Методические указания по применению унифицированных методов определения чувствительности микроорганизмов к химиотерапевтическим препаратам

1.1.2. Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам методом разведения в бульоне

Принцип. Готовят серию разведения антибиотиков в питательной среде и вносят в каждое разведение антибиотика исследуемую культуру. После определенного периода инкубации отмечают наличие или отсутствие роста микробов. Метод позволяет определить минимальную концентрацию антибиотика, ингибирующую рост изучаемого микроба.

Компоненты.

1. Питательные среды: мясо-пептонный бульон или бульон на переваре Хоттингера с содержанием 120-140 мг% аминного азота, pH 7,2-7,4. Если исследуемые микроорганизмы не растут на простых средах, допускается использование специальных сред, например, бульона Мартена для дифтерийных микробов, жидкой среды Сабуро для грибков и т.п.

2. Основные растворы антибиотиков. Порошок антибиотика (желательно стандарта антибиотика) взвешивают и растворяют в стерильной дистиллированной воде так, чтобы получить определенную концентрацию антибиотика. Удобной концентрацией для основного раствора является 2000 мкг/мл или ед/мл. Некоторые антибиотики не растворяются водой в такой концентрации, для них нужен специальный растворитель. Например, эритромицин и левомицетин растворяют в минимальном количестве этилового спирта, а затем разводят стерильной дистиллированной водой. Основные растворы антибиотиков стабильны при хранении в холодильнике в течение 1 недели.

Подготовка к определению. Приготовление разведений антибиотиков. Разведение антибиотиков готовят путем разведения основного раствора антибиотика бульоном согласно представленной схеме (табл.2). Диапазон серии разведений зависит от установленных критериев чувствительности, она может быть начата и закончена на различных этапах. Пользуются отдельной пипеткой для приготовления основного раствора и его добавления к 1-й пробирке, затем отдельной пипеткой для каждой группы разведений: 2-3-4 пробирки, 5-6-7 пробирки и т.д. Полученные растворы антибиотиков разливают в стерильные пробирки по 1 мл. Для этого может быть использована одна пипетка - сначала разливают растворы более разведенные, затем более концентрированные. Можно готовить и двукратные разведения антибиотиков в бульоне в объеме 1 мл, но обязательно использовав отдельную пипетку для каждого разведения.