ГОСТ ISO 22717-2018 Продукция парфюмерно-косметическая. Микробиология. Обнаружение Pseudomonas aeruginosa

     11.3 Пригодность метода обнаружения

11.3.1 Процедура

11.3.1.1 В пробирках, содержащих по 9 см разбавителя, готовят разведения стандартной суспензии, чтобы в конечном счете получить концентрацию, равную 100-500 КОЕ/см. Для подсчета окончательного количества жизнеспособных микроорганизмов в разведенной стандартной суспензии вносят 1 см суспензии в чашку Петри и заливают 15-20 см расплавленной агаризованной среды, которая выдерживалась на водяной бане при температуре, не превышающей 48°С. Дают среде в чашках застыть, а затем инкубируют при температуре (32,5±2,5)°С в течение 20-24 ч.

11.3.1.2 Готовят в двух повторностях исходную суспензию пробы в пробирке или колбе, соблюдая выбранные для анализа условия (не менее 1 г или 1 см испытуемой продукции и определенный объем бульона для обогащения). Если используют метод мембранной фильтрации, то фильтруют в двух повторностях не менее 1 см испытуемой продукции и переносят каждый мембранный фильтр в пробирку или колбу, содержащую бульон для обогащения в условиях, выбранных для теста.

11.3.1.3 Стерильно вносят 0,1 см разведенной стандартной суспензии (см. 11.3.1.1) микроорганизмов в одну пробирку или колбу (тест на пригодность). Перемешивают, затем инкубируют обе пробирки или колбы (тест на пригодность и контроль неконтаминированной пробы) при температуре (32,5±2,5)°С в течение 20-24 ч.

11.3.1.4 Проводят выделение для каждой пробирки или колбы (тест на пригодность и контроль неконтаминированной пробы). Используя стерильную петлю, делают высев инкубированной смеси методом истощающего штриха (при таких же условиях, как в тесте) на поверхность агаризованной среды с цетримидом, разлитой в чашки Петри (диаметром от 85 до 100 мм) в количестве приблизительно от 15 до 20 см. Инкубируют чашки при температуре (32,5±2,5)°С в течение 24-48 ч.

11.3.2 Интерпретация результатов теста на пригодность

Проверяют, что разведенная стандартная суспензия бактерий вида Pseudomonas aeruginosa (см. 11.3.1.1) содержит от 100 до 500 КОЕ/см.

Нейтрализация подтверждается и метод обнаружения является удовлетворительным, если ростовые характеристики Pseudomonas aeruginosa наблюдаются на чашке, которая использовалась в тесте на пригодность, и если отсутствует рост на контрольной чашке.

Если обнаружен рост на контрольной чашке (контаминированная продукция), нейтрализация подтверждается и метод обнаружения является удовлетворительным, если бактерии вида Pseudomonas aeruginosa выделены на чашке Петри, используемой в тесте на пригодность.

Отсутствие роста на чашках Петри, используемых в тесте на пригодность, указывает на то, что антимикробная активность все еще не нейтрализована и требуется изменение условий метода путем увеличения объема питательного бульона (при этом количество продукции остается тем же), или путем добавления большего количества инактивирующего вещества в бульон для обогащения, или путем комбинации изменений, которые позволят обеспечить рост Pseudomonas aeruginosa.

Если все еще невозможно выделить жизнеспособные культуры несмотря на введение подходящих инактивирующих веществ и значительное увеличение объема бульона, как описано выше, это указывает на малую вероятность контаминации продукции бактериями вида Pseudomonas aeruginosa.