ГОСТ 32637-2020 Методы испытания по воздействию химической продукции на организм человека. Повторное исследование пероральной токсичности на грызунах: 90-дневное

     6 Проведение испытаний

6.1 Число и пол животных

Для каждого уровня дозы следует использовать не менее 20 животных (10 самок и 10 самцов). Если запланированы промежуточные умерщвления, число подопытных животных следует увеличить на число животных, которых планируют умертвить до завершения исследования. На основании результатов предварительных испытаний химического вещества или наиболее близких аналогов следует предусмотреть включение дополнительной группы не менее чем из 10 животных (по пять особей каждого пола) в контрольную группу и группу с максимальной дозой для наблюдения за обратимостью или устойчивостью токсического эффекта после периода воздействия. Продолжительность периода после воздействия устанавливают с учетом наблюдаемых эффектов.

6.2 Дозировка

6.2.1 При проведении исследований следует использовать не менее трех уровней доз вещества и параллельную контрольную группу, за исключением случаев, когда проводят испытания предельной дозы (см. 6.2.3). Уровни дозы могут быть основаны на результатах многократного воздействия доз или исследований по определению диапазона доз и должны учитывать любые имеющиеся токсикологические и токсикокинетические данные, доступные для исследуемого соединения или родственных материалов. За исключением случаев ограничений, обусловленных физико-химическими свойствами или биологическим воздействием, максимальную дозу выбирают с целью вызвать интоксикацию, а не смерть или мучительные страдания животного. Убывающую последовательность уровней дозы выбирают таким образом, чтобы продемонстрировать реакцию на вводимую дозу и уровень отсутствия наблюдаемого вредного воздействия (NOAEL) при самом низком уровне дозы. Обычно двух-четырехкратный интервал является оптимальным для установления снижения уровней дозы, и введение дополнительной четвертой подопытной группы является более предпочтительным, чем использование очень больших интервалов (например, более чем в 6-10 раз) между дозами.

________________

См. [19].

6.2.2 Контрольную группу не подвергают воздействию исследуемого вещества, она получает только растворитель (носитель), если его используют для введения исследуемого химического вещества. С животными контрольной группы обращаются так же, как с животными подопытных групп, кроме введения исследуемого вещества. При использовании растворителя контрольная группа должна получать его в максимальном объеме. Если исследуемое химическое вещество введено в пищу и вызывает снижение потребления пищи, тогда контрольная группа, получающая одинаковое питание, может быть использована для разграничения снижения потребления пищи вследствие вкусовых качеств или токсикологических изменений у подопытных животных.

6.2.3 При необходимости следует учитывать следующие характеристики растворителя (носителя): влияние на абсорбцию, распределение, метаболизм или удерживание исследуемого химического вещества; влияние на химические свойства исследуемого химического вещества, которое может изменить его токсические характеристики; влияние на потребление пищи или воды или пищевой статус животных.

6.3 Испытание предельной дозы

Если испытание одной дозы, эквивалентной не менее чем 1000 мг/кг массы тела животных в сутки, по настоящему стандарту не вызывает наблюдаемых неблагоприятных воздействий и если токсичность не предполагается на основании данных о структурно родственных соединениях, то проведение полного исследования с использованием трех уровней дозы может не считаться необходимым. В тех случаях, когда воздействие на организм человека указывает на необходимость использования более высоких уровней доз вещества, испытание предельной дозы не применяют.

6.4 Введение доз вещества

6.4.1 Животным вводят исследуемое вещество ежедневно семь дней в неделю в течение не менее 90 дней. Использование любого другого режима дозирования (например, пять дней в неделю) требует обоснования. При принудительном введении исследуемого вещества его вводят животным однократно с использованием желудочного зонда или подходящей интубационной канюли. Максимальный объем жидкости, который может быть введен за один раз, зависит от размера подопытного животного. Объем не должен превышать 1 см/100 г массы тела, за исключением водных растворов, когда можно использовать 2 см/100 г массы тела животного. За исключением раздражающих или вызывающих коррозию веществ, которые обычно проявляют обостренные эффекты при более высоких концентрациях, следует свести к минимуму вариабельность вводимого объема регулированием концентрации исследуемого вещества для обеспечения постоянного объема при всех уровнях доз.

6.4.2 Для химических веществ, вводимых с пищей или питьевой водой, важно, чтобы вкусовые характеристики исследуемого вещества не влияли на нормальное питание или водный баланс. При введении исследуемого химического вещества с пищей можно использовать его постоянную концентрацию в пище (ppm) или постоянный уровень дозы в пересчете на массу тела животного (например, мг/кг массы тела животного в сутки); при использовании альтернативного варианта он должен быть подробно описан. Для химического вещества, вводимого принудительно, дозу вводят ежедневно в одно и то же время, корректируя ее при необходимости для обеспечения постоянного уровня дозы в пересчете на массу тела.

6.5 Наблюдения

6.5.1 Период наблюдений должен составлять не менее 90 дней. Животные в сопутствующей группе, предназначенные для последующего наблюдения, должны содержаться в течение соответствующего периода без введения исследуемого вещества с целью выявления персистенции (сохранения) или восстановления после токсического воздействия.

6.5.2 Общие клинические наблюдения следует проводить не реже одного раза в день, желательно в одно и то же время, с учетом пикового периода предполагаемого воздействия после введения дозы вещества. Клиническое состояние животных должно быть зарегистрировано. Не реже двух раз в сутки, обычно в начале и в конце каждого дня, всех животных проверяют на наличие признаков клинических проявлений и смертности.

________________

См. [19].

6.5.3 Не менее чем один раз до первого воздействия (для внутригрупповых сравнений) и один раз в неделю после этого проводят тщательные клинические наблюдения всех животных. Такие наблюдения следует проводить вне жилой клетки, желательно на стандартной площадке, и каждый раз в одно и то же время. Результаты наблюдений должны быть подробно задокументированы, желательно с использованием системы оценок в баллах, четко определенной испытательной лабораторией. Должны быть приняты меры, обеспечивающие минимальные отклонения в условиях наблюдений. Отмеченные признаки должны включать (но не ограничиваться ими) изменения кожи, шерстного покрова, глаз, слизистых оболочек, появление выделений или экскреции и вегетативную активность (например, слезотечение, пилоэрекция, изменение размера зрачков, необычный характер дыхания). Изменения походки, позы и реакции на обращение, а также наличие клонических или тонических движений, стереотипов (например, чрезмерный уход за шерстью, повторяющееся движение по кругу) или необычное поведение (например, самокалечение, хождение задом наперед) также следует регистрировать.

________________

См. [8], [19].

6.5.4 До введения исследуемого химического вещества и в конце исследования проводят офтальмологическое обследование с использованием офтальмоскопа или эквивалентного подходящего оборудования, желательно у всех животных, но обязательно в группах с высокой дозой и в контрольной группе. При обнаружении изменений в глазах должны быть обследованы все животные.

6.5.5 К концу периода воздействия и не ранее чем на 11-й неделе проводят оценку сенсорной реактивности на раздражители разных типов (например, слуховые, визуальные и проприоцептивные раздражители) , оценку силы схвата и двигательной активности. Более подробное описание используемых процедур приведено в соответствующих ссылочных документах. Тем не менее могут быть использованы альтернативные процедуры, отличные от приведенных в ссылочных документах.

________________

См. [5].

См. [9], [10], [11].

См. [12].

См. [13].