ИСО 7251:2005) Микробиология пищевых продуктов и кормов. Метод обнаружения и определения количества презумптивных бактерий Escherichia coli. Метод наиболее вероятного числа в пробирки 18х180 мм (см. 6.4) с пробирками-поплавками Дарема (Уленгута) (см. 6.6).

Стерилизуют в автоклаве (см. 6.1) 15 мин при температуре 121 °С.

После стерилизации пробирки-поплавки Дарема (Уленгута) не должны содержать пузырьков воздуха.

5.3 ЕС-бульон (селективная среда)

5.3.1 Состав:

ферментативный перевар казеина

20,0 г;

лактоза

5,0 г;

желчные соли N 3 [2]

1,5 г;

моногидрофосфат калия (KГОСТ Р 52830-2007 (ИСО 7251:2005) Микробиология пищевых продуктов и кормов. Метод обнаружения и определения количества презумптивных бактерий Escherichia coli. Метод наиболее вероятного числаНРОГОСТ Р 52830-2007 (ИСО 7251:2005) Микробиология пищевых продуктов и кормов. Метод обнаружения и определения количества презумптивных бактерий Escherichia coli. Метод наиболее вероятного числа)

4,0 г;

дигидрофосфат калия (KНГОСТ Р 52830-2007 (ИСО 7251:2005) Микробиология пищевых продуктов и кормов. Метод обнаружения и определения количества презумптивных бактерий Escherichia coli. Метод наиболее вероятного числаPOГОСТ Р 52830-2007 (ИСО 7251:2005) Микробиология пищевых продуктов и кормов. Метод обнаружения и определения количества презумптивных бактерий Escherichia coli. Метод наиболее вероятного числа)

1,5 г;

хлорид натрия

5,0 г;

вода

1000 смГОСТ Р 52830-2007 (ИСО 7251:2005) Микробиология пищевых продуктов и кормов. Метод обнаружения и определения количества презумптивных бактерий Escherichia coli. Метод наиболее вероятного числа.

5.3.2 Приготовление среды

Растворяют компоненты среды или готовую дегидратированную питательную среду в воде, при необходимости подогревают. Устанавливают уровень рН, при необходимости, чтобы после стерилизации он соответствовал (6,8±0,2) при температуре 25 °С.

Среду разливают по 10 смГОСТ Р 52830-2007 (ИСО 7251:2005) Микробиология пищевых продуктов и кормов. Метод обнаружения и определения количества презумптивных бактерий Escherichia coli. Метод наиболее вероятного числа в пробирки 16х160 мм (см. 6.4) с пробирками-поплавками Дарема (Уленгута) (см. 6.6).

Стерилизуют в автоклаве (см. 6.1) 15 мин при температуре 121 °С.

После стерилизации пробирки-поплавки Дарема (Уленгута) не должны содержать пузырьков воздуха.

5.3.3 Проверка пригодности и обеспечение качества питательных сред согласно [3] и [4].

5.4 Пептонная вода безиндольная

5.4.1 Состав:

ферментативный перевар казеина

10,0 г;

хлорид натрия

5,0 г;

вода

1000 смГОСТ Р 52830-2007 (ИСО 7251:2005) Микробиология пищевых продуктов и кормов. Метод обнаружения и определения количества презумптивных бактерий Escherichia coli. Метод наиболее вероятного числа.


5.4.2 Растворяют компоненты среды или готовую дегидратированную питательную среду в воде, при необходимости подогревают. Доводят рН, если необходимо, до такого значения, чтобы после стерилизации оно составляло (7,3±0,2) при температуре 25 °С.

Среду разливают по 5-10 смГОСТ Р 52830-2007 (ИСО 7251:2005) Микробиология пищевых продуктов и кормов. Метод обнаружения и определения количества презумптивных бактерий Escherichia coli. Метод наиболее вероятного числа в пробирки 16х160 мм (см. 6.4).

Стерилизуют в автоклаве (см. 6.1) 15 мин при температуре 121 °С.

