Приложение 5
УТВЕРЖДЕНО
Приказ Минздрава России
от 09.01.98 N 2
ИНСТРУКЦИЯ
по изготовлению стандартных
сывороток и реагента антирезус
Стандартные сыворотки антирезус служат для определения резус-принадлежности крови людей и приготавливаются из крови лиц, сенсибилизированных к резус-фактору, содержащих в крови активные резус-антитела.
Источники получения сыворотки антирезус
Кровь (плазма) для изготовления сывороток антирезус может быть получена: а) от женщин, сенсибилизированных к резус-фактору во время беременности; б) от больных, перенесших трансфузионные реакции или осложнения, которым производят кровопускание в процессе их лечения (обменные трансфузии, плазмаферез) и от тех же лиц после их излечения; в) от доноров, дающих кровь для переливания больным, в тех (редких) случаях, когда у них обнаружены в крови резус-антитела; г) от лиц, специально иммунизированных антигеном резус. (см. Метод. рекоменд. "Иммунизация доноров для получения сывороток и иммуноглобулина антирезус".)
Выявление женщин, сенсибилизированных к
резус-антигену и содержащих в крови резус-антитела
Наиболее часто сенсибилизация к резус-антигену происходит у женщин во время беременности. Выявление таких лиц производится персоналом женских консультаций и родильных домов. Кровь резус-отрицательных женщин исследуют на наличие антител. При выявлении резус-антител сведения о таких лицах передаются в учреждения Службы крови.
Учет лиц, в крови которых содержатся резус-антитела
В тех случаях, когда устанавливается сенсибилизация к резус-антигену, т.е. наличие в крови у женщин резус-антител, таких женщин регистрируют и заводят на них карту "Учета изоиммунных лиц". Карты заполняются персоналом родильных домов, в женских консультациях и в учреждениях Службы крови.
Привлечение к донорству лиц, в крови которых
содержатся резус-антитела
У женщин, в крови которых содержатся резус-антитела, может быть взята кровь для изготовления стандартной сыворотки.
Привлечение таких лиц к донорству требует особого подхода. Следует учитывать, что большинство из них перенесло тяжелую психическую травму в связи с болезнью, а иногда и смертью ребенка. Желательно рассказать женщине, что из ее крови будет приготовлена сыворотка-реактив, которую необходимо использовать при лечении детей с таким же заболеванием.
При согласии женщины дать кровь необходимо обследовать состояние ее здоровья и установить возможность и дозы взятия крови.
В дальнейшем, но не ранее чем через полгода после родов и по окончании периода лактации желательно привлечение женщин, иммунизированных во время беременности, к систематическому донорству, а при падении титра антител - к реиммунизации, в соответствии с "Методическими рекомендациями по иммунизации доноров для получения сыворотки и иммуноглобулина антирезус".
Показатели пригодности крови для изготовления из нее
стандартной сыворотки антирезус
Показателем пригодности крови для приготовления из нее стандартной сыворотки является ее активность, т.е. титр резус-антител.
Ввиду возможного снижения титра антител при обработке сыворотки следует привлекать к донорству лиц, в крови которых содержатся антитела анти-D с титром, превышающим окончательные требования, предъявляемые к стандартным сывороткам. Для полных антител титр должен быть не ниже чем 1:32, для неполных антител при исследовании их в непрямой пробе Кумбса - не ниже чем 1:128, а при исследовании реакцией с применением желатина в пробирках или реакцией в сывороточной среде на плоскости - не ниже 1:64.
Исходный титр резус-антител при изготовлении стандартного универсального реагента должен быть не ниже 1:32.
Методы и дозы взятия крови
Взятие крови от лиц, сенсибилизированных к резус-антигену предыдущими беременностями или трансфузиями крови, а также от искусственно иммунизированных доноров, состояние здоровья которых соответствует требованиям инструкции, предъявляемым к донорам, дающим кровь для переливания больным, допускается в дозах, предусмотренных этой инструкцией.
Плазму, содержащую резус-антитела, рекомендуется получать также методом плазмофереза, однако только вне периода беременности.
Оплата на усиление питания лицам, из крови которых изготавливается сыворотка антирезус, при любом методе взятия крови и последующего отделения сыворотки или плазмы, производится в тройном размере.
