ГОСТ ISO 15553-2017

     

МЕЖГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ

КАЧЕСТВО ВОДЫ

Выделение из воды и идентификация ооцист криптоспоридий и цист лямблий

Water quality. Isolation and identification of Cryptosporidium oocysts and Giardia custs from water

МКС 07.100.20

Дата введения 2024-06-01

Предисловие

Цели, основные принципы и общие правила проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены"

Сведения о стандарте

1 ПОДГОТОВЛЕН научно-производственным республиканским унитарным предприятием "Белорусский государственный институт стандартизации и сертификации" (БелГИСС) на основе собственного перевода на русский язык англоязычной версии стандарта, указанного в пункте 5

2 ВНЕСЕН Госстандартом Республики Беларусь

3 ПРИНЯТ Межгосударственнным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 20 апреля 2017 г. N 98-П)

За принятие проголосовали:

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 28 декабря 2023 г. N 1719-ст межгосударственный стандарт ГОСТ ISO 15553-2017 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июня 2024 г.

5 Настоящий стандарт идентичен международному стандарту ISO 15553:2006* Water quality - Isolation and identification of Cryptosporidium oocysts and Giardia custs from water (Качество воды. Выделение из воды и идентификация ооцист криптоспоридий и цист лямблий, ID).

________________

* Доступ к международным и зарубежным документам, упомянутым в тексте, можно получить, обратившись в Службу поддержки пользователей. - Примечание изготовителя базы данных.

Международный стандарт разработан подкомитетом SC 4 "Микробиологические методы" технического комитета по стандартизации ISO/TC 147 "Качество воды" Международной организации по стандартизации (ISO)

6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация о введении в действие (прекращении действия) настоящего стандарта и изменений к нему на территории указанных выше государств публикуется в указателях национальных стандартов, издаваемых в этих государствах, а также в сети Интернет на сайтах соответствующих национальных органов по стандартизации.

В случае пересмотра, изменения или отмены настоящего стандарта соответствующая информация будет опубликована на официальном интернет-сайте Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации в каталоге "Межгосударственные стандарты"

Введение

Криптоспоридии и лямблии - простейшие паразиты, которые могут вызвать кишечные заболевания у людей. Оба организма характеризуются способностью выживать в водной среде. Криптоспоридии, в частности, устойчивы к хлору в концентрациях, используемых при обработке питьевой воды и воды в плавательных бассейнах. Следовательно, отсутствие вегетативных бактерий как индикаторов фекального загрязнения не обязательно указывает на отсутствие ооцист криптоспоридий или цист лямблий. Методы, установленные в настоящем стандарте, могут быть использованы для определения присутствия ооцист криптоспоридий и/или цист лямблий в водных ресурсах. Методики были отобраны на основе разработанных методов и публикации данных, полученных на основе экспертной оценки. Все методики проходили дополнительный отбор, при котором была учтена сопоставимость результатов, полученных при применении различных реактивов и методов выявления организмов.

     1 Область применения

Настоящий стандарт устанавливает метод выявления и подсчета ооцист криптоспоридий и цист лямблий в воде. Метод применим для исследования поверхностных и грунтовых вод, очищенных вод, минеральных вод, вод в плавательных бассейнах, аквапарках и других местах досуга.

Метод не обеспечивает идентификацию на уровне видов, источника происхождения видов или определение жизнеспособности или инвазионной способности любой ооцисты криптоспоридий или цисты лямблий, которые могут присутствовать в воде. Методики проведения испытания предназначены для использования опытными специалистами, имеющими соответствующую квалификацию и регулярно принимающими участие в испытаниях, направленных на обеспечение безопасности воды.

Примечание - Может наблюдаться присутствие организмов, схожих с криптоспоридиями или лямблиями по структуре. Такие организмы могут быть ошибочно приняты за ооцисты или цисты. Результаты следует анализировать с осторожностью. В случае, если есть сомнения в идентификации ооцист или цист или если получен необычно высокий результат, рекомендуется предоставить предметные стекла специалистам из других лабораторий для исследования с целью подтверждения или опровержения полученных данных.

     2 Термины и определения

В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями:

2.1 криптоспоридии (Cryptosporidium): Простейшие паразиты, которые концентрируются в воде и выделяются из проб воды методами, установленными в настоящем стандарте, вступающие в реакцию со специфическими антителами к криптоспоридиям и имеющие типичные морфологические характеристики, описанные в 7.4.