5.5 Реактив для определения индола (реактив Ковача)

5.5.1 Состав:

4-диметиламинобензальдегид

5,0 г;

2-метилбутан-1-ол или пентан-1-ол

75,0 смГОСТ Р 52830-2007 (ИСО 7251:2005) Микробиология пищевых продуктов и кормов. Метод обнаружения и определения количества презумптивных бактерий Escherichia coli. Метод наиболее вероятного числа;

соляная кислота (ГОСТ Р 52830-2007 (ИСО 7251:2005) Микробиология пищевых продуктов и кормов. Метод обнаружения и определения количества презумптивных бактерий Escherichia coli. Метод наиболее вероятного числа 1,18-1,19 г/смГОСТ Р 52830-2007 (ИСО 7251:2005) Микробиология пищевых продуктов и кормов. Метод обнаружения и определения количества презумптивных бактерий Escherichia coli. Метод наиболее вероятного числа)

25,0 смГОСТ Р 52830-2007 (ИСО 7251:2005) Микробиология пищевых продуктов и кормов. Метод обнаружения и определения количества презумптивных бактерий Escherichia coli. Метод наиболее вероятного числа.

5.5.2 Приготовление реактива

Растворяют 4-диметиламинобензальдегид в 2-метилбутан-1-оле или пентан-1-оле при нагревании на водяной бане, поддерживающей температуру от 50 °С до 55 °С.

Охлаждают и добавляют соляную кислоту.

Хранят реактив, защищенный отсвета, при температуре около 4 °С (ГОСТ Р 51446).

Цвет реактива должен быть от светло-желтого до светло-коричневого.

Примечание - Допускается использовать готовые коммерческие реактивы.

6 Оборудование и лабораторная посуда


Примечание - При одинаковой спецификации одноразовое оборудование предпочтительнее многоразового.


Обычное лабораторное оборудование, а также следующее:

6.1 Стерилизаторы сухожаровые (печи) или паровые (автоклавы) по ГОСТ Р 51446.

6.2 Термостат, поддерживающий температуру (37±1) °С и (44±1) °С.

6.3 Водяная баня, поддерживающая температуру (44±1) °С.

6.4 Пробирки размерами 16х160 мм и 18х180 мм или 20х200 мм.

6.5 Бактериологическая петля из платино-иридиевого или никель-хромового сплава диаметром около 3 мм, вмещающая за один раз около 10 ммГОСТ Р 52830-2007 (ИСО 7251:2005) Микробиология пищевых продуктов и кормов. Метод обнаружения и определения количества презумптивных бактерий Escherichia coli. Метод наиболее вероятного числа среды.

6.6 Пробирки-поплавки Дарема (Уленгута), свободно помещающиеся в пробирки (см. 6.4).

6.7 Пипетки с полным сливом номинальным объемом от 1 до 10 смГОСТ Р 52830-2007 (ИСО 7251:2005) Микробиология пищевых продуктов и кормов. Метод обнаружения и определения количества презумптивных бактерий Escherichia coli. Метод наиболее вероятного числа.

6.8 рН-метр с разрешением 0,01 единиц рН и точностью ±0,1 рН при температуре 25 °С.

7 Отбор проб


В лабораторию направляется представительный образец. Образец не должен быть поврежден или изменен в процессе транспортирования или хранения.

Отбор проб проводят в соответствии с ГОСТ 26668. Рекомендуется достижение соглашения заинтересованных сторон по отбору проб конкретного продукта при отсутствии соответствующего стандарта.

8 Подготовка проб


Подготовку проб проводят в соответствии с ГОСТ Р 51448 и ГОСТ 26669. Рекомендуется достижение соглашения заинтересованных сторон по подготовке проб конкретного продукта при отсутствии соответствующего стандарта.

9 Проведение определения

9.1 Метод качественного определения

9.1.1 Приготовление пробы и первичного разведения в зависимости от вида продукта согласно ГОСТ Р 51426, ГОСТ Р 51448, ГОСТ 26669, [5], [6] или [7].

Состав ЕС-бульона с лаурилсульфатом при определенной концентрации согласно таблице 1 а) и b).

