Инструкция
Основные методы лабораторной диагностики гельминтов
Макроскопические методы исследования фекалий
Направлены на поиск гельминтов или их фрагментов (сколексов, члеников и частей стробилы цестод). Применяются для диагностики тех гельминтозов, возбудители которых или не выделяют яйца с экскрементами больного или выделяют их в небольших количествах и не всегда (при энтеробиозе в фекалиях обнаруживаются острицы, при тениидозах - членики цестод); для определения эффективности лечения; при диагностической дегельминтизации (при подозрении на гельминтоз, не обнаруживаемый другими способами).
С целью обнаружения в фекалиях остриц или проглоттид цестод необходимо проводить предварительный просмотр невооруженным глазом фекалий, доставляемых в лабораторию для микроскопических исследований.
Для более точной дифференциальной диагностики тениидозов, определения эффективности лечения и при диагностической дегельминтизации рекомендуется самый простой метод - просмотр разжиженных водой фекалий в черных фотографических кюветах или в чашках Петри на темном фоне.
Обнаружение гельминтов в фекалиях
Принцип: гельминты или их фрагменты хорошо заметны на темном фоне, их обнаруживают при просматривании разжиженных водой фекалий.
Реактивы: глицерин (50%-ный раствор).
Спецоборудование: лупа, черные фотографические кюветы или чашки Петри, пинцеты, препаровальные иглы.
Ход обнаружения: фекалии размешивают с водой для получения равномерной суспензии, после чего при хорошем освещении тщательно просматривают отдельными порциями в черных фотографических кюветах или на темном фоне в чашках Петри. Пинцетом или препаровальной иглой извлекают все подозрительные белые частицы. Крупные образования, подозрительные на фрагменты гельминтов, рассматривают под лупой между двумя предметными стеклами.
Если по клиническим показаниям предполагают обнаружение мелких гельминтов (карликовых цепней и др.) или головок цестод после лечения, то подозрительные частицы рассматривают в капле глицерина под лупой, а в случае необходимости - и под микроскопом.
Микроскопические методы исследования (качественные)
Направлены на выявление яиц и личинок гельминтов. Применяются с диагностической целью, для контроля эффективности лечения, а также для оценки качества проведения комплекса противогельминтозных мероприятий. Для широкого использования в практике лабораторий рекомендуется метод толстого мазка с целлофановой покровной пластинкой по Като.
Метод удобен и при проведении массовых обследований. Мазки могут быть приготовлены и доставлены в лабораторию, не занимая большого объема.
При проведении обследования методом Като в очагах гименолепидоза и анкилостомидозов микроскопию мазков следует осуществлять сразу после их просветления.
Обнаружение яиц гельминтов в фекалиях методом
толстого мазка с целлофановой покровной пластинкой по Като
Принцип: яйца гельминтов обнаруживают в толстом мазке фекалий, просветленных глицерином и подкрашенных малахитовой зеленью.
Реактивы: 3%-ный водный раствор малахитовой зелени, глицерин, 6%-ный раствор фенола, целлофановые покровные пластинки по Като. Смесь Като: 6 мл 3%-ного водного раствора малахитовой зелени + 500 мл глицерина + 500 мл 6%-ного раствора фенола. Пластинки по Като: гидрофильный целлофан разрезают на пластинки размером 20 х 40 мм и погружают в смесь Като так, чтобы они прилегали друг к другу (3-5 мл раствора Като на 100 пластинок). Через 24 часа они готовы к употреблению. Готовые пластинки можно хранить в растворе Като в хорошо закрытой посуде при комнатной температуре в течение 6 месяцев.
Ход обнаружения: 100 мг фекалий без добавления воды или какой-либо другой жидкости наносят на предметное стекло, накрывают вместо покровного стекла целлофановой покровной пластинкой, обработанной смесью Като, и придавливают резиновой пробкой так, чтобы фекалии размазались по предметному стеклу в пределах целлофановой пластинки, но не выдавливались из-под нее. Мазок оставляют при комнатной температуре для осветления, после чего просматривают его под микроскопом. Время осветления мазка зависит от температуры воздуха, но даже в прохладном помещении оно не превышает 1 часа; в жаркое время года во избежание пересушивания мазок микроскопируют через 30-40 минут. В некоторых случаях, чтобы избежать чрезмерного высыхания препарата, на целлофановую покровную пластинку приготовленного препарата следует класть влажную губку.
Можно использовать пленку, пропитанную только 50%-ным раствором глицерина, эффективность выявления гельминтов при этом не уменьшается.
Методом Като рекомендовано заменить нативный мазок. Для полного выявления всех видов гельминтов метод толстого мазка с целлофановой покровной пластинкой по Като обязательно сочетать с методом обогащения.
Обнаружение яиц гельминтов в фекалиях
методом обогащения
Принцип: фекалии суспендируют во флотационном растворе, имеющем больший удельный вес, чем яйца гельминтов (более 1,2). Яйца гельминтов всплывают на поверхность, образовавшуюся пленку исследуют под микроскопом.
Реактивы: флотационный раствор по Калантарян - 1 кг азотно-кислого натрия растворяют в 1 л воды, смесь кипятят до образования пленки и переливают без фильтрования в сухие бутылки. Удельный вес раствора - 1,38.
Спец.оборудование: граненые стаканы или склянки с широким горлом, объемом 100 мл, стеклянные палочки.
Ход обнаружения: в стаканах или склянках тщательно размешивают стеклянной палочкой 5 г фекалий, постепенно доливая флотационный раствор до 100 мл. Сразу же по окончании размешивания стеклянной палочкой или бумажным совочком удаляют всплывшие на поверхность крупные частицы. К поверхности солевого раствора прикладывают предметное стекло. Если между смесью и предметным стеклом остается пустое пространство, добавляют солевой раствор до полного соприкосновения смеси с предметным стеклом. Оставляют для отстаивания 20-30 минут, после чего предметное стекло осторожно снимают, кладут под микроскоп пленкой кверху и просматривают без покровного стекла всю пленку, прилипшую к поверхности предметного стекла. Во избежание высыхания препарата во время микроскопирования пленку можно смешать с 2-3 каплями 50%-ного раствора глицерина.
При отсутствии данной соли можно использовать насыщенный раствор поваренной соли (по Фюллеборну). Для приготовления раствора 400 г соли растворяют в 1 л воды, нагревают до кипения, фильтруют через слой ваты или марли и охлаждают. Правильно приготовленный раствор должен иметь небольшой осадок из нерастворяющихся кристалликов соли (уд. вес раствора - 1,2).
В связи с тем, что яйца, имеющие большой удельный вес (неоплодотворенные яйца аскарид, яйца трематод и крупных цестод), не всплывают, помимо исследования поверхностного слоя жидкости при использовании метода Фюллеборна необходимо дополнительно просмотреть 2-4 препарата из осадка смеси. Для этой цели (после снятия поверхности пленки) суспензию осторожно сливают, а из осадка пипеткой или проволочной петлей берут 4-8 капель, наносят на предметное стекло, накрывают покровным стеклом и исследуют под микроскопом. Для просветления препарата можно добавить каплю глицерина.
Специальные лабораторные методы исследования
на различные гельминтозы
Методы исследования на энтеробиоз
Обнаружение яиц остриц в перианальном соскобе
с применением деревянного шпателя
Принцип: яйца гельминтов, находящиеся в перианальных складках, соскабливают деревянным шпателем (спичкой) и исследуют под микроскопом.