Об утверждении Методических указаний по разработке нормативов качества воды водных объектов рыбохозяйственного значения, в том числе нормативов предельно допустимых концентраций вредных веществ в водах водных объектов рыбохозяйственного значения (с изменениями на 22 декабря 2016 года)

3. Установление максимальной допустимой концентрации вещества для простейших

3.1. Введение

Простейшие, в частности инфузории, составляют до 70% численности гетеротрофного микропланктона в водных объектах. Многочисленность данной группы организмов, экологическая значимость ее в процессах самоочищения, в продукционных процессах, трофических связях, значение ее как составной части естественной кормовой базы зоопланктона и молоди рыб вызывают необходимость исследовать данную группу в токсикологическом плане. Наблюдения показали, что простейшие в силу своих физиологических особенностей проявляют большую чувствительность к изменению факторов внешней среды. Их короткий цикл развития дает возможность проследить действие отдельных токсикантов на ряде поколений. Данные организмы (особенно ресничные инфузории) достаточно легко культивировать. Все это делает простейших удобным тест-объектом для токсикологических опытов.

3.2. Характеристика тест-объекта

В качестве тест-объектов в токсикологических исследованиях используются брюхоресничные инфузории: стилонихия, эушютус, керонопсис (Stylonichia mytilus; Euplotes harpac, E. trisulkatus, E. sp.; Urostula marina; Keronopsis multistilata).

Стилонихия (Stylonichia mytilus) - солоноватоводная инфузория (размер до 300 мкм), в лабораторных условиях адаптируется к солености до 25‰. Обитает в водных объектах с большим содержанием органических веществ, отмирающих растений, ила и т.п. Всеядна, в число ее пищевых объектов входят бактерии, жгутиконосцы, одноклеточные водоросли, детрит. Стилонихия, подобно другим инфузориям, размножается половым и бесполым путем. В процессе бесполого размножения (амитоз) при делении вегетативного ядра (макронуклеуса) происходит постепенное нарушение его генетической структуры, что, в свою очередь, выражается в депрессии и старении клона. При половом процессе в результате слияния микронуклеусов двух конъюгирующих особей развивается новый макронуклеус, что восстанавливает нормальную генетическую структуру последнего и соответственно нормализует физиологические функции организма.

Эуплотус (Euplotes harpac), размер до 450 мкм - самая крупная инфузория из рода Euplotes Инфузории этого рода имеют бесцветное и прозрачное щитовидное тело с очень сильно развитым перистомом, 10 лобно-брюшных циррий, 5 поперечных, 4 умеренно развитых хвостовых циррий играют роль рулей. Инфузории весьма распространены в иле, среди растительности. Помимо Е. harpac используются Е. trisulkatus.

Уростула (Urostula marina), размер до 200 мкм, имеет гибкое, малосократимое, яйцевидное тело, ширина которого составляет 1/3 длины. Рот с двумя ундулирующими мембранами, вентральные ряды из низких циррий, краевые ряды выражены слабо, поперечный ряд выражен очень ясно. Обитает среди растений, в незагрязненных водных объектах; прожорливая всеядная форма.

Керонопсис (Keronopsis multistilata), размер до 450 мкм - бентическая инфузория, населяет толщу прибрежного морского песка. Форма длинной ленты, ширина составляет 1/7 длины тела. Ресничный аппарат, позволяющий протискиваться между песчинками, хорошо развит.

Как видно, используемые в качестве тест-организмов инфузории занимают определенную нишу в водном объекте. Они являются или планктонобентосными формами, или полностью бентическими формами, что позволяет исследовать как растворимую фракцию веществ, так и малорастворимую.

3.3. Условия лабораторного содержания

Монокультуру простейших культивируют при комнатной температуре 20 ± 2°С на искусственной морской среде в чашках Петри при естественном освещении, предохраняя от воздействия прямых солнечных лучей, или в люминостате.

Используется обычное лабораторное оборудование, приборы, посуда и реактивы, в том числе:

реактивы для приготовления искусственной морской среды;

вода дистиллированная;

бумага фильтровальная;

колбы на 1000 см;

градуированные мерные пипетки на 10, 5, 1, 0,1 см;

пипетки для пересадки простейших (Пастеровские пипетки с укороченным концом);

мерные колбы на 100 см;

мерные пробирки на 10 см;

чашки Петри;

микроаквариумы (блок камер из оргстекла);

бинокуляр МБС-9 или МБС-10;

оксиметр;

рефрактометр для измерения солености воды;

рН-метр;

двухромовокислый калий КCrO марки "хч" или стандарт-титр калия двухромокислого;

культура простейших;