Приложение 13
УТВЕРЖДЕНО
Приказ Минздрава России
от 9 января 1998 года N 2
ИНСТРУКЦИЯ*
по применению Цоликлона анти-С моноклонального
для определения антигена С системы резус на
эритроцитах человека
(Цоликлон анти-С Супер)
----------------
* Составители инструкции: профессор И.Л.Чертков, директор ТОО "Гематолог" Г.Ю.Митерев, научные сотрудники Л.Н.Леменева, Н.И.Оловникова, Е.В.Белкина.
ТУ 9398-207-27575295-94
1. Назначение
Цоликлон анти-С Супер предназначен для выявления антигена С системы резус на эритроцитах человека в реакции прямой гемагглютинации и может применяться взамен или параллельно с аллоиммунной анти-С сывороткой.
2. Основные свойства
2.1. Моноклональные человеческие анти-С антитела продуцируются бессмертной гетерогибридомой клеточной линией. Цоликлон анти-С Супер изготавливается на основе культуральной жидкости, кондиционированной клетками-продуцентами антител. Технология производства реагента исключает возможность его контаминации патогенными для человека вирусами.
2.2. Цоликлон анти-С Супер содержит IgM антитела, которые вызывают прямую агглютинацию С+ эритроцитов. Реагент не содержит антител других специфичностей и пригоден для выявления антигена С в эритроцитах любой группы.
3. Определение антигена С
Цоликлон анти-С Супер может быть использован в реакции агглютинации на плоскости, в пробирках, в микроплате. Определение антигена С производится в нативной крови с консервантом, в крови без консерванта, в том числе взятой из пальца.
3.1. Реакция агглютинации на плоскости
3.1.1. На предварительно подогретую (35-40 град.С) пластинку нанести одну большую каплю реагента (примерно 0,1 мл), одну маленькую каплю исследуемой крови или эритроцитов (0,02-0,05 мл) и смешать.
3.1.2. Через 20-30 секунд после смешивания покачать пластинку.
3.1.3. Результат оценить визуально по наличию или отсутствию агглютинации. Четкая реакция наступает через 30-60 секунд после смешивания реагента с эритроцитами. Окончательный результат реакции следует учитывать через пять минут. Наиболее крупная и четкая агглютинация наблюдается при использовании эритроцитов в высокой концентрации.
3.2. Реакция агглютинации в пробирках
3.2.1. Приготовить из отмытых исследуемых эритроцитов 5% суспензию в физиологическом растворе.
3.2.2. Внести в круглодонную пробирку по одной капле Цоликлона анти-С и эритроцитарной взвеси, тщательно перемешать.
3.2.3. Оставить пробирку на тридцать минут при температуре 37 град.С.
3.2.4. Центрифугировать пробирку при 1500-3000 оборотах в минуту в течение тридцати секунд.
3.2.5. Осторожно встряхивая пробирку, разбить осадок.
3.2.6. Результат оценить визуально. При отрицательном результате реакции осадок эритроцитов легко разбивается и образует гомогенную непрозрачную суспензию. При положительном результате осадок остается в виде одного или нескольких крупных агглютинатов на фоне прозрачной жидкости.
4. Контроль специфичности
Для контроля специфичности при каждом исследовании (независимо от применяемой методики) необходимо использовать стандартные С+ и с-эритроциты.
5. Хранение
Срок хранения Цоликлона анти-С Супер - один год при температуре 2-8 град.С. Вскрытый флакон можно хранить при температуре 2-8 град.С в закрытом виде в течение одного месяца.
6. Рекламация
Основаниями для рекламации являются: отсутствие активности, неспецифичность, нарушение целостности флакона, наличие хлопьев, получение реагента с истекшим сроком годности или недостаточными сведениями.