Инструкция
по противоэпидемическому режиму
лаборатории диагностики СПИД*

________________

* Утверждена заместителем Министра здравоохранения СССР 05.06.90 N 42-28/38-90.

Общее положение

Лаборатория по диагностике СПИД проводит серологические исследования сывороток лиц, относящихся к группам риска заражения вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ), доноров, лиц, подозреваемых в клиническом проявлении СПИД, лиц, находящихся в контакте с инфицированным ВИЧ, или на диспансерном наблюдении, и других групп населения, которые могут быть включены в обследование по эпидемиологическим показаниям.

Работа в лабораториях диагностики СПИД осуществляется в соответствии с правилами противоэпидемического режима работы с возбудителями третьей группы патогенности.

Ответственность за организацию и проведение комплекса противоэпидемических и дезинфекционных мероприятий в диагностических лабораториях возлагается на главных врачей учреждений и заведующих лабораториями.

1. Устройство и содержание помещений
диагностических лабораторий

1.1. Для лаборатории диагностики СПИД необходим набор помещений, обеспечивающий ее профиль работы и соблюдение правил противоэпидемического режима. Помещения лаборатории могут располагаться либо в отдельном здании, либо в изолированной части здания, в составе отделов или лабораторий другого профиля. Размеры комнат диагностической лаборатории не регламентируются, но должны обеспечивать требования режима работы.

В случае организации диагностической лаборатории СПИД в отдельном здании (или отсеке) необходимо предусмотреть:

1) комнату для приема, регистрации поступающего на исследование материала и выдачи результатов;

2) комнату для разборки и подготовки сывороток к серологическим исследованиям;

3) комнату для серологической работы;

4) комнату для проведения реакции иммуноблота и других подтверждающих тестов (если постановка этих тестов входит в функции лаборатории);

5) в наборе помещений лаборатории необходимо предусмотреть автоклавную для стерилизации чистой и обеззараживания инфицированной посуды, препараторскую и моечную;

6) помещение для сотрудников лаборатории.

1.2. Размещение лабораторных комнат должно быть организовано так, чтобы максимально обеспечивать поточность поступающего на исследование материала с последующей его инактивацией.

Помещение, в котором происходят прием и регистрация поступающего на анализ материала, целесообразно разместить при входе в лабораторию смежно с помещениями, в которых проводятся разборка и подготовка сывороток к постановке серологических реакций с учетом соблюдения поточности работы с исследуемым материалом. Автоклавную, моечную, препараторскую комнаты целесообразно сгруппировать в одном узле (месте).

1.3. Лаборатория должна быть обеспечена водопроводом, канализацией, электричеством, центральным отоплением.

1.4. В случае отсутствия в населенном пункте водопровода и канализации работа возможна только при условии постоянного снабжения водой и своевременного обеззараживания инфицированного материала.

В лаборатории должны быть оборудованы раковины для мытья рук и раковины, предназначенные для мытья посуды из легко моющихся и не портящихся от дезинфектантов материалов.

1.5. Все помещения лаборатории должны иметь естественное и искусственное освещение, отвечающее требованиям, предусмотренным строительными нормами и правилами.

1.6. Для соблюдения требуемых условий постановки серологических реакций и получения адекватных результатов температура воздуха в лабораторных помещениях не должна превышать 25 град.C. Для районов с жарким климатом в летний период устанавливают кондиционеры с охлаждением. Желательно в лабораторных комнатах иметь приточно вытяжную вентиляцию.

1.7. Полы в лабораторных помещениях должны быть покрыты линолеумом либо керамической плиткой.

1.8. Рабочие поверхности столов, на которых проводятся прием, разборка сывороток, постановка серологических реакций, следует покрывать водонепроницаемым, несгораемым и не портящимся при дезинфекции материалом.

1.9. Лабораторная мебель должна быть легко моющейся.

1.10. В случае формирования лаборатории диагностики СПИД в составе других лабораторий (отделов) не допускается пользование общей термальной комнатой (термостатами) и общими холодильниками. Лаборатория СПИД должна пользоваться только своими термостатами и холодильниками, установленными в разборочной и серологической комнатах.

