9.1. Тиогликолевая среда. | ||||
9.1.1. Состав: | ||||
гидролизат казеина | 15 г | |||
(в пересчете на сухой остаток) | ||||
дрожжевой экстракт | 5 г | |||
(10% в пересчете на сухой остаток) | ||||
натрий хлористый | 2,5 г | |||
глюкоза | 5 г | |||
цистин | 0,75 г | |||
тиогликолевая кислота | 0,3 мл | |||
раствор резазурина 1:1000 | 1 мл | |||
(свежеприготовленный) | ||||
агар-агар дальневосточный | 0,75 г | |||
вода дистиллированная до рН среды после стерилизации 7,0-7,2. | 1000 мл | |||
9.1.2. Приготовление.
Смешивают все компоненты среды, кроме глюкозы и тиогликолевой кислоты.
Цистин предварительно растворяют в небольшом количестве дистиллированной воды при постепенном добавлении 10-20% раствора едкого натра до его полного растворения. Смесь подщелачивают 10% раствором едкого натра до рН 8,0-8,2, кипятят в котле с паровой рубашкой или на открытом огне при постоянном перемешивании до расплавления агар-агара 5-10 минут или автоклавируют 20 минут при 100 град.С. Прибавляют горячую воду до первоначального объема, вносят глюкозу и тиогликолевую кислоту, фильтруют через полотно "Бельтинг", устанавливают рН 7,2-7,3. Добавляют раствор резазурина, смешивают и разливают в стерильные пробирки по 20 мл. Стерилизуют 20 минут при 120 град.С.
Тиогликолевую среду можно хранить до посева, предохраняя ее от света, при комнатной температуре в течение не более 7 суток со дня приготовления.
Примечание:
допускается приготовление среды без раствора резазурина;
допускается применение других сортов агар-агара, но с заранее оттитрованным количеством.
9.2. Сахарный бульон Хоттингера (с 0,5 и 1,0% глюкозы).
9.2.1. Состав:
мясной перевар по Хоттингеру до разведения аминного азота на | 140-160 мг% | |||
натрий хлористый | 0,5% | |||
глюкоза | 0,5% (1,0%) | |||
вода дистиллированная рН среды 7,2-7,4 | до 1000 мл | |||
9.2.2. Приготовление.
Смешивают мясной перевар по Хоттингеру с водой в таком соотношении, чтобы в среде содержалось 140-160 мг% аминного азота, добавляют натрий хлористый. Смесь подщелачивают 10% раствором едкого натра до рН 8,0-8,2, кипятят на открытом огне 10 минут или автоклавируют при 100 град.С 10 минут. Если есть выкипание, доводят объем до первоначального кипяченой или дистиллированной водой. Фильтруют через ватный тампон, прибавляют 0,5% (1,0%) глюкозы, устанавливают рН 7,3-7,4 добавлением 5% раствора соляной кислоты. Снова фильтруют через бумажный фильтр или полотно "Бельтинг". Разливают в стерильную посуду. Стерилизуют при 110 град.С 30 минут.
9.3. Бульон Сабуро.
9.3.1. Состав:
сухой пептон ферментативный | 10 г | |||
глюкоза или мальтоза | 100 г | |||
вода дистиллированная | до 1000 мл | |||
рН среды после стерилизации 5,5-5,8 | ||||
9.3.2. Приготовление.
В воду добавляют пептон и кипятят 10 минут. Фильтруют через полотно "Бельтинг". К полученному объему после фильтрации прибавляют глюкозу и мальтозу. Если рН выше, чем 5,7, то следует подкислить 5% раствором соляной кислоты до рН 5,7. Разливают в стерильные пробирки по 10 мл. Стерилизуют при 110 град.С 30 минут.
9.4. Контроль стерильности питательных сред.
Для контроля стерильности питательные среды после изготовления и стерилизации помещают в термостат при температуре 32 град.С на 72 часа.
Сахарный бульон Хоттингера и бульон Сабуро контролируют полностью (всю приготовленную серию пробирок, колб, флаконов).