P 4.2.3676-20
Руководство
4.2. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. БИОЛОГИЧЕСКИЕ И МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ
Методы лабораторных исследований и испытаний дезинфекционных средств для оценки их эффективности и безопасности
1. Разработано ФБУН "Научно-исследовательский институт дезинфектологии" Роспотребнадзора (Т.В.Гололобова, Л.Г.Пантелеева, Л.С.Федорова, С.А.Рославцева, А.Ю.Скопин, М.В.Бидевкина, О.Ю.Еремина, Н.И.Шашина, Е.И.Баканова, Т.Б.Захарова, А.Л.Караев, Н.Н.Левчук, А.В.Лиманцев, Ю.В.Лопатина, В.В.Олифер, Г.П.Панкратова, С.В.Рябов, Т.Н.Шестопалова, А.С.Белова, Т.В.Воронцова, О.М.Германт, Т.Н.Потапова, А.А.Серов, А.И.Виноградова, А.В.Ильякова, К.С.Кривонос, Е.А.Матвеева, Д.Ю.Мохирев, Н.К.Ахмед); ФБУН "Федеральный научный центр гигиены им.Ф.Ф.Эрисмана" Роспотребнадзора (Г.М.Трухина); ФГБУ "Центр стратегического планирования и управления медико-биологическими рисками здоровью" ФМБА (Ю.А.Рахманин, З.И.Жолдакова, Р.А.Мамонов); ФГБОУ ДПО "Российская медицинская академия непрерывного профессионального образования" Минздрава России (Н.В.Шестопалов).
2. Утверждено Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю.Поповой 18 декабря 2020 г.
3. Р 4.2.3676-20 введено взамен глав 1-3, 5-8, приложения 1 руководства Р 4.2.2643-10 "Методы лабораторных исследований и испытаний дезинфекционных средств для оценки их эффективности и безопасности", утвержденного Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации 01.06.2010.
ВНЕСЕНО Изменение № 1, утвержденное 31.05.2024 N Р 4.2.4020-24
Изменение № 1 внесено изготовителем базы данных
1.1. Настоящее руководство (далее - руководство) включает единые методы лабораторных исследований и испытаний средств, технологий, устройств, оборудования, материалов, предназначенных для дезинфекции, предстерилизационной обработки, стерилизации, дезинсекции, дератизации (далее - дезинфекционных средств).
В руководстве приведены методы оценки антимикробной, в т.ч. вирулицидной, инсектицидной, акарицидной, репеллентной и родентицидной активности, эффективности и безопасности дезинфекционных средств.
1.2. Руководство предназначено для юридических лиц, испытательных лабораторных центров и испытательных лабораторий, других организаций и специалистов, осуществляющих исследования и испытания дезинфекционных средств в процессе их разработки, производства, применения, при проведении испытаний, исследований и экспертизы с целью государственной регистрации, подтверждения соответствия готовой продукции, а также в рамках производственного контроля и федерального государственного санитарно-эпидемиологического надзора.
2.1. Оценка активности и эффективности дезинфекционных средств проводится с целью установления наличия у них антимикробного, инсектицидного, акарицидного, родентицидного, репеллентного действия, а также эффективных режимов (концентрация, норма расхода, время экспозиции), методов и способов применения, при которых достигается соответствующее действие.
2.2. Оценка безопасности дезинфекционных средств проводится с целью установления оптимальных условий использования дезинфекционных средств, при которых исследуемое средство, его компоненты, либо возникающие при его применении эффекты не оказывают вредного влияния на человека, обрабатываемые объекты и окружающую среду.
2.3. Оценку эффективности и безопасности дезинфекционных средств проводят после химико-аналитических исследований, подтвердивших соответствие состава образца заявленному в рецептуре.
2.4. При оценке эффективности и безопасности дезинфицирующих средств, имеющих одинаковое, в сравнении с изученными ранее средствами, количество одинаковых действующих веществ, могут быть использованы только наиболее устойчивые микроорганизмы, наиболее значимые показатели безопасности и объекты обеззараживания.
