Принцип. Обнаружение влагалищных трихомонад в исследуемом материале из мочеполовых органов с помощью увеличения количества возбудителей выращиванием в искусственных питательных средах и идентификации живых культур.
Питательная среда*. 1) Среда СКДС: солевой раствор (хлористый натрий - 6,5 г, хлористый калий - 0,14 г, хлористый кальций - 0,12 г, бикарбонат натрия - 0,2 г, 0,5% раствор метиленового синего - 0,5 мл, дистиллированная вода - 1 л) - 100 мл, гидролизат казеина для парентерального белкового питания - 10 мл, дрожжевой аутолизат - 10 мл, сыворотка крови лошади или крупного рогатого скота без консерванта - 30 мл, 20% раствор мальтозы - 10 мл, пенициллин и стрептомицин - по 160000 ЕД.
________________
* При отсутствии гидролизата казеина рекомендуется использовать другие питательные среды: 1) среда СГДС: содержит в составе 10 мл 5% раствора гемогидролизата для культур тканей вместо гидролизата казеина, остальные ингредиенты берут в тех же количествах, как и в среде СКДС; 2) среда 199-СДС: содержит в своем составе 10 мл среды 199 или 2 мл 10-кратного концентрата среды 199 для культур тканей вместо гидролизата казеина, остальные ингредиенты берут в тех же количествах, как и в среде СКДС; 3) среда из смеси жидких стандартных кровезаменителей гидролизата казеина (8,3 мл) и раствора гидролизина (16,7 мл), 125 мл дистиллированной воды; к смеси добавляют 0,9 г хлорида натрия, по 0,15 г хлорида калия, кальция и бикарбоната натрия, 0,045 г метилтиосульфата натрия, 1,5 г мальтозы, 3,75 мг оротовой кислоты, pH среды доводят до 6,0-6,3, среду стерилизуют при 112° в течение 20 минут; после охлаждения добавляют 30 мл стерильной сыворотки крови лошади или крупного рогатого скота без консерванта, 100000 ЕД пенициллина, 100000 мкг стрептомицина, 7200 ЕД амфоглюкамина.
Приведенные в рецептах растворы в указанном объеме сливают в стерильную колбу, смешивают, доводят pH до 6,3, добавляют антибиотики из расчета 1000 ЕД каждого на 1 мл полученной смеси, вновь смешивают, разливают по 5 мл в стерильные пробирки, поверхность среды в которых заливают стерильным вазелиновым маслом (толщина слоя - 5 мм). Хранят до употребления при 4° не более двух недель.
Приготовление препаратов. При выращивании на жидких питательных средах влагалищные трихомонады дают придонный рост в виде плотного беловатого осадка, из которого пастеровской пипеткой берут материал для исследования в нативном препарате. Микроскопическое исследование культур и идентификацию следует производить на 3-5, при отрицательных результатах - 7-9, 11-17 день после посева, т.к. длительность цикла развития влагалищных трихомонад в культуре зависит от величины посевной дозы. Придонный рост наносят на предметное стекло, накрывают покровным стеклом и микроскопируют.
Микроскопия. Исследование проводят под микроскопом с естественным или искусственным освещением с объективом 40 или 90, окуляр 7 или 10.
Влагалищные трихомонады в поле зрения могут быть одиночными или большими скоплениями, активно движущиеся, при этом хорошо просматриваются движения жгутиков и ундулирующей мембраны.