Добавляют 1 смГОСТ Р 52830-2007 (ИСО 7251:2005) Микробиология пищевых продуктов и кормов. Метод обнаружения и определения количества презумптивных бактерий Escherichia coli. Метод наиболее вероятного числа первичного разведения к 9 смГОСТ Р 52830-2007 (ИСО 7251:2005) Микробиология пищевых продуктов и кормов. Метод обнаружения и определения количества презумптивных бактерий Escherichia coli. Метод наиболее вероятного числа бульона с лаурилсульфатом одинарной концентрации (0,1 г или 0,1 смГОСТ Р 52830-2007 (ИСО 7251:2005) Микробиология пищевых продуктов и кормов. Метод обнаружения и определения количества презумптивных бактерий Escherichia coli. Метод наиболее вероятного числа образца) или 10 смГОСТ Р 52830-2007 (ИСО 7251:2005) Микробиология пищевых продуктов и кормов. Метод обнаружения и определения количества презумптивных бактерий Escherichia coli. Метод наиболее вероятного числа первоначального разведения к 10 смГОСТ Р 52830-2007 (ИСО 7251:2005) Микробиология пищевых продуктов и кормов. Метод обнаружения и определения количества презумптивных бактерий Escherichia coli. Метод наиболее вероятного числа бульона с лаурилсульфатом двойной концентрации (1 г или 1 смГОСТ Р 52830-2007 (ИСО 7251:2005) Микробиология пищевых продуктов и кормов. Метод обнаружения и определения количества презумптивных бактерий Escherichia coli. Метод наиболее вероятного числа образца). Для больших объемов пробы первичное разведение приготавливают добавлением 0,1 смГОСТ Р 52830-2007 (ИСО 7251:2005) Микробиология пищевых продуктов и кормов. Метод обнаружения и определения количества презумптивных бактерий Escherichia coli. Метод наиболее вероятного числа или 0,1 г к 9 смГОСТ Р 52830-2007 (ИСО 7251:2005) Микробиология пищевых продуктов и кормов. Метод обнаружения и определения количества презумптивных бактерий Escherichia coli. Метод наиболее вероятного числа разбавителя (ГОСТ Р 51426 или [7]), затем добавляют весь объем первичного разведения к 90 смГОСТ Р 52830-2007 (ИСО 7251:2005) Микробиология пищевых продуктов и кормов. Метод обнаружения и определения количества презумптивных бактерий Escherichia coli. Метод наиболее вероятного числа бульона с лаурилсульфатом одинарной концентрации. Например, добавляют 5 смГОСТ Р 52830-2007 (ИСО 7251:2005) Микробиология пищевых продуктов и кормов. Метод обнаружения и определения количества презумптивных бактерий Escherichia coli. Метод наиболее вероятного числа или 5 г образца к 45 смГОСТ Р 52830-2007 (ИСО 7251:2005) Микробиология пищевых продуктов и кормов. Метод обнаружения и определения количества презумптивных бактерий Escherichia coli. Метод наиболее вероятного числа разбавителя, и весь объем начальной суспензии вносят в 450 смГОСТ Р 52830-2007 (ИСО 7251:2005) Микробиология пищевых продуктов и кормов. Метод обнаружения и определения количества презумптивных бактерий Escherichia coli. Метод наиболее вероятного числа бульона с лаурилсульфатом одинарной концентрации или вносят пробу в равный объем.

9.1.2 Инкубация селективного обогатительного бульона (бульона с лаурилсульфатом)

Инокулированный бульон с лаурилсульфатом одинарной или двойной концентрации (см. 5.2) инкубируют в термостате (см. 6.2), при температуре 37 °С в течение (24±2) ч. Если на этой стадии не обнаруживают ни газообразования, ни замутнения среды, затрудняющего определение газообразования, продолжают инкубацию до (48±2) ч.

Примечание - Время инкубации проб живых моллюсков должно составлять (48±2) ч.


При исследовании некоторых молочных продуктов (например, казеина) пробирки-поплавки Дарема могут застревать на дне пробирки с селективной обогатительной средой. Если после 48 ч инкубации в пробирке обнаруживается лишь помутнение без газообразования, то также осуществляют пересев в ЕС-бульон согласно 9.1.3.