2.5. Приведенные в руководстве наименования средств измерений, вспомогательных устройств, материалов, реактивов и питательных сред не исключают возможности применения средств измерений, оборудования, реактивов, питательных сред и диагностических препаратов с аналогичными или усовершенствованными свойствами (характеристиками).
2.6. Руководство носит рекомендательный характер.
3.1. Общие сведения о микробиологических испытаниях дезинфицирующих средств
3.1.1. Химические дезинфицирующие средства представляют собой индивидуальные химические соединения (вещества) или композиционные составы, включающие одно или несколько действующих веществ (далее - ДВ), обладающих антимикробным (бактерицидным, фунгицидным, вирулицидным, спороцидным) действием. В их состав могут входить вспомогательные компоненты, усиливающие эффективность ДВ, а также стабилизаторы, ингибиторы коррозии, моющие вещества, красители, отдушки.
3.1.2. Микробиологические исследования включают изучение антимикробной активности ДВ и изучение эффективности дезинфицирующих средств. Объем микробиологических исследований определяется особенностями объектов, в отношении которых предполагается применение дезинфицирующих средств. Микробиологические исследования проводятся после химико-аналитических исследований, подтверждающих соответствие средства его рецептуре, спецификации или техническим условиям.
3.1.3. Исследования дезинфицирующих средств включают 3 этапа:
1) определение in vitro спектра антимикробной активности и влияния на нее различных факторов: рН, органических веществ, температуры. При исследовании субстанций, предназначенных для производства дезинфицирующих средств, определяют только спектр антимикробной активности;
2) исследование эффективности при обеззараживания искусственно контаминированных тест-микроорганизмами объектов в лабораторных условиях с целью разработки режимов применения дезинфицирующих средств с учетом условий их дальнейшего применения в практике для обеззараживания белья, поверхностей, санитарно-технического оборудования, посуды, предметов ухода за больными, игрушек, выделений и др. в зависимости от вида микроорганизма, концентрации ДВ, времени воздействия, нормы расхода, характера объекта, наличия на нем органического загрязнения и его специфики, температуры, способа и кратности обработки;
3) испытания дезинфицирующих средств в практических условиях для подтверждения эффективности разработанных режимов применения проводятся в следующих случаях:
- исследования средства, содержащего новое или ранее не изученное ДВ;
- нового способа применения, значительного снижения концентрации и времени воздействия по сравнению с ранее разрешенными режимами и пр.
3.1.4. Тест-объекты для исследования эффективности дезинфицирующих средств. При изучении эффективности дезинфицирующих средств с целью разработки режимов дезинфекции поверхностей в помещениях, оборудования, приборов, аппаратов, транспорта и др. используют разнообразные виды поверхностей (гладкие, шероховатые, пористые, впитывающие, не впитывающие и др.) размером 10х10 см или 5x5 см, изготовленные из разных материалов. Набор тест-объектов для проведения исследований, испытаний определяется назначением средства и, при необходимости, техническим заданием на проведение работ.
3.1.4.1. Рекомендации к тест-поверхностям. Поверхности должны быть стойкими к воздействию моющих и дезинфицирующих средств, не обладать антимикробными свойствами и соответствовать национальным и межгосударственным стандартам (далее - стандарты):
- деревянные поверхности, подготовленные из доски 25х100х3000 мм, соответствующие ГОСТ 2695 пиломатериалы лиственных пород, неокрашенные;
- деревянные поверхности, подготовленные из доски 25х100х3000 мм, соответствующие ГОСТ 2695 пиломатериалы лиственных пород, с различными лакокрасочными покрытиями (алкидные краски, масляные краски, вододисперсные краски, нитроэмали, лаки на основе нитроцеллюлозы, воды, акрила, полиуретана) в соответствии с ГОСТ 24404;
- поверхности из древесины и древесных материалов, покрытые настенными обоями, соответствующими ГОСТ 6810;
- поверхности из линолеума с гладкой или тисненой поверхностью различных видов: линолеум резиновый многослойный ГОСТ 16914, линолеум поливинилхлоридный на тканой и нетканой подоснове ГОСТ 7251, линолеум поливинилхлоридный на тепло-, звукоизолирующей подоснове ГОСТ 18108;
- поверхности из легированных нержавеющих сталей и коррозионностойких сплавов, соответствующих ГОСТ 5632;
- поверхности из металлов с различными лакокрасочными покрытиями (алкидные краски, масляные краски, эмали, различные грунтовочные покрытия) в соответствии с ГОСТ 23852;
- поверхности из различных полимерных материалов: полиолефины (полиэтилен, полипропилен), поливинилхлорид, поликарбонат, полиметилметакрилат, фторопласт в соответствии с ГОСТ Р 50962;
- поверхности из листового стекла (оконное гладкое, матовое, с рифлёной поверхностью) в соответствии с ГОСТ 111;
- поверхности из искусственной кожи различного назначения: искусственная кожа обивочная в соответствии с ГОСТ 57019*, искусственная кожа галантерейная в соответствии с ГОСТ 56626*;
________________
* Вероятно, ошибка оригинала. Следует читать: ГОСТ Р 57019 и ГОСТ Р 56626 соответственно. - Примечание изготовителя базы данных.
