Препараты бактериофагов должны отвечать всем требованиям безопасности и не иметь бактериальных или иных токсических загрязнений. Современные технологии изготовления фаговых препаратов предусматривают высокую степень очистки от продуктов жизнедеятельности бактерий, эндо- и экзотоксинов, продуктов фаголизиса бактериальных клеток. Подтверждением этому могут быть исследования препаратов по определению бактериальных эндотоксинов, энтеротоксинов и др. в соответствии с особенностями изучаемого препарата.
Методы очистки препаратов должны быть подробно описаны, обоснованы и включены в отчеты по результатам доклинических исследований.
Подтверждение безопасности препаратов бактериофагов включает в себя изучение токсичности (острой и хронической), местного и аллергизирующего действия.
Исследование токсичности.
Определение токсичности фаговых препаратов проводят на белых мышах массой 18-20 г, каждая группа должна включать не менее 10 животных. Необходимость проведения гистологических исследований зависит от способности бактериальных штаммов, используемых при производстве бактериофагов, к токсинообразованию.
Оценка токсичности при однократном введении.
Исследование острой токсичности проводится при однократном внутрибрюшинном введении фага в дозе, многократно превышающей максимальную разовую дозу для человека в пересчете на единицу массы тела (100-200 раз). Максимальный объем - не более 1 мл. Срок наблюдения - не менее 7 суток после введения препарата. Животные не должны терять в весе, должны отсутствовать признаки заболевания и инфильтраты в месте введения препарата. В периферической крови опытных животных после введения бактериофага должны отсутствовать значительные изменения картины крови по сравнению с данными в контрольной группе. Необходимо проведение гистологических исследований внутренних органов животных.
Оценка токсичности при многократном введении.
Изучение токсичности при многократном введении проводится при внутрибрюшинном введении фага ежедневно в течение 20 дней в дозе, максимально эквивалентной разовой дозе для человека в пересчете на единицу массы тела.
Наблюдения за животными проводят в течение всего периода введения и последующих 7 суток с ежедневной регистрацией массы тела животных, а также возможных клинических симптомов интоксикации. При исследовании периферической крови опытных животных после введения бактериофага не должны обнаруживаться значительные изменения в содержании лейкоцитов по сравнению с контрольной группой. Необходимо проведение гистологических исследований внутренних органов животных (не менее чем 5 особей) сразу после курса фаготерапии и после 7-дневного восстановительного периода/
Определение местного действия бактериофага осуществляется в случае использования препаратов внутримышечно в дозе, предлагаемой для применения. Оценку проводят на основании данных осмотра на протяжении всего срока введения препарата и последующих 7 суток.
Оценка аллергизирующих свойств.
Большинство бактериофагов при первичном применении являются нео-антигенами для организма животных и человека, т.е. заранее имеющихся против них антител в организме нет. Экспериментально показано, что при однократном приеме фильтрата фаголизата иммунный ответ на присутствие фагов в организме незначителен и не влияет на терапевтический эффект фага. Отечественными исследователями доказано, что введение очищенных фаговых препаратов в терапевтических дозах в течение 15-20 дней не стимулирует образования антифаговых антител. Вместе с тем имеются данные, что при более длительном применении фага стимуляция адаптивной иммунной системы потенциально вероятна.
Изучение аллергизирующих свойств новых препаратов бактериофагов проводится в соответствии с традиционными методами исследования препаратов МИБП по определению ГНТ и ГЗТ.
Фармакокинетика фаговых препаратов.
Бактериофаги не подвергаются какому-либо специфическому метаболизму в макроорганизме. Результаты изучения особенностей циркуляции фаговых частиц при моделировании инфекционного процесса могут использоваться в качестве дополнительных данных по исследованию нового препарата.