9.1.3 Инокуляция и инкубация селективной среды (ЕС-бульона)

При обнаружении помутнения, выпадения осадка или видимого газообразования после инкубации (см. 9.1.2) селективной среды двойной концентрации или при обнаружении видимого газообразования после инкубации селективной среды одинарной концентрации с помощью бактериологической петли (см. 6.5) проводят пересев в пробирку с ЕС-бульоном. Инокулированный ЕС-бульон инкубируют на водяной бане (см. 6.3) или в термостате (см. 6.2) (24±2) ч при температуре 44 °С. Если на этой стадии не обнаруживают видимого газообразования в ЕС-бульоне (см. 5.3), то общее время инкубации продлевают до (48±2) ч.

Примечание - Общее время инкубации проб живых моллюсков должно составлять (24±2) ч.

9.1.4 Инокуляция и инкубация пептонной воды

При обнаружении видимого газообразования после инкубации согласно 9.1.3 с помощью бактериологической петли (см. 6.5) производят пересев в пробирку с пептонной водой (см. 5.4), предварительно прогретой до температуры 44 °С. Инкубируют (48±2) ч при температуре 44 °С.

9.1.5 Обнаружение образования индола

В пробирку с пептонной водой (см. 5.4) после инкубации согласно 9.1.4 добавляют 0,5 смГОСТ Р 52830-2007 (ИСО 7251:2005) Микробиология пищевых продуктов и кормов. Метод обнаружения и определения количества презумптивных бактерий Escherichia coli. Метод наиболее вероятного числа реактива на индол (см. 5.5). После интенсивного перемешивания через 1 мин проводят оценку реакции. Красное окрашивание в спиртовой фазе свидетельствует о наличии индола.

9.1.6 Оценка результатов

При обнаружении видимого газообразования в пробирке с ЕС-бульоном и образования индола в пробирке с пептонной водой (cм. 9.1.2-9.1.4) селективную обогатительную среду оценивают как положительную (презумптивная Escherichia coli обнаружена).

9.2 Метод количественного определения

9.2.1 Приготовление пробы и первичного разведения в зависимости от вида продукта согласно ГОСТ Р 51426, ГОСТ Р 51448, ГОСТ 26669, [5], [6] или [7].

Подготавливают достаточное число разведений, чтобы в максимальном разведении с уверенностью получить отрицательный результат.

9.2.2 Инокуляция и инкубация селективного обогатительного бульона (бульона с лаурилсульфатом)

9.2.2.1 Подготавливают ряд последовательных разведений, по три пробирки на каждое разведение. Для проб живых моллюсков и некоторых других особых продуктов, а также для получения большей точности результатов необходимо использовать по пять пробирок на каждое разведение (см. приложение А).

9.2.2.2 Берут три пробирки с селективной обогатительной средой двойной концентрации [см. таблицу 1 а)] и, используя стерильную пипетку (см. 6.7), в каждую пробирку вносят по 10 смГОСТ Р 52830-2007 (ИСО 7251:2005) Микробиология пищевых продуктов и кормов. Метод обнаружения и определения количества презумптивных бактерий Escherichia coli. Метод наиболее вероятного числа первичного разведения. Таким образом, каждая пробирка этого ряда будет содержать по 1 г образца.

9.2.2.3 Берут три пробирки с селективной обогатительной средой одинарной концентрации [см. таблицу 1 b)] и, используя новую стерильную пипетку (см. 6.7), в каждую пробирку вносят по 1 смГОСТ Р 52830-2007 (ИСО 7251:2005) Микробиология пищевых продуктов и кормов. Метод обнаружения и определения количества презумптивных бактерий Escherichia coli. Метод наиболее вероятного числа первичного разведения. Таким образом, каждая пробирка этого ряда будет содержать по 0,1 г образца.

9.2.2.4 Для каждого последующего разведения (соответствующего 0,01 г, 0,001 г и т.д. продукта на пробирку) повторяют процедуру, как в 9.2.2.3, используя для каждого разведения новую пипетку. Инокулят и среду тщательно перемешивают.

