О мерах по усилению эпидемиологического надзора и профилактики менингококковой инфекции и гнойных бактериальных менингитов

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ
по использованию реакции непрямой гемагглютинации
для выявления антител при менингококковой инфекции.

1. Показания к проведению серологических исследований

Реакцию непрямой гемагглютинации (РНГА) с менингококковыми эритроцитарными диагностикумами *(* Характеристика эритроцитарных менингококковых диагностикумов, выпускаемых производственным предприятием МНИИЭМ им.Г.Н.Габричевского Минздрава РФ, условия их хранения и техника постановки реакции непрямой (пассивной) гемагглютинации подробно изложены в Наставлении по применению диагностикумов, которое вложено в упаковку препаратов) серогрупп А, В и С проводят в следующих случаях:

а) как дополнительный метод диагностики менингококковой инфекции. Обязательным требованием является исследование сывороток крови от больных, взятых в разные сроки от начала заболевания, т.е. в динамике (в начале заболевания, на 7-й и 15-й дни болезни).

б) для ретроспективного выявления локализованных форм менингококковой инфекции в очагах заболевания;

в) при проведении иммуно-эпидемиологических исследований среди населения с целью определения соотношения серонегативных и серопозитивных контингентов;

г) при оценке иммунологической эффективности противоменингококковой вакцинации.

2. Методика постановки реакции непрямой гемагглютинации (РНГА) с
зритроцитарными менингококковыми диагностикумами

Реакцию непрямой гемагглютинации можно ставить как макро-, так и микрометодом, причем, в последнем случае используют только микротитраторы системы "Такачи".

Различия между этими методами заключаются лишь в объемах используемых ингредиентов и сроках учета результатов реакции. При макрометоде реагирующая смесь в каждой лунке состоит из 0,5 мл соответствующего разведения сыворотки крови и 0,25 мл диагностикума. В микрометоде объемы соответственно уменьшаются: 0,05 мл сыворотки и 0,025 мл диагностикума.

Учет результатов исследования в микротитраторе проводят спустя 2 часа инкубации в термостате; при макрометоде иногда требуется дополнительная экспозиция в течение 1-2 часов при комнатной температуре.

При постановке РНГА можно использовать многоканальные пипетманы с указанными объемами ингредиентов.

2.1. Необходимые реагенты и приборы:

- эритроцитарные менингококковые серогруппы А, В и С диагностикумы;

- сыворотки диагностические менингококковые группоспецифические А, В и С *(*Входят в набор эритроцитарных менингококковых диагностикумов);

- нормальная кроличья сыворотка **(** Нормальную кроличью сыворотку получают от здоровых кроликов ), сухая кроличья плазма или бычий сывороточный альбумин ***(*** Кроличья плазма и бычий сывороточный альбумин - коммерческие препараты);

- исследуемый материал (сыворотка крови человека);

- полистироловые пластины с лунками, серологические пробирки или микротитраторы с V-образными лунками (системы "Такачи");

- термостат для поддержания температуры 37 град.. С;

- водяная баня для поддержания температуры 56 град.. С;

- потенциометр для измерения рН растворов;

- пипетки стеклянные мерные (ГОСТ 20-292-74);

- дозаторы пипеточные П1 на 0,5; 0,05 (2Т2.933.053 ТО);

- хлорид натрия (NaCl);

- натрий фосфорно-кислый двузамещенный (Na(2) HPO(4)-12H(2)O);

- калий фосфорно-кислый однозамещенный (КН(2) РO(4));

- дистиллированная вода.

2.2. Подготовка ингредиентов.