2. Правила и противоэпидемический режим при проведении серологической диагностики СПИД

2.1. Работа в диагностических лабораториях проводится с соблюдением мер индивидуальной защиты: в сменном боксовом халате, шапочке, сменной обуви и обязательно в резиновых перчатках.

2.2. Доставка образцов крови (сывороток) в лабораторию осуществляется в емкостях (контейнеры, стерилизационные коробки и др.) с закрывающимися крышками, из материала, который не портится при дезинфекции.

Не допускается перевозка материала в сумках, портфелях и других предметах личного пользования.

Оптимальной считается доставка контейнеров с исследуемым материалом в сумках - холодильниках.

Образцы крови (сыворотки) должны доставляться в пробирках или флаконах, герметично закрытых резиновыми или ватно-марлевыми, обернутыми полиэтиленовой пленкой, пробками.

Взятая для исследования цельная кровь должна быть доставлена в диагностическую лабораторию в течение 24 часов с момента взятия крови. В случае невозможности доставки образцов крови в установленное время материал пересылается только в виде сыворотки (без сгустков) в течение 7 дней от дня взятия крови при условии ее хранения до отправки в диагностическую лабораторию СПИД при температуре 4-8 град.С.

Поступающий в лабораторию материал должен сопровождаться направлением (приложение 1).

2.3. Перед работой все повреждения кожи на руках должны быть закрыты лейкопластырем или напальчниками. Распаковка материала, присланного в лабораторию для исследования, проводится с соблюдением мер предосторожности, в резиновых перчатках. Присланные образцы крови (сыворотки) в пробирках, флаконах перекладывают в штативы или другие емкости диагностической лаборатории, помещенные на эмалированные или металлические подносы, и переносят в комнату разборки и подготовки материала для серологических исследований. Контейнеры, в которых доставлен исследуемый материал, после разгрузки обрабатывают дезраствором.

2.4. Поступившие образцы крови (сыворотки) регистрируют в отдельном журнале регистрации поступающего на исследование материала (приложение 2).

2.5. Сыворотку отсасывают со сгустков крови в день поступления или не позднее 24 часов после поступления в лабораторию.

2.6. До проведения исследования сыворотки хранят при 4-8 град.C и могут быть использованы для серологических исследований в течение 10 дней от дня взятия крови.

2.7. Комнаты, предназначенные для разборки и подготовки материала к серологическим исследованиям, должны иметь:

- лабораторный стол, покрытый не портящимся при дезинфекции материалом;

- шкаф для посуды;

- холодильник на +4 град.C;

- центрифугу на 1,5 - 2 тыс. об/мин (в предбокснике);

- бактерицидные лампы.

В помещениях, предназначенных для приема, разборки материала и постановки серологических реакций, запрещается проводить другие виды работы.

2.8. Для обеззараживания перчаток, инфицированной посуды необходимо предусмотреть эксикаторы или другие емкости с закрывающимися крышками с соответствующими дезинфицирующими растворами, баки для сбрасывания посуды и другого инфицированного материала, предназначенного для автоклавирования.

Все емкости с дезрастворами должны быть промаркированы: название дезраствора, его концентрация, назначение и дата приготовления.

2.9. После регистрации и разборки сывороток их переносят в комнату для серологических исследований.

Комнаты, предназначенные для серологических исследований, должны иметь:

- лабораторный стол для размещения посуды, необходимой в работе (мерные цилиндры, колбы, бутыль с дистиллированной водой и т.д.);

- лабораторный стол для размещения аппаратуры (спектрофотометр, промыватель и т.д.);

- стол для серологической работы;

- холодильник на +4 град.C;

- термостат.

Плашку с диагностикумом помещают на эмалированный или металлический поднос (лоток) и проводят всю работу во втором (боксовом) халате, в резиновых перчатках.