9.2.2.5 Инокулированные среды с лаурилсульфатом двойной по 9.2.2.1 или одинарной концентрации по 9.2.2.3 и 9.2.2.4 инкубируют в термостате (см. 6.2) при температуре 37 °С в течение (24±2) ч. Если на этой стадии не обнаруживают ни газообразования, ни замутнения среды, затрудняющего определение газообразования, продолжают инкубацию до (48±2) ч.

Примечание - Время инкубации проб живых моллюсков должно составлять (48±2) ч.


При исследовании некоторых молочных продуктов (например, казеина) пробирки-поплавки Дарема могут застревать на дне пробирки с селективной обогатительной средой. Если после 48 ч инкубации в пробирке обнаруживается лишь помутнение без газообразования, то также осуществляют пересев в ЕС-бульон согласно 9.2.3.

9.2.3 Инокуляция и инкубация селективной среды (ЕС-бульона)

9.2.3.1 При обнаружении помутнения, выпадения осадка или видимого газообразования после инкубации селективной среды двойной концентрации [см. таблицу 1 а)] согласно 9.2.2.5 или при обнаружении видимого газообразования после инкубации селективной среды одинарной концентрации [см. таблицу 1 b)] согласно 9.2.2.5 с помощью бактериологической петли (см. 6.5) проводят пересев в пробирку с ЕС-бульоном (см. 5.3).

9.2.3.2 Инокулированный согласно 9.2.3.1 ЕС-бульон инкубируют на водяной бане (см. 6.3) или в термостате (см. 6.2) (24±2) ч при температуре 44 °С. Если на этой стадии не обнаруживают видимого газообразования в ЕС-бульоне (см. 5.3), то общее время инкубации продлевают до (48±2) ч.

Примечание - Общее время инкубации проб живых моллюсков должно составлять (24±2) ч.

9.2.4 Инокуляция и инкубация пептонной воды

При обнаружении видимого газообразования после инкубации согласно 9.2.3.2 с помощью бактериологической петли (см. 6.5) производят пересев в пробирку с пептонной водой (см. 5.4), предварительно прогретой до температуры 44 °С. Инкубируют (48±2) ч при температуре 44 °С.

9.2.5 Обнаружение образования индола

В пробирку с пептонной водой (см. 5.4) после инкубации согласно 9.2.4 добавляют 0,5 смГОСТ Р 52830-2007 (ИСО 7251:2005) Микробиология пищевых продуктов и кормов. Метод обнаружения и определения количества презумптивных бактерий Escherichia coli. Метод наиболее вероятного числа реактива на индол (см. 5.5). После интенсивного перемешивания через 1 мин проводят оценку реакции. Красное окрашивание в спиртовой фазе свидетельствует о наличии индола.

9.2.6 Оценка результатов

При обнаружении видимого газообразования в пробирке с ЕС-бульоном и образования индола в пробирке с пептонной водой (см. 9.2.2-9.2.4) селективную обогатительную среду оценивают как положительную (презумптивная Escherichia coli обнаружена).

Для каждого разведения определяют число положительных результатов для среды двойной концентрации [см. таблицу 1 а)] и одинарной концентрации [см. таблицу 1 b)].

10 Результаты определения

10.1 Метод качественного определения


Исходя из оценки результатов (см. 9.1.6), конечный результат определения выражают как "презумптивная Escherichia coli обнаружена" или "не обнаружена (отсутствует)" в данном объеме пробы, указывая массу пробы в граммах или объем пробы в смГОСТ Р 52830-2007 (ИСО 7251:2005) Микробиология пищевых продуктов и кормов. Метод обнаружения и определения количества презумптивных бактерий Escherichia coli. Метод наиболее вероятного числа.

10.2 Метод количественного определения


Расчет НВЧ проводят согласно приложению А.

Пример - При исследовании твердого образца и использовании трех пробирок на разведение для 95% случаев доверительный интервал составляет от 13 до 200 презумптивных Escherichia coli в грамме при НВЧ 7,4х10 презумптивных Escherichia coli в грамме и от 4 до 99 презумптивных Escherichia coli в грамме при НВЧ 2,4х10 презумптивных Escherichia coli в грамме.

