Приложение 6
УТВЕРЖДЕНО
Приказ Минздрава России
от 09.01.98 N 2
ИНСТРУКЦИЯ
по удалению из сыворотки антирезус
антител другой специфичности
Общие сведения
В практической работе по определению резус-принадлежности крови наибольшее удобство представляет использование сывороток антирезус группы крови АВ(IV), не содержащих групповых агглютининов альфа и бета. Такие сыворотки являются универсальными, так как позволяют определять резус-принадлежность в крови любой группы по системе АВО.
Сыворотки антирезус, принадлежащие к группам 0(I), А(II) и В(III), также могут быть превращены в универсальные путем абсорбции или нейтрализации в них групповых агглютининов альфа и бета.
Помимо групповых агглютининов использованию сыворотки антирезус мешают также имеющиеся в отдельных случаях изоиммунные антитела другой специфичности, чаще всего анти-С и анти-Е. Если эти антитела имеют низкий титр, они могут быть удалены при помощи абсорбции или путем разведения сыворотки.
Использование универсальных сывороток антирезус упрощает работу, повышает эффективность лабораторной службы и исключает получение ошибочных результатов из-за несоответствия группы сыворотки антирезус и исследуемых эритроцитов.
Для освобождения сыворотки антирезус от агглютининов альфа, бета и от антител анти-С и анти-Е можно применять разные способы:
а) нейтрализацию групповых агглютининов альфа и бета соответствующим групповым веществом, содержащимся в амниотической жидкости (см.п.1);
б) нейтрализацию групповых агглютининов альфа и бета естественным групповым веществом А и В (субстанция Витебского) (см.п.2);
в) абсорбцию групповых агглютининов альфа и бета резус-отрицательными эритроцитами, находящимися в свертках крови после снятия с них сыворотки (см.п.3);
г) нейтрализацию групповых агглютининов альфа и бета путем разведения сыворотки (см.п.4);
д) абсорбцию антител анти-С и анти-Е эритроцитами этой специфичности (см.п.5);
е) нейтрализацию антител анти-С и анти-Е путем разведения сыворотки (см.п.6).
1. Нейтрализация групповых агглютининов альфа и
бета при помощи амниотической жидкости*
---------------
* Амниотическая жидкость нейтрализует альфа- и бета-антитела, относящиеся к классу lgМ, неполные альфа- и бета-антитела, относящиеся к классу lgG, при этом не нейтрализуются.
Амниотическая жидкость содержит растворенную групповую субстанцию, соответствующую группе крови плода. Она может быть использована как в нативном виде, так и предварительно высушенная и затем растворенная дистиллированной водой (получение и обработку амниотической жидкости см.п.8).
Для нейтрализации агглютининов альфа и бета в сыворотке антирезус группы О(альфа бета)(I) используют амниотическую жидкость группы АВ(IV) или смесь образцов амниотической жидкости групп А(II) и B(III). Для нейтрализации агглютининов и бета в сыворотке группы А(бета)(II) используют амниотическую жидкость группы В(III). Для нейтрализации агглютининов альфа в сыворотке антирезус группы В(альфа)(III) используют амниотическую жидкость группы А(II).
Для полного истощения групповых агглютининов в исходной сыворотке антирезус проводят подбор оптимального соотношения амниотической жидкости и нейтрализуемой сыворотки антирезус, для чего:
- в штатив устанавливают пять пробирок с обозначениями 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, во все пробирки вносят по 2 капли амниотической жидкости нативной или растворенной после высушивания;
- в первую пробирку добавляют 4 капли нейтрализуемой сыворотки, во вторую - 6 капель, в третью - 8 капель, в четвертую - 10 капель, в пятую - 12 капель;
- содержимое пробирок перемешивают и оставляют на 10 минут при комнатной температуре;
- после 10-минутной экспозиции смесь из каждой пробирки контролируют на плоскости на полноту нейтрализации со стандартными резус-отрицательными эритроцитами, содержащими антиген, соответствующий нейтрализуемым агглютининам;
- последнее разведение, в котором отсутствует агглютинация (время наблюдения 5 минут), принимается за оптимальное соотношение амниотической жидкости и нейтрализуемой сыворотки;
- если агглютинация отсутствует во всех разведениях, готовят разведения: 1:7, 1:8, 1:9 и продолжают исследование, как сказано выше;
- после того как выбрано оптимальное соотношение, к основному объему сыворотки антирезус добавляют соответствующее количество амниотической жидкости и перемешивают их. Через 10-20 мин после перемешивания вновь проверяют сыворотку на полноту абсорбции на плоскости с 6-8 образцами резус-отрицательных эритроцитов группы А(II) и В(III);
- далее сыворотку исследуют и обрабатывают в соответствии с "Инструкцией по изготовлению стандартных сывороток и реагента антирезус".
Примечание:
В целях упрощения получения универсальных сывороток из сывороток антирезус группы А(бета)(II) и В(альфа)(III) их можно предварительно смешивать, что позволяет нейтрализовать одномоментно агглютинины альфа и бета амниотической жидкостью группы АВ(IV) или смесью амниотической жидкости группы А(II) и группы В(III). Предварительное смешивание сыворотки противоположных групп целесообразно еще и потому, что при этом происходит частичная взаимная нейтрализация групповых агглютининов, что снижает количество амниотической жидкости, необходимое для полной нейтрализации, а следовательно, снижается степень разведения абсорбируемой сыворотки.
Использование высушенной амниотической жидкости