Примечание - Более полное определение паразита и различных генотипов и видов содержится в приложении G.

2.2 лямблии (Giardia): Простейшие паразиты, которые концентрируются в воде и выделяются из проб воды методами, установленными в настоящем стандарте, вступающие в реакцию со специфическими антителами к лямблиям и имеющие типичные морфологические характеристики, описанные в 7.4.

Примечание - Более полное определение паразита и различных видов содержится в приложении G.

     3 Сущность метода

3.1 Концентрирование проб воды

Выделение криптоспоридий и лямблий из воды требует применения методики, которая позволяет уменьшить объем пробы, при этом сохраняя все ооцисты и цисты. Методика концентрирования пробы воды зависит от анализируемого типа воды, объема пробы и количества взвешенных частиц в пробе. В настоящем стандарте установлены две методики концентрирования проб воды различных объемов, используя фильтрацию с помощью капсульных фильтров и элюирование с последующим низкоскоростным центрифугированием (см. 7.1). Дополнительные методы выделения ооцист и цист из малых объемов воды или очень мутных вод приведены в приложении В. Примеры эффективности различных методов приведены в приложении Е.

Таблица 1 - Мембранные фильтры/системы фильтрации, используемые для концентрирования проб воды

3.2 Очистка и дальнейшее концентрирование

После концентрирования взвешенных частиц из фильтрованных элюатов ооцисты и цисты изолируют посредством иммуномагнитного разделения (IMS) (см. 7.2). Ооцисты и цисты прикрепляют к парамагнитным гранулам, покрытым специфическими антителами, гранулы отделяют от нежелательных взвешенных частиц с использованием магнита, а затем ооцисты и цисты отделяют от гранул, используя кислоту, и нейтрализуют щелочью, прежде чем будет осуществлено иммунное окрашивание.

3.3 Выявление криптоспоридий и лямблий

После IMS организмы метят моноклональным антителом (mAb), конъюгированным с флуорохромом, как правило, флуоресцеином изотиоцианатом (FITC). Кроме того, любой ядерный материал метят красителем для нуклеиновой кислоты для облегчения идентификации (см. 7.3). Затем каждую пробу исследуют на присутствие меченых ооцист криптоспоридий и цист лямблий (Giardiа) с использованием эпифлуоресцентной микроскопии по методу дифференциально-интерференционного контраста (DIC) (см. 7.4).

     4 Реактивы

4.1 Реактивы, необходимые для элюирования капсульных фильтров Pall Envirochek STD

________________

Все продукты и реактивы являются примерами подходящей продукции, имеющейся в продаже. Информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта и не является рекламой данной продукции со стороны ISO.

4.1.1 Деионизированная вода, фильтрованная по месту использования через мембранный фильтр с размером пор 0,2 мкм.

4.1.2 Очищающее вещество лаурет 12.

4.1.3 Трис-буфер, pH 7,4 (А.1.1).

4.1.4 Раствор ЭДТА концентрацией 0,5 моль/л, pH 8,0 (А.1.2).

4.1.5 Пеногаситель А.

4.1.6 Элюирующий буфер (А.1.3).

4.2 Реактивы, необходимые для элюирования капсульных фильтров Pall Envirochek HV

________________

Все продукты и реактивы являются примерами подходящей продукции, имеющейся в продаже. Информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта и не является рекламой данной продукции со стороны ISO.

4.2.1 Деионизированная вода, фильтрованная по месту использования через мембранный фильтр с размером пор 0,2 мкм.

4.2.2 Буфер предварительной обработки (А.1.4).

4.2.3 Очищающее вещество лаурет 12.

4.2.4 Трис-буфер, pH 7,4 (А.1.1).

4.2.5 Раствор ЭДТА концентрацией 0,5 моль/л, pH 8,0 (А.1.2).

4.2.6 Пеногаситель А.

4.2.7 Элюирующий буфер (А.1.3).

4.3 Реактивы, необходимые для элюирования фильтров IDEXX Filta-MAX

________________

Все продукты и реактивы являются примерами подходящей продукции, имеющейся в продаже. Информация приведена для удобства пользователей настоящего стандарта и не является рекламой данной продукции со стороны ISO.

4.3.1 Фосфатно-солевой буфер (PBS) (А.2.1).

4.3.2 Полиоксиэтилен (20) сорбитан монолаурат (твин 20)

Хранят при комнатной температуре (20±5)°C не более 1 года.

4.3.3 Элюирующий буфер (А.2.2).