Об установлении региональных стандартов технологий исследования функции органов и тканей с использованием специальных процедур

     
Сравнительная оценка методик определения антител

Обозначения:

- да - антитела выявляются,

- нет - антитела не выявляются.

2.4.6. Порядок проведения исследования сыворотки реципиента на антиэритроцитарные антитела.

2.4.6.1. Исследование неполных антител к антигенам эритроцитов с применением 10% раствора желатина

Порядок проведения исследования:

1. В штатив установить 3 тонкостенные пробирки высотой не менее 10 см. Пробирки промаркировать, для чего указать Ф.И.О. реципиента, кровь которого исследуют.

2. В первые две пронумерованные пробирки внести по 1 капле (50 мкл) стандартных эритроцитов для скринингового исследования, в последнюю - одну каплю эритроцитов пациента.

3. Во все пробирки добавить по 2 капли (100 мкл) 10% желатина, прогретого на водяной бане при температуре t+46-48°С до разжижения.

4. Из пробирки с исследуемой кровью реципиента осторожно взять пипеткой сыворотку и внести по 2 капли (100 мкл) в первую и третью пробирки, во вторую 2 капли (100 мкл) сыворотки с низким титром антител для контроля.

5. Штатив с пробирками встряхнуть для перемешивания и поместить на водяную баню (t+46-48°С) на 15 минут или в термостат (t+46-48°С) на 45 минут.

6. После окончания инкубации пробирки извлечь, добавить 5-8 мл 0,9% раствора натрия хлорида, содержимое пробирок перемешать путем одно-двухкратного перевертывания и оценить результат исследования.

Трактовка результатов:

Результат учитывать, просматривая пробирки на свет невооруженным глазом или через лупу в виде наличия или отсутствия агглютинации (см. рисунок 1).

Если в первой и второй пробирках наблюдается агглютинация в виде взвеси мелких или крупных красных комочков на фоне просветленной или полностью обесцвеченной жидкости, а в третьей пробирке агглютинации нет (аутоконтроль отрицательный) значит, в исследуемой сыворотке обнаружены неполные антиэритроцитарные антитела.

Если в первой и третьей пробирках агглютинации нет, во второй - агглютинация, значит неполные антиэритроцитарные антитела не обнаружены. (см. рисунок 1). При отрицательном результате исследования необходимо сделать микропрепарат и микроскопировать его. Содержимое пробирок поместить на предметное стекло, покрыть покровным стеклом и просмотреть под малым увеличением.

При наличии агглютинации в третьей пробирке (аутоконтроль положительный) образец крови пациента направить в специализированное учреждение службы крови (СПК или ОПК) с соответствующим направлением (см. приложение 2) для дальнейшего исследования.

Рисунок 1. Результаты исследования сыворотки на антитела к антигенам эритроцитов

2.4.6.2. Исследование антител к антигенам эритроцитов с использованием гелевых диагностических карт (непрямая проба Кумбса)

Исследование на изоиммунные антиэритроцитарные антитела проводить с применением диагностических карт Coombs, содержащих сыворотку Кумбса.

Порядок проведения исследования:

1. Перед исследованием проверить диагностические карты. Не использовать карты, если в геле имеются взвешенные пузырьки, микропробирка не содержит надосадочной жидкости, наблюдается уменьшение объема геля или его растрескивание.

2. Микропробирки подписываются (фамилия реципиента).