2.10. Для защиты от возможного попадания вируссодержащего материала во время работы рекомендуется использовать защитные очки, экраны* или другие защитные средства, подвергающиеся дезинфекции. В боксе, где проводятся серологические исследования, не рекомендуется в качестве дезинфицирующих средств использовать хлорсодержащие препараты и аммиак в открытых емкостях.

________________

* Настольный экран типа 2-ЭН и 2-ЭН с кюветом.

2.11. После окончания работы исследуемый материал (пробирки с сывороткой) переносят в холодильник, а использованную инфицированную посуду помещают в бак для грязной посуды. Туда же кладут для контроля режима работы парового стерилизатора стеклянные герметично запаянные трубки (ампулы) с никотинамидом или Д (+)-маннозой и 0,1% фуксина основного или фуксина кислого, генцианвиолета, фенолового красного (температура плавления 132 град.C). Баки плотно закрывают крышкой, завязывают шпагатом, пломбируют и сдают в автоклавную под расписку автоклаверу (приложение 3).

2.12. Хранение бака до автоклавирования не допускается более рабочей смены. Обеззараживание в паровом стерилизаторе (автоклаве) проводится при температуре 132+/-2 град.C под избыточным давлением 2,0 кгс/кв.см (0,20 МПа) в течение 60 мин. После обеззараживания лаборант проверяет ампулу с химическим контролем. Расплавление химического теста и его окрашивание красителем свидетельствует о достижении необходимой температуры. Только после этого бак с посудой передается в моечную.

2.13. Пробирки с кровью помещают в специальную маркированную емкость (кастрюлю, ведро, бак), закрывающуюся крышкой, с дезинфицирующим раствором (3% раствор хлорамина, осветленный раствор хлорной извести; 0,6% осветленные растворы нейтрального гипохлорита кальция (НГК), гипохлорита кальция технического (ГКТ); 0,5% растворы ДП-2, сульфохлорантина не менее чем на 2 часа. Приготовление растворов осуществляется в соответствии с приложениями 8, 9. Другой способ обеззараживания - в паровом стерилизаторе при режиме - 2 кгс/кв.см (0,2 МПа) при температуре 132+/-2 град.C в течение 60 минут.

Кипячение является наиболее простым и доступным методом дезинфекции. Дезинфицирующий эффект достигается после кипячения в течение 30 минут (от момента закипания).

2.14. Поверхность рабочих столов и все предметы, соприкасавшиеся с исследуемым материалом (пипетки, пробирки, ампулы), должны быть обеззаражены. С этой целью можно использовать следующие дезинфицирующие средства: 6% раствор перекиси водорода без моющего или с моющим средством, 4% раствор формальдегида, 0,6% раствор НГК, 0,4% раствор ГКТ, 0,5% раствор ДП-2, сульфохлорантина в течение 60 мин. методом погружения или двукратного протирания (для поверхностей).

При наличии видимых пятен крови их следует сначала залить дезинфицирующим раствором на рекомендуемое время обеззараживания, затем удалить смесь крови и дезинфицирующего средства, сбросить тампон или салфетку в дезинфицирующий раствор. После этого поверхность следует протереть дезинфицирующим раствором. Если применяется 70% этиловый спирт (при отсутствии других средств), поверхность следует протереть несколько (3-5) раз, поскольку спирт быстро испаряется.

2.15. Растворы перекиси водорода готовят ежедневно. Растворы хлорамина можно готовить 1 раз на две недели, хлорной извести, ГКТ, НГК - на 6 дней, однако готовые растворы используют только в течение рабочего дня.

2.16. Насасывание сывороток и другого исследуемого материала

производят только с помощью груши или автоматической пипетки с последующим обеззараживанием наконечников в емкости (эксикатор и др.) с дезинфицирующим раствором. Дезинфекцию наконечников к автоматическим пипеткам можно проводить 70 град.* спиртом или 6% перекисью водорода в течение 60 минут, или автоклавированием при 1,1 кгс/кв.см (0,1 МПа) при температуре 120+2 град.C в течение 45 минут.

