Приложение 3
УТВЕРЖДЕНО
Приказ Минздрава России
от 9 января 1998 года N 2
ИНСТРУКЦИЯ
по определению групп крови системы АВО при помощи
стандартных изогемагглютинирующих сывороток
Введение
Под группами крови АВО подразумеваются различные сочетания антигенных свойств эритроцитов (агглютиногенов) и антител по отношению к ним (агглютиногенов), находящихся в плазме крови.
Существуют два групповых агглютиногена - А и В, и два агглютинина - альфа и бета. Различные сочетания этих свойств образуют четыре группы крови: Оальфа бета(I), Абета(II), Вальфа(III) и АВо(IV).
Возможны два способа определения группы крови:
1. Определение группы крови при помощи стандартных изогемагглютинирующих сывороток. При этом способе в крови устанавливают наличие или отсутствие агглютиногенов и, исходя из этого, делают заключение о групповой принадлежности исследуемой крови.
2. Определение группы крови перекрестным способом, т.е. одновременно при помощи стандартных изогемагглютинирующих сывороток и стандартных эритроцитов. При этом способе, так же как и при первом, определяют наличие или отсутствие агглютиногенов и, кроме того, при помощи стандартных эритроцитов устанавливают наличие или отсутствие групповых агглютининов.
Группа крови у больных и других лиц, которым предполагается сделать переливание крови, определяется сертифицированным специалистом, имеющим специальную подготовку. Во избежание ошибки процедуру взятия крови и определения группы повторяют.
Результат определения группы крови записывается в правом верхнем углу лицевого листа истории болезни с указанием даты и за подписью специалиста, производившего определение.
Группа крови у доноров определяется два раза сертифицированным специалистом: один раз при первичном обращении донора при помощи стандартных сывороток двух различных серий каждой группы; и второй раз при окончательном зачислении в доноры - перекрестным способом, т.е. одновременно при помощи стандартных сывороток (также двух различных серий каждой группы) и стандартных эритроцитов. Результат обоих определений записывается на лицевой стороне донорского журнала (карты) с указанием даты и за подписью лиц, определявших группу крови.
Примечание: При использовании изогемагглютинирующих сывороток с титром не ниже, чем 1:64 разрешается проводить первичное определение группы крови у доноров и больных одной серией сыворотки каждой группы. При повторном и перекрестном определении можно использовать также сыворотки одной серии (с титром не ниже, чем 1:64), но отличающиеся от тех серий, которые были применены при первичном определении.
Специальное оснащение
а. Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки групп Оальфа бета(I), Абета(II), Вальфа(III) и стандартная сыворотка группы АВо(IV).
б. Стандартные эритроциты групп О(I), А(II) и В(III).*
----------------
* Стандартные эритроциты приготавливаются учреждениями службы крови в консервированном виде. Можно использовать и нативные свежие стандартные эритроциты, приготовленные малыми дозами в соответствии с действующей инструкцией по их изготовлению.
в. Изотонический раствор NaCl.
г. Белые фарфоровые или любые другие белые пластинки со смачиваемой поверхностью.
д. Пипетки.
е. Стеклянные или пластмассовые палочки для перемешивания капель крови и сыворотки.
Подготовительная работа
а. Определение группы крови производят в помещении с хорошим освещением при температуре 15-25 град.С.
б. Ампулы, флаконы со стандартными сыворотками ставят в штатив с тремя гнездами (или в два штатива - при использовании двух серий сыворотки каждой группы). В левые гнезда ставят сыворотку группы Оальфа(I), в средние - сыворотку группы Абета(II) и в правые сыворотку группы Вальфа(III). В ампулы опускают сухие чистые пипетки. Отдельно ставят сыворотку группы АВо(IV), употребляемую в качестве дополнительного контроля (см. раздел IV, в). Этот набор дополняют пробиркой или флаконом с изотоническим раствором NaCl.
в. Для определения группы крови перекрестным способом, кроме стандартных сывороток, подготавливают также стандартные эритроциты групп О(I), А(II) и В(III). Пробирки со стандартными эритроцитами устанавливают в маленький (на три гнезда) штатив в следующем порядке: слева - группы О(I), в середине - группы А(II) и справа группы В(III).
г. Для промывания стеклянных, пластмассовых палочек и пипеток подготавливают стаканы с водой и с изотоническим раствором NaCl.
Техника определения группы крови
при помощи стандартных сывороток
а. На левой стороне пластинки надписывают Оальфа бета [анти-(А + В)], в середине - Абета(анти-В) и справа - Вальфа(анти-А), на верхнем крае - фамилию и инициалы лица, у которого определяют группу крови.
Под соответствующим обозначением группы крови на пластинку наносят по одной большой капле (0,1 мл) стандартной сыворотки соответствующей группы. Если используют стандартные сыворотки двух различных серий каждой группы, всего получается 6 капель, которые образуют два ряда по три капли в следующем порядке слева направо: Оальфа бета-(анти-(А + В), Абета(анти-В) и Вальфа(анти-А).
Сыворотку берут из ампулы пипеткой, которую тотчас же после того, как из нее была выпущена сыворотка, опускают в ту же ампулу с сывороткой, из которой она была взята.
б. Кровь для исследования берут из места укола мякоти пальца или мочки уха. Капли крови величиной приблизительно 0,01 мл последовательно наносят сухой стеклянной палочкой на пластинку, каждую рядом с каплей стандартной сыворотки (количество испытуемой крови должно быть приблизительно в 10 раз меньше количества стандартной сыворотки, с которой она смешивается).