Об утверждении Методических указаний по разработке нормативов качества воды водных объектов рыбохозяйственного значения, в том числе нормативов предельно допустимых концентраций вредных веществ в водах водных объектов рыбохозяйственного значения (с изменениями на 22 декабря 2016 года)

1. Установление максимальной допустимой концентрации вещества для одноклеточных водорослей

    1.1. Введение

Оценка влияния веществ на одноклеточные водоросли осуществляется по нижеследующим показателям:

а) изменение численности клеток водорослей при воздействии веществ, содержащихся в тестируемой воде, по сравнению с контролем;

б) характер изменения численности клеток: их увеличение или снижение, отражающее интенсивность деления клеток водорослей по отношению к контролю.

Критерием токсичности раствора вещества является достоверное снижение численности клеток водорослей ("выживаемость") в растворе по сравнению с контролем.

Критерием эвтрофирующего эффекта вещества является достоверное увеличение численности клеток водорослей в различных концентрациях вещества. Лимитирующий показатель вредности вещества в данном случае - экологический. Наряду с изучением динамики численности водорослей к регистрируемым показателям в опыте следует относить изменение рН; визуальные наблюдения за состоянием культуры водорослей: изменения в окраске, форме клеток и состоянии суспензии (взвешенное, опускание на дно, всплывание к поверхности, гомогенность или агрегация) по сравнению с контролем.

В качестве экспресс-метода оценки токсичности вещества можно использовать приборный метод быстрой или замедленной флуоресценции водорослей (Минрыбхоз СССР введены в действие методические разработки ВНИРО от 18 декабря 1987 года N 291-ц "Методические рекомендации по экспрессному биотестированию природных и сточных вод с использованием замедленной флуоресценции одноклеточных водорослей". М: ВНИРО, 1987). Показания изменения флуоресценции водорослей в растворах вещества по отношению к контролю следует относить к основным показателям, характеризующим процессы жизнедеятельности одноклеточных водорослей. Показания быстрой и замедленной флуоресценции относятся только к живым клеткам, отражают интенсивность процесса фотосинтеза водорослей, по калибровочной кривой позволяют определить количество живых клеток в эксперименте.

Кратковременная оценка токсичности раствора вещества - до 24-96 ч - позволяет определить наличие острого токсического действия вещества на одноклеточные водоросли, а длительное исследование - до 14-21 суток - его хроническое токсическое действие.

К дополнительным показателям при исследовании следует относить: оценку биомассы водорослей (полученную расчетным методом), оценку скорости и темпа деления клеток (расчет генераций), содержание фотосинтезирующих пигментов (хлорофилла и каротиноидов), соотношение живых и мертвых клеток водорослей (используя люминисцентный микроскоп или различные витальные красители -цитохимический метод).

1.2. Характеристика тест-объектов

В качестве основного стандартного тест-объекта рекомендуется использовать лабораторную монокультуру одноклеточных золотистых водорослей феодактилум трикорнутум (Phaeodactylum tricornutum). Вид представлен клетками овально-треугольной формы с шипиками на концах. Клетки неподвижны, длина 13-16 мкм. Размножение вегетативное, путем простого деления клеток надвое. Численность клеток увеличивается за трое суток не менее чем в 3 раза. После пересева культуры на новую среду, экспоненциальная фаза роста наступает на 4 сутки. Данный вид водорослей используется в международном стандарте оценки качества воды (ИСО 10253:2006 Качество воды. Тест по угнетению роста морских водорослей Skeletonema costatum и Phaeodactylum tricornutum).

В исключительных случаях или в качестве дополнительной культуры возможно использовать другой вид водорослей из перидиниевых - экзувиелла кордата (Exuviella cordata) или пророцентрум миканс (Prorocentrum micans), с указанием срока выхода культуры в экспоненциальную фазу роста в культуре, темпа деления клеток и диапазона чувствительности водорослей к стандартному (эталонному) веществу бихромату калия (п.1.4 приложения 2 к настоящим Методическим указаниям).

1.3. Условия лабораторного содержания одноклеточных водорослей

Используется обычное лабораторное оборудование, приборы, посуда и реактивы, в том числе:

климатостат (люминостат) любого типа, оснащенный лампами дневного света 3000-6000 лк, обеспечивающий поддержание температуры (20 ± 2)°С;

прибор для определения солености воды;

рН-метр;

оксиметр любого типа с погрешностью измерения не более 0э5 мг/дм;

спиртовка;

микроскоп биологический, обеспечивающий увеличение в 100-200 раз;

камера счетная Нажотта (или камера Горяева);

предметные и покровные стекла;

фильтровальная установка любого типа;

фильтры мембранные (размер пор 3,5 мкм; 0,45 мкм);

пипетки автоматические - дозаторы на 0,1-0,2 см;

готовая искусственная морская соль;

двухромовокислый калий КCrO марки "хч" или стандарт-титр калия двухромовокислого;

стаканы стеклянные лабораторные вместимостью 100, 500, 1000 см;

колбы конические на 100, 150, 250, 500, 1000 см;