- поверхности из керамической плитки различных видов: кафель глазурованный в соответствии с ГОСТ 6141, плитка керамическая метлахская в соответствии с ГОСТ 6787, керамогранитная плитка в соответствии с ГОСТ 57141*.
________________
* Вероятно, ошибка оригинала. Следует читать: ГОСТ Р 57141. - Примечание изготовителя базы данных.
3.1.4.2. При исследовании эффективности дезинфицирующих средств с целью разработки режимов дезинфекции столовой посуды, столовых приборов, лабораторной посуды используют следующие тест-объекты:
- тарелки из различных материалов: фарфор по ГОСТ Р 54575, фаянс по ГОСТ Р 54395, пластик по ГОСТ Р 50962;
- стаканы и кружки из различных материалов: фарфор по ГОСТ Р 54575, стекло, пластик по ГОСТ Р 50962;
- ножи, вилки, ложки из различных материалов: нержавеющая сталь по ГОСТ 32583, алюминий по ГОСТ Р 51016, пластик по ГОСТ Р 50962;
- посуда лабораторная - пробирки, пипетки, предметные стекла по ГОСТ 1770;
- посуда для сбора выделений - подкладные судна, мочеприемники, горшки, плевательницы и др. или тест-объекты, их имитирующие.
3.1.4.3. При исследовании эффективности дезинфицирующих средств с целью разработки режимов дезинфекции белья используют ткани из натуральных, синтетических и смесовых волокон, соответствующие стандартам:
- хлопковые ткани: бязь, батист по ГОСТ 29298;
- смесовые ткани: хлопок с содержанием синтетических волокон от 20 до 50%, хлопок с содержанием синтетических волокон от 50 до 80% по ГОСТ 11209;
- синтетические ткани: ткань полиамидная текстильная по ГОСТ 32085.
3.1.4.4. При исследовании эффективности дезинфицирующих средств с целью разработки режимов обеззараживания медицинских изделий, предметов ухода за больными, воды, овощей, фруктов и др. используются натуральные изделия или тест-объекты, указанные в соответствующих разделах.
3.1.4.5. Подготовка тест-объектов для исследования эффективности дезинфицирующих средств при обеззараживании поверхностей в помещениях, оборудования, приборов. Тест-поверхности выбирают перед экспериментом в количестве, достаточном для проведения исследований (не менее пяти видов поверхностей). Тест-поверхности, устойчивые к воздействию температуры и пара, подвергают механической очистке - моют водой с мылом, щеткой и высушивают. Затем упаковывают в стерилизационные упаковочные материалы, разрешенные к применению в установленном порядке, с указанием даты упаковки, вида и количества тест-объектов, стерилизуют паровым методом при плюс 132°С (2,0 кгс/см) 20 мин. Тест-поверхности, не устойчивые к воздействию температуры и пара (поверхности, оклеенные обоями, окрашенные клеевой краской и др.) перед экспериментом протирают несколько раз стерильной марлевой салфеткой, увлажненной 6% перекисью водорода.