11 Протокол испытания


В протоколе испытания указывают:

- всю информацию, необходимую для полной идентификации образца;

- метод отбора пробы, если известен;

- использованный метод испытания со ссылкой на настоящий стандарт;

- все детали исследования, не оговариваемые в настоящем стандарте, или рассматриваемые как необязательные, а также детали иного свойства, могущие оказать влияние на результаты исследований;

- полученные результаты.

Приложение А (обязательное). Расчет наиболее вероятного числа (НВЧ)

Приложение А
(обязательное)

А.1 Расчет НВЧ при использовании трех пробирок - по ГОСТ Р 51446.

А.2 Расчет НВЧ при использовании пяти пробирок представлен в таблице А.1


Таблица А.1

Число положительных пробирок трех выбранных разведений

НВЧ

Категория* оценки для одновременно проанализированных проб в количестве

Действительное число микроорганизмов в 1 г (смГОСТ Р 52830-2007 (ИСО 7251:2005) Микробиология пищевых продуктов и кормов. Метод обнаружения и определения количества презумптивных бактерий Escherichia coli. Метод наиболее вероятного числа) с вероятностью

95%

99%

1,0

0,1

0,01

1

2

3

5

10

от

до

от

до

0

0

0

<0,18

-

-

-

-

-

0,00

0,65

0,00

0,93

0

0

1

0,18

2

2

2

1

1

0,00

0,65

0,00

0,93

0

1

0

0,18

2

2

2

1

1

0,01

0,65

0,00

0,93

0

1

1

0,36

3

3

3

2

2

0,07

0,99

0,02

1,40

0

2

0

0,37

3

2

2

2

1

0,07

0,99

0,02

1,40

0

2

1

0,55

0

0

0

3

3

0,17

1,40

0,09

2,10

0

3

0

0,56

0

3

3

3

3

0,17

1,40

0,09

2,10

1

0

0

0,20

1

1

1

1

1

0,02

0,99

0,01

1,40

1

0

1

0,40

2

1

1

1

1

0,07

1,00

0,02

1,40

1

0

2

0,60

0

0

3

3

3

0,17

1,40

0,09

2,10

1

1

0

0,40

1

1

1

1

1

0,07

1,10

0,03

1,40

1

1

1

0,61

3

2

2

2

1

0,17

1,40

0,09

2,10

1

1

2

0,81

0

0

0

0

3

0,33

2,20

0,20

2,80

1

2

0

0,61

2

1

1

1

1

0,18

1,40

0,09

2,10

1

2

1

0,82

3

3

3

3

2

0,33

2,20

0,20

2,80

1

3

0

0,83

3

3

3

3

2

0,33

2,20

0,20

2,80

1

3

1

1,0

0

0

0

0

3

0,3

2,2

0,2

2,8

1

4

0

1,1

0

0

0

0

3

0,3

2,2

0,2

2,8

2

0

0

0,45

1

1

1

1

1

0,08

1,4

0,04

2,10

2

0

1

0,68

2

1

1

1

1

0,18

1,50

0,09

2,10

2

0

2

0,91

0

3

3

3

3

0,33

2,20

0,20

2,80

2

1

0

0,68

1

1

1

1

1

0,19

1,70

0,10

2,30

2

1

1

0,92

2

2

1

1

1

0,33

2,20

0,20

2,80

2

1

2

1,2

0

0

3

3

3

0,4

2,5

0,2

3,4

2

2

0

0,93

1

1

1

1

1

0,34

2,20

0,20

2,80

2

2

1

1,2

3

3

2

2

2

0,4

2,5

0,2

3,4

2

2

2

1,4

0

0

0

0

3

0,6

3,4

0,4

4,4

2

3

0

1,2

3

2

2

2

1

0,4

2,5

0,2

3,4

2

3

1

1,4

0

3

3

3

3

0,6

3,4

0,4

4,4

2

4

0

1,5

0

3

3

3

3

0,6

3,4

0,4

4,4

3

0

0

0,78

1

1

1

1

1

0,21

2,20

0,12

2,80

3

0

1

1,1

1

1

1

1

1

0,4

2,2

0,2

2,9

3

0

2

1,3

3

3

3

2

2

0,6

3,4

0,4

4,4

3

1

0

1,1

1

1

1

1

1

0,4

2,5

0,2

3,4

3

1

1

1,4

2

1

1

1

1

0,6

3,4

0,4

4,4

3

1

2

1,7

3

3

3

3

2

0,6

3,4

0,4

4,4

3

2

0

1,4

1

1

1

1

1

0,6

3,4

0,4

4,4

3

2

1

1,7

2

2

2

1

1

0,7

3,9

0,5

5,1

3

2

2

2,0

0

3

3

3

3

0,7

3,9

0,5

5,2

3

3

0

1,7

2

2

1

1

1

0,7

3,9

0,5

5,2

3

3

1

2,1

3

3

3

2

2

0,7

3,9

0,5

5,2

3

3

2

2,4

0

0

0

3

3

1,0

6,6

0,7

9,4

3

4

0

2,1

3

3

2

2

2

0,7

4,0

0,5

5,2

3

4

1

2,4

0

3

3

3

3

1,0

6,6

0,7

9,4

3

5

0

2,5

0

0

0

3

3

1,0

6,6

0,7

9,4

4

0

0

1,3

1

1

1

1

1

0,4

3,4

0,3

4,4

4

0

1

1,7

1

1

1

1

1

0,5

3,4

0,4

4,4

4

0

2

2,1

3

2

2

2

2

0,7

3,9

0,5

5,2

4

0

3

2,5

0

0

0

0

3

1,0

6,6

0,7

9,4

4

1

0

1,7

1

1

1

1

1

0,6

3,9

0,4

5,1

4

1

1

2,1

1

1

1

1

1

0,7

4,1

0,5

5,3

4

1

2

2,6

3

3

2

2

2

1,0

6,6

0,7

9,4

4

1

3

3,1

0

0

0

0

3

1,0

6,6

0,7

9,4

4

2

0

2,2

1

1

1

1

1

0,7

4,8

0,5

6,1

4

2

1

2,6

2

1

1

1

1

1,0

6,6

0,7

9,4

4

2

2

3,2

3

3

3

2

2

1,0

6,6

0,7

9,4

4

2

3

3,8

0

0

0

0

3

1,3

10,0

0,9

14,7

4

3

0

2,7

1

1

1

1

1

1,0

6,6

0,7

9,4

4

3

1

3,3

2

2

1

1

1

1,0

6,6

0,7

9,4

4

3

2

3,9

3

3

3

3

2

1,3

10,0

0,9

14,7

4

4

0

3,4

2

2

1

1

1

1,3

10,0

0,9

14,7

4

4

1

4,0

3

3

2

2

2

1,3

10,0

0,9

14,7

4

4

2

4,7

0

0

0

3

3

1,4

11,3

0,9

14,7

4

5

0

4,1

3

3

3

3

2

1,3

10,0

0,9

14,7

4

5

1

4,8

0

0

3

3

3

1,4

11,3

0,9

14,7

5

0

0

2,3

1

1

1

1

1

0,7

6,6

0,5

9,4

5

0

1

3,1

1

1

1

1

1

1,0

6,6

0,7

9,4

5

0

2

4,3

3

2

2

2

1

0,3

10,0

0,9

14,7

5

0

3

5,8

0

0

0

3

3

2,1

14,9

1,4

20,0

5

1

0

3,3

1

1

1

1

1

1,0

10,0

0,7

14,7

5

1

1

4,6

1

1

1

1

1

1,4

11,3

0,9

14,7

5

1

2

6,3

2

2

1

1

1

2,1

14,9

1,4

20,0

5

1

3

8,4

3

3

3

3

2

3,4

11,0

2,1

27,0

5

2

0

4,9

1

1

1

1

1

1,5

14,9

0,9

20,0

5

2

1

7,0

1

1

1

1

1

2,2

16,8

1,4

23,0

5

2

2

9,4

2

2

1

1

1

3,4

22,0

2,1

28,0

5

2

3

12

3

3

2

2

2

3

24

2

32

5

2

4

15

0

0

0

0

3

6

35

4

45

5

3

0

7,9

1

1

1

1

1

2,3

22,0

1,5

27,0

5

3

1

11

1

1

1

1

1

3

24

2

32

5

3

2

14

1

1

1

1

1

5

35

3

45

5

3

3

17

3

2

2

2

1

7

39

4

51

5

3

4

21

3

3

3

3

2

7

39

4

51

5

4

0

13

1

1

1

1

1

3

35

3

45

5

4

1

17

1

1

1

1

1

6

39

4

51

5

4

2

22

1

1

1

1

1

7

44

4

57

5

4

3

28

2

1

1

1

1

10

70

6

92

5

4

4

35

2

2

2

1

1

10

70

6

92

5

4

5

43

0

0

3

3

3

15

106

9

150

5

5

0

24

1

1

1

1

1

7

70

4

92

5

5

1

35

1

1

1

1

1

10

106

6

150

5

5

2

54

1

1

1

1

1

15

166

10

223

5

5

3

92

1

1

1

1

1

23

253

15

338

5

5

4

160

1

1

1

1

1

40

460

20

620

5

5

5

>160

1

1

1

1

1

-

-

-

-

________________
* Для объяснения категорий см. ГОСТ Р 51446.

