9.1. Исследование на водорослях
Рекомендуется проведение семисуточных исследований действия вещества на рост культуры водорослей (п.1.4 приложения 3 настоящих Методических указаний, а также требования проведения хронического эксперимента (утверждено Минприродой России от 27 апреля 2001 года "Руководство по определению методом биотестирования токсичности вод, донных отложений, загрязняющих веществ и буровых растворов". М.: РЭФИА, НИА-Природа, 2002). В качестве альтернативы возможно полное проведение хронического эксперимента с одноклеточными водорослями в течение 14-21 суток.
В конце опытов оценивается статистическая достоверность отклонений опытных данных от контрольных.
Условия культивирования водорослей и постановки токсикологических исследований с ними приведены в п.1 приложения 3 настоящих Методических указаний.
9.2. Исследование на зоопланктонных организмах
Исследования проводятся на односуточных артемиях в течение 7 суток (не полный хронический эксперимент). После семисуточного опыта, как правило, не наблюдается резкого увеличения гибели артемий в эксперименте длительностью 21 суток. В качестве альтернативы возможно полное проведение хронического эксперимента в течение 21 суток.
Постановка токсикологических исследований изложена в п.5 приложения 3 настоящих Методических указаний.
9.3. Исследование на рыбах
Условия получения, содержания икринок и проведения исследований на них при инкубации до 30-45 суток в настоящее время не дают возможности проводить краткосрочные эксперименты с икрой морских рыб.
В то же время, достаточно большое количество токсикологических исследований показывает чувствительность морской культуры гуппи (односуточные организмы) на уровне или на порядок выше ответной реакции эмбрионального развития морских рыб на загрязняющее вещество. Это позволяет рекомендовать острые опыты (96 ч) с использованием в качестве тест-объекта односуточных гуппи. Условия проведения экспериментов в п.7 приложения 3 настоящих Методических указаний.
Анализ результатов исследований показал, что в качестве максимально допустимой концентрации для рыб принимается максимальная концентрация, не вызывающая статистически достоверного повышения смертности мальков гуппи.
9.4. Исследования изменений показателей водной среды
Санитарно-экологические последствия присутствия в воде исследуемого вещества оцениваются по его влиянию на БПК воды.
Исследования проводятся при 20°С в стеклянных сосудах объемом 5 дм, заполняемых природной морской водой, профильтрованной через мельничный газ N 76 и насыщенной кислородом.
В сосуды вносится исследуемое вещество в 5-7 концентрациях, различающихся на порядок. Один из сосудов остается чистым и используется в качестве контроля. В исходные сутки, а также через 5 суток в пикнометры отбираются пробы воды (по 2 пикнометра на каждую пробу), которые выдерживаются в термостате при 20°С в течение 5 суток.
Через 5 суток после экспозиции в каждом из пикнометров в воде определяют содержание кислорода по Винклеру или с применением специально приспособленных оксиметров.
Расчет величины БПК производится следующим образом:
,
где: - исходная концентрация кислорода в воде,
- концентрация кислорода в пробах на соответствующий срок наблюдения.
Результаты используются для составления таблицы или графиков зависимости БПК от времени и концентрации исследуемого вещества.
Анализ результатов исследования проводится по оценке действия вещества на величину БПК в опыте и в контроле:
,
где: БПК(оп) и БПК(контр), соответственно, в опыте и в контроле на один и тот же срок.
Безвредной для процесса самоочищения следует считать такую концентрацию, при которой показатель БПК отклоняется от соответствующих значений в контроле не более чем на 20% (т.е. N < 20%).
Для вычисления концентрации, вызывающей 20% отклонение, путем интерполяции может быть использовано следующее уравнение: