О надзоре за оборотом пищевых продуктов, содержащих ГМО

IV. Выделение ДНК

4.1. Метод выделения ДНК с помощью СТАВ:

- навеску исследуемого гомогенизированного продукта массой 100 мг поместить в микроцентрифужную пробирку типа Эппендорф на 1,5 мл;

- добавить 300 мкл деионизированной воды, перемешать шпателем;

- добавить 500 мкл лизирующего СТАВ-буфера с меркаптоэтанолом, тщательно перемешать шпателем;

- инкубировать при 65°С 90 минут;

- центрифугировать 10 минут при 13000 об/мин;

- перести 500 мкл супернатанта в чистую пробирку типа Эппендорф вместимостью 1,5 мл;

- добавить 500 мкл хлороформа, перемешать на вортекс 30 секунд;

- центрифугировать 10 минут при 13000 об/мин;

- перенести 500 мкл верхней фракции в чистую пробирку, добавить 500 мкл хлороформа, перемешать;

- центрифугировать 5 минут при 13000 об/мин;

- перенести верхнюю фракцию в чистую пробирку типа Эппендорф вместимостью 1,5 мл, не захватывая слой хлороформа;

- добавить 2 объема СТАВ-осаждающего буфера, перемешать пипетированием;

- инкубировать 60 минут при комнатной температуре;

- центрифугировать 5 минут при 13000 об/мин;

- удалить супернатант;

- растворить осадок в 350 мкл NaCl (1,2 М);

- добавить 350 мкл хлороформа, перемешать на вортекс 30 секунд;

- центрифугировать 10 минут при 13000 об/мин;

- перенести верхнюю фракцию в чистую пробирку типа Эппендорф вместимостью 1,5 мл;

- добавить 0,6 объема изопропилового спирта, перемешать;

- центрифугировать 10 минут при 13000 об/мин;

- удалить супернатант;

- добавить 500 мкл 70%-ного раствора этилового спирта и перемешать на вортекс;

- центрифугировать 10 минут при 13000 об/мин;

- удалить супернатант;

- подсушить осадок не более 5 минут при 65°C для удаления капель спирта;

- растворить осадок в 100 мкл деионизированной воды, осторожно встряхивая, полученный раствор ДНК готов для проведения полимеразной цепной реакции (ПЦР);