Примечание - Приведенные результаты основаны на данных источника [8].

Библиография

[1]

ИСО 8261:2001

Молоко и молочные продукты. Общие руководящие указания по приготовлению проб для испытаний, исходных суспензий и растворов, разведенных 1/10, для микробиологических исследований

[2]

ICMSF Microorganisms in Food, 1988, Vol.1, p.280, University of Toronto Press, Toronto, Canada

[3]

ИСО/TS 11133-1:2000

Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Руководящие указания по приготовлению и производству культуральных сред. Часть 1. Общие руководящие указания по обеспечению качества приготовления культуральных сред в лаборатории

[4]

ИСО/TS 11133-2:2003

Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Руководящие указания по приготовлению и производству культуральных сред. Часть 2. Практические руководящие указания по эксплуатационным испытаниям культуральных сред

[5]

ИСО 6887-3:2003

Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Подготовка образцов для испытания, исходной суспензии и десятичных разведений для микробиологических исследований. Часть 3. Специальные правила для подготовки рыбы и рыбопродуктов

[6]

ИСО 6887-4:2003

Микробиология пищевых продуктов и кормов для животных. Подготовка образцов для испытания, исходной суспензии и десятичных разведений для микробиологических исследований. Часть 4. Специальные правила для подготовки продуктов, кроме молока и молочных продуктов, мяса и мясных продуктов и рыбы и рыбопродуктов

[7]

ИСО 8261:2001

Молоко и молочные продукты. Общие руководящие указания по приготовлению проб для испытаний, исходных суспензий и растворов, разведенных 1/10, для микробиологических исследований

[8]

De Man, J.C. MPN tables, corrected. Eur. J. Appl. Biotechnol., 1983, 17, pp.301-305




Электронный текст документа
подготовлен АО "Кодекс" и сверен по:
официальное издание
М.: Стандартинформ, 2008

ГОСТ Р 52830-2007 (ИСО 7251:2005) Микробиология пищевых продуктов и кормов. Метод обнаружения и определения количества презумптивных бактерий Escherichia coli. Метод наиболее вероятного числа

Название документа: ГОСТ Р 52830-2007 (ИСО 7251:2005) Микробиология пищевых продуктов и кормов. Метод обнаружения и определения количества презумптивных бактерий Escherichia coli. Метод наиболее вероятного числа

Номер документа: 52830-2007

Вид документа: ГОСТ Р

Принявший орган: Росстандарт

Опубликован: официальное издание

М.: Стандартинформ, 2008 год

Дата принятия: 27 декабря 2007

Дата начала действия: 01 января 2009
Дата окончания действия: 15 февраля 2015
ГОСТ Р 52830-2007 (ИСО 7251:2005) Микробиология пищевых продуктов и кормов. Метод обнаружения и определения количества презумптивных бактерий Escherichia coli. Метод наиболее вероятного числа
Данный документ представлен в виде сканер копии, которую вы можете скачать в формате или
Информация о данном документе содержится в профессиональных справочных системах «Кодекс» и «Техэксперт»
Узнать больше о системах