Об утверждении Правил проведения исследований биологических лекарственных средств Евразийского экономического союза (с изменениями на 4 июля 2023 года)

2.2. Определение эффективности

Эффективность фаговой терапии должна быть установлена на соответствующей модели экспериментальной инфекции. Изучение защитного действия фагового препарата проводится в отношении бактериального возбудителя, против которого разработан изучаемый препарат.

Экспериментальные животные.

При изучении терапевтической эффективности используются различные виды животных: белые мыши и крысы, морские свинки, кролики. На первых этапах целесообразно использование белых мышей. В исследованиях in vivo на животных подтверждается антибактериальный эффект, выявленный в исследованиях in vitro.

Модели экспериментальной инфекции.

Наиболее распространенной моделью является генерализованная инфекция (экспериментальный сепсис) белых мышей (массой 18-20 г, не менее 10 особей в каждой группе). Заражающая доза для каждого вида бактерий устанавливается в предварительных опытах.

Способы заражения - внутривенное, внутрибрюшинное, подкожное или внутримышечное (последние 2 варианта - при использовании высоковирулентных возбудителей).

Выбор других моделей экспериментальной инфекции зависит от специфики возбудителя, его тропности к тем или иным системам организма. Возможно моделирование хронической септикопиемии, пневмонии, пиелонефрита, менингита и менингоэнцефалита, других локализованных инфекционных процессов.

Порядок проведения исследования.

После выявления эффективности препарата in vivo на этапе первичного скрининга проводятся исследования терапевтической эффективности по сравнению с антибактериальными препаратами (антибиотиками) той же направленности, что и изучаемый препарат. При оптимальной дозе введения определяется связь эффективности препарата с тяжестью инфекции (при различных инфицирующих дозах - 1 LD, 2 - 4 LD, 10 LD, 100 LD и более в зависимости от возбудителя).

В зависимости от цели исследования проводится оценка:

профилактической эффективности препарата - введение препарата за 1, 3, 6, 12, 24 и 48 часов до заражения;

терапевтической эффективности препарата - введение препарата через 1, 3, 6, 12, 24 или 48 часов после заражения.

Исследования проводятся при различной кратности введения (однократно или повторно в зависимости от модели). Традиционная модель фаготерапии - внутрибрюшинное введение препарата с определенным содержанием фаговых частиц в вводимой дозе ежедневно в течение 10-12 суток. В процессе исследования определяют минимальную эффективную дозу с учетом предполагаемой терапевтической дозы для человека в перерасчете на килограмм массы.

Каждое отдельное исследование включает в себя 2 вида контроля:

контроль гибели животных без лечения;

контроль эффективности лечения (в сравнении с известным антимикробным препаратом - антибиотиком аналогичной направленности).

В качестве препарата сравнения можно использовать питательную среду, на которой приготовлен изучаемый препарат бактериофага.

Длительность наблюдения за животными зависит от особенности течения инфекции при конкретной нозологической форме.

Оценка эффективности.

Оценка эффективности препарата бактериофага проводится по следующим показателям:

сравнительная выживаемость и сроки гибели животных в контрольной и опытной группах;

динамика освобождения от возбудителя в контрольной и опытной группах (в процессе лечения и по его окончании проводят посев крови, органов с определением числа бактерий на 1 г);

клинические проявления (температура тела, изменение веса, состояние шерстяного покрова, поведенческие реакции);

клинико-лабораторные показатели (клинический анализ крови, показатели анализа спинномозговой жидкости и др.);

патоморфологические изменения органов и тканей в процессе лечения и по его окончании.

Результаты обрабатываются адекватными статистическими методами.