3.1.4.6. Подготовка тест-объектов для исследования эффективности средств при обеззараживании столовой посуды, столовых приборов, лабораторной посуды. Тест-объекты подвергают механической очистке - моют водой с мылом и щеткой, высушивают. Затем упаковывают в стерилизационные упаковочные материалы, разрешенные к применению в установленном порядке, с указанием даты упаковки, вида и количества тест-объектов, стерилизуют паровым методом при плюс 132°С (2,0 кгс/см) 20 мин.
3.1.4.7. Подготовка тест-объектов для исследования эффективности средств при обеззараживании белья. Эффективность средств при обеззараживании белья определяют с помощью тест-объектов, представляющих собой кусочки ткани из бязи (или др. материала) размером 2х2 см. Перед приготовлением тест-объектов отрез ткани погружают на 24 ч в холодную воду для удаления аплитуры, крахмала. Затем его тщательно стирают с мылом, кипятят, сушат и гладят утюгом. После этого разрезают ножницами на тест-объекты размером 2х2 см и раскладывают в чашки Петри, последние упаковывают в стерилизационные упаковочные материалы, разрешенные к применению в установленном порядке, с указанием даты упаковки, вида и количества тест-объектов и стерилизуют паровым методом при плюс 132°С (2,0 кгс/см) 20 мин.
3.1.4.8. Медицинские изделия, предметы ухода за больными, овощи, фрукты и др. объекты, используемые для оценки дезинфицирующей активности (натуральные изделия или тест-объекты), подготавливают к проведению эксперимента, как указано выше для термоустойчивых и термонеустойчивых материалов. Простерилизованные тест-объекты хранят в стерилизационных упаковочных материалах, в специально отведенном шкафу в "чистой зоне" лаборатории в соответствии инструкцией по применению упаковочных материалов. По истечении срока хранения тест-объекты подлежат повторной стерилизации. Упаковочные материалы с простерилизованными тест-объектами вскрывают в боксированном помещении (в ламинарном боксе) с соблюдением асептических условий непосредственно перед постановкой эксперимента.
3.1.4.9. После эксперимента использованные тест-объекты, кроме тканей, с целью обеззараживания погружают в емкость с раствором перекиси водорода определенной концентрации на время экспозиции в соответствии с устойчивостью конкретного вида микроорганизма:
бактерии в вегетативной форме (кроме микобактерий) | - в 3%-й раствор на 30 мин; |
вирусы | - в 6%-й раствор на 60 мин; |
грибы | - в 6%-й раствор на 90 мин; |
бактерии в споровой форме | - в 6%-й раствор на 120 мин; |
микобактерии | - в 6%-й раствор на 240 мин. |
После дезинфекции тест-объекты моют под проточной водой, сушат и хранят в шкафах в помещениях лаборатории.
Тест-объекты из ткани после эксперимента обеззараживают в паровом стерилизаторе по режиму: плюс 132°С (2,0 кгс/см) 20 мин, затем утилизируют.
3.1.5. Приготовление растворов дезинфицирующих средств и субстанций для исследования их эффективности. Растворы дезинфицирующих средств и их субстанций готовят непосредственно перед проведением исследований (кроме тех случаев, когда изучают стабильность рабочих растворов в процессе хранения) в помещении, оборудованном приточно-вытяжной принудительной вентиляцией.
3.1.5.1. При исследовании средств, производимых в форме гранул, порошков, таблеток и др., растворы дезинфицирующих средств используют только после полного растворения ДВ дезинфицирующего средства (если не указано на возможность выпадения осадка).
3.1.5.2. Для оценки антимикробного действия субстанций и средств в лабораторных условиях и исследования эффективности дезинфицирующих средств, предназначенных для обеззараживания различных объектов, растворы дезинфицирующих средств готовят на дехлорированной водопроводной питьевой воде. Для этого необходимое количество сухого средства или жидкого концентрата вносят в стерильную пробирку (колбу) и добавляют расчетное количество воды, тщательно размешивают и закрывают резиновой пробкой. Отмечают в рабочем журнале время полного растворения и внешний вид приготовленного рабочего раствора.