Первичная обработка сыворотки и плазмы
При получении плазмы из крови донора методом плазмофереза плазма не позже чем через 2-3 дня должна быть дефибрирована. Для этого плазму переливают из пластикатного мешка во флакон, добавляют в нее 20% раствор хлорида кальция из расчета 3 мл на 100 мл плазмы и содержимое флакона тщательно перемешивают. Через несколько минут после этого, а затем еще раз через 30 минут флакон с плазмой встряхивают для отделения свертка от стенок флакона и оставляют на 2 часа при комнатной температуре, после чего помещают в холодильник при температуре 4-8 град.С. На следующий день сыворотку отсасывают от свертка в другой флакон и консервируют борной кислотой из расчета 2-3 г на 100 мл сыворотки или азидом натрия - 1 г на 1 л.
Если кровь берут обычным путем в сухой флакон, то через несколько минут после взятия крови, а затем еще раз через 30 минут, флакон встряхивают для отделения свертка от стенок и оставляют на 2 ч при комнатной температуре, после чего помещают в холодильник при температуре 4-8 град.С. На следующий день сыворотку отсасывают от свертка в другой флакон и консервируют. При высоком титре резус-антител можно получить дополнительное количество сыворотки антирезус путем приготовления смывов со свертка. Для этого сверток измельчают (разрезают на много частей) и заливают его до половины объема изотоническим раствором NaCl или сывороткой группы АВ(IV) с высокими конглютинирующими свойствами, стандартным разводителем или альбумином.
Флакон со свертком, залитым жидкостью, плотно закрывают пробкой и несколько раз переворачивают для того, чтобы лучше вымыть из свертка сыворотку антирезус, а затем помещают в холодильник при температуре 4-8 град.С. На следующий день сыворотку-смыв сливают в другой сосуд и оставляют в холодильнике до полного оседания эритроцитов, после чего переливают в другой сосуд и полученный смыв исследуют на активность резус-антител. Если титр соответствует требованиям, изложенным в пункте 11, смыв соединяют с первоначально полученной сывороткой или обрабатывают далее отдельно, предварительно добавляя в него борную кислоту из расчета 2-3 г на 100 мл сыворотки или азид натрия - 1 г на 1 л. Приготовление смыва можно повторить. Изотонический раствор NaCl применяется для смывов в тех случаях, когда предполагается последующее использование сыворотки антирезус реакцией агглютинации в солевой среде (в маленьких пробирках) или реакцией конглютинации с применением желатина или полиглюкина.
После такой первичной обработки сыворотку хранят при 4-8 град.С не менее 2-3 недель и затем приступают к дальнейшим исследованиям.
Исследование сыворотки
Исследование сыворотки следует производить через 2-3 недели после ее заготовки и консервирования ввиду того, что в этот период может происходить снижение титра антител. Исследование начинают с проверки групповой принадлежности сыворотки по системе АВО. Полученные результаты сверяют с паспортными записями на флаконе с сывороткой. Следует учесть, что если исследуется смыв со свертка, полученный сывороткой группы АВ(IV) или стандартным разводителем группы АВ(IV), то может произойти нейтрализация групповых антител альфа и бета. Если это будет установлено, то делают соответствующие изменения в паспортных записях. Далее определяют в сыворотке присутствие полных и неполных антител с помощью методов, описанных в "Инструкции по исследованию сыворотки на наличие резус-антител".
Для испытания применяется не менее трех образцов стандартных эритроцитов одноименной с испытуемой сывороткой группы или группы 0(I), содержащих в том или ином сочетании три антигена резус: D, С и Е, а также два образца резус-отрицательных (ccddee) эритроцитов. Положительный результат с резус-положительными эритроцитами и отрицательный с резус-отрицательными подтверждает наличие в сыворотке резус-антител. После этого сыворотку титруют тем же методом, которым в ней были выявлены антитела. Например, если сыворотка дала положительный результат в солевой среде, ее титруют в солевой среде; если сыворотка дала положительный результат в непрямой пробе Кумбса или в реакции с применением желатина, ее титруют, используя эти методы; если сыворотка оказалась активной при использовании обоих методов, она титруется также с помощью двух методов (методы титрования см. в "Инструкции по исследованию сыворотки на наличие резус-антител").