Молекулярно-генетические тесты, показания, направляемый материал
Название теста | Цель тестирования | Пациенты, которым показан тест | Пригодные для теста материалы |
Тест на определение мутаций в генах BRCA1 и BRCA2 в крови | Отбор пациентов на терапию PARP-ингибиторами, выявление семейных форм рака молочной железы и яичников | Пациентки с раком молочной железы и яичников, в т.ч. с платино-чувствительным рецидивом рака яичников | Цельная кровь в пробирке с ЭДТА |
Тест на определение мутаций в генах BRCA1 и BRCA2 в биопсийном (операционном) материале) | Отбор пациенток на терапию PARP-ингибиторами | Пациентки с платино-чувствительным рецидивом рака яичников | Гистологический блок с опухолевой тканью и блок с нормальной тканью, и стекло |
Тест на определение мутаций в гене EGFR в биопсийном (операционном) материале | Отбор пациентов на терапию ингибиторами TK EGFR 1-го и 2-го поколения | Пациенты с метастатическим или местно-распространенным немелкоклеточным раком легкого (НМКРЛ) | Гистологический блок и стекло с опухолевой тканью, цитологический материал |
Тест на определение мутаций в гене BRAF в биопсийном (операционном) материале) | Отбор пациентов на терапию низко молекулярными ингибиторами мутированного белка BRAF | Пациенты с меланомой IIIC - IV стадии. Пациенты с хирургически удаленной меланомой и метастазами в лимфоузлах (адъювантная терапия) | Гистологический блок и стекло с опухолевой тканью |
Тест на определение мутаций генов KRAS и NRAS в биопсийном (операционном) материале | Отбор пациентов на терапию моноклональными антителами | Пациенты с метастатическим колоректальным раком | Гистологический блок и стекло с опухолевой тканью |
Тест на определение амплификации гена HER2 методом флюоресцентной гибридизации in situ - FISH | Отбор пациентов на терапию моноклональными антителами | Пациенты раком молочной железы, желудка с положительным ИГХ-тестом на наличие рецепторов HER2 (два плюс) | Гистологический блок и стекло с опухолевой тканью |
Требования, предъявляемые к гистологическому материалу,
подготовка материала к исследованиям
Материал должен представлять гистологический блок, залитый в парафин, в пластиковой кассете размером 3 x 4 см.
Температура плавления парафина, применяемого для изготовления блока, не должна превышать 60 град. Цельсия.
Материал должен фиксироваться в 10% нейтральном (рН от 7.0 до 7.6) (забуференном) формалине. Фиксация материала должна быть начата не позднее 1 часа после взятия ткани.
Время фиксации должно определяться типом и размером фиксируемой ткани и не должно превышать 12 - 24 часа для операционного материал, 6 - 8 часов для биоптатов.
Образцы после декальцинации с применением муравьиной или азотной кислоты для молекулярного исследования не пригодны.
Работать в перчатках, внутри вытяжных или ламинарных шкафов, использовать одноразовые инструменты и расходные материалы.
Избегать соприкосновения фрагментов биологического материала друг с другом и с любым другим биологическим материалом.
Материал может быть получен как из первичной опухоли, так из метастазов.
Общий срок хранения фиксированных формалином и залитых парафином образцов ткани (FFPE-блоки) не более 3-х лет при температуре от +15 до +25 град. Цельсия.
По результатам морфологического исследования опухолевые комплексы должны занимать не менее 60% площади ткани в срезе с FFPE-блока, зоны некроза и кровоизлияния в совокупности должны занимать не более 15% площади ткани в срезе с FFPE-блока. В случае, если образец не соответствует хотя бы одному из перечисленных критериев, рекомендуется использовать другой образец.
Анализируемый материал не подлежит использованию при нарушении условий хранения и транспортировки (температура, продолжительность, многократное замораживание-оттаивание).
При подготовке срезов с парафиновых блоков необходимо минимизировать риск кросс-контаминации образцов, для чего необходимо: работать в одноразовых неопудренных перчатках; проводить процедуру в ПЦР-боксе или в ламинарном шкафу; использовать одноразовые лезвия для микротома и стерильные пинцеты; первые два среза с каждого блока утилизировать, а для молекулярного исследования использовать срезы начиная с третьего; не помещать срезы на водяную баню.