________________

* Нормы расхода 96 град. этилового спирта на одно исследование на СПИД в ИФА -10 г, других дезинфицирующих средств - см. приложение 10.

Одноразовый инструментарий (пластины, наконечники к автоматическим пипеткам и др.) обеззараживаются в паровом стерилизаторе при 2,0 кгс/кв.см (0,2 МПа), температуре 132+/-2 град.C в течение 60 минут и выбрасывают в специально отведенные места.

2.17. После дезинфекции и влажной уборки помещения проводят обеззараживание воздуха с помощью бактерицидных ламп типа ДБ-30 в течение 60 мин. При определении количества ламп исходят из расчета: 2,5 Вт на 1 куб.м для неэкранированных ламп и 1,0 Вт на 1 куб.м для экранированных. Неэкранированные лампы включают только в отсутствие людей.

При выходе из рабочей комнаты сотрудник лаборатории обязан убрать исследуемый материал со стола, обработать стол дезинфицирующим раствором, а руки после обеззараживания тщательно вымыть с мылом. Перчатки обеззараживают в 6% растворе перекиси водорода или 70 град. спирте.

2.18. Стирка халатов и другой спецодежды на дому категорически запрещается. Смена спецодежды должна осуществляться 1 раз в неделю. Перед стиркой спецодежду замачивают на 3 часа в 1,0% растворе хлорамина или 3% растворе перекиси водорода с 0,5% моющего средства (температура раствора 50 град.C) или автоклавируют при 1,1 кгс/кв.см (0,1 МПа) при температуре 120+2 град.C в течение 45 минут. Пятна крови предварительно смачивают растворами более высокой концентрации (как для поверхностей).

2.19. Для обеззараживания поверхности пола (текущая дезинфекция) в конце рабочего дня используют 1% раствор хлорамина, 1% осветленный раствор хлорной извести с последующим проветриванием помещения. Пролитая на пол кровь, сыворотка и др. заливаются раствором одного из дезинфицирующих средств, указанных для обеззараживания поверхности рабочего стола.

2.20. При работе с дезинфицирующими средствами необходимо соблюдать меры предосторожности, изложенные в "Правилах по охране труда работников дезинфекционного дела и по содержанию дезинфекционных станций, дезинфекционных отделов, отделений профилактической дезинфекции санитарно - эпидемиологических станций, отдельных дезинфекционных установок", утвержденных Минздравом СССР 09.02.79 N 1963-79.

2.21. Приготовление растворов дезинфицирующих средств проводят в хорошо проветриваемых помещениях с использованием мер индивидуальной защиты - резиновых перчаток, герметичных очков (тип ПО-2, ПО-3 или моноблок), респираторов с противогазовым патроном марки А или В (тип РУ-60М, РПГ-67 и др.), халата, шапочки, резинового фартука.

Запасы препаратов хранят в защищенном от попадания прямых солнечных лучей месте.

3. Центрифугирование исследуемого материала

Центрифугирование исследуемого материала (при освобождении сывороток от сгустков крови и элементов) проводят в комнатах, предназначенных для подготовки сывороток к серологическим реакциям. Исследуемый материал помещают в центрифужные стаканы или во флаконы с крышкой. Центрифугу обязательно закрывают крышкой. После окончания центрифугирования (после полной остановки ротора) сотрудник открывает крышку центрифуги, вынимает пробирки и убеждается в их целостности.

В случае подозрения на разрыв сосуда (пробирки) с исследуемым материалом крышку снимают не ранее чем через 40 минут после остановки ротора. Гнездо с разбитым сосудом (пробиркой) заливают раствором одного из дезинфицирующих средств на 60 минут. Затем удаляют содержимое гнезда, сбрасывают в дезинфицирующий раствор, протирают марлевой салфеткой, смоченной в дезрастворе. После окончания центрифугирования во всех случаях ротор, стенки центрифуги, крышку протирают одним из дезинфицирующих растворов.

4. Передача информации при выявлении сывороток с антителами к ВИЧ