Принцип. Гонококк в процессе роста вырабатывает фермент - цитохромную оксидазу, который выявляется воздействием реактива, изменяющего свой цвет в присутствии указанного фермента.
Реактив. 1% водный раствор диметилпарафенилендиамина*: 1 г указанного вещества растворяют в 100 мл дистиллированной воды, фильтруют через бумажный фильтр.
________________
* В качестве заменителя может быть использован диэтилпарафенилендиаминсульфат, парааминоэтилапилинсульфат или цветные проявители (Т-34, Т-32, ЦП-2, ЦПВ-1) в такой же концентрации.
Ход исследования. После того как выросшие в пробирках на питательной среде культуры изучены макроскопически и подозрительные на гонококки колонии (при необходимости) пересеяны на свежую питательную среду для выделения чистой культуры, из оставшихся колоний микроорганизмов необходимо сделать мазки в капле водопроводной воды для дальнейшего исследования в окраске по модифицированному способу Грама. На скошенную поверхность питательной среды с ростом бактерий наслаивают раствор оксидазного реактива пастеровской пипеткой, чтобы он, стекая по поверхности среды, смачивал все выросшие на ней колонии микроорганизмов. Пробирки оставляют при комнатной температуре и просматривают. Оксидазную реакцию считают положительной при окрашивании хотя бы одной колонии микроорганизмов и отрицательной, если через 10-15 минут смоченные раствором оксидазного реактива колонии не окрашивались. Оксидазоположительные колонии снимают петлей, делают из них мазки, которые окрашивают по модифицированному способу Грама и исследуют под микроскопом. Для выделения чистой культуры гонококка лучше производить пересев колоний, не окрашенных оксидазным реактивом, если же дифференцировать их без оксидазной реакции не представляется возможным, то пересевать окрашенную колонию необходимо в первые секунды после начала окрашивания, так как реактив, оказывая токсическое действие на гонококки, снижает их жизнеспособность. Пересев по прошествии нескольких минут после воздействия оксидазного реактива уже не дает роста гонококков.
Учет результатов исследования. Гонококковые колонии уже через несколько секунд после наслоения раствора реактива окрашиваются вначале в розовый, затем в красный, а через несколько минут в черный цвет. Они окрашиваются даже в тех случаях, когда гонококки находятся под колониями других микроорганизмов. Оксидазоотрицательные микроорганизмы не окрашиваются, сохраняя цвет своего пигмента или оставаясь прозрачными. Гонококковые колонии всегда оксидазоположительные, но оксидазоположительными могут быть и другие бактерии, которые в процессе своей жизнедеятельности выделяют цитохромную оксидазу; поэтому оксидазоположительные колонии микроорганизмов обязательно нужно исследовать в окраске по модифицированному способу Грама.