ГОСТ ISO 15553-2017 Качество воды. Выделение из воды и идентификация ооцист криптоспоридий и цист лямблий

     3 Сущность метода

3.1 Концентрирование проб воды

Выделение криптоспоридий и лямблий из воды требует применения методики, которая позволяет уменьшить объем пробы, при этом сохраняя все ооцисты и цисты. Методика концентрирования пробы воды зависит от анализируемого типа воды, объема пробы и количества взвешенных частиц в пробе. В настоящем стандарте установлены две методики концентрирования проб воды различных объемов, используя фильтрацию с помощью капсульных фильтров и элюирование с последующим низкоскоростным центрифугированием (см. 7.1). Дополнительные методы выделения ооцист и цист из малых объемов воды или очень мутных вод приведены в приложении В. Примеры эффективности различных методов приведены в приложении Е.

Таблица 1 - Мембранные фильтры/системы фильтрации, используемые для концентрирования проб воды

3.2 Очистка и дальнейшее концентрирование

После концентрирования взвешенных частиц из фильтрованных элюатов ооцисты и цисты изолируют посредством иммуномагнитного разделения (IMS) (см. 7.2). Ооцисты и цисты прикрепляют к парамагнитным гранулам, покрытым специфическими антителами, гранулы отделяют от нежелательных взвешенных частиц с использованием магнита, а затем ооцисты и цисты отделяют от гранул, используя кислоту, и нейтрализуют щелочью, прежде чем будет осуществлено иммунное окрашивание.

3.3 Выявление криптоспоридий и лямблий

После IMS организмы метят моноклональным антителом (mAb), конъюгированным с флуорохромом, как правило, флуоресцеином изотиоцианатом (FITC). Кроме того, любой ядерный материал метят красителем для нуклеиновой кислоты для облегчения идентификации (см. 7.3). Затем каждую пробу исследуют на присутствие меченых ооцист криптоспоридий и цист лямблий (Giardiа) с использованием эпифлуоресцентной микроскопии по методу дифференциально-интерференционного контраста (DIC) (см. 7.4).