Об унификации микробиологических (бактериологических) методов исследования, применяемых в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений (не действует на территории РФ на основании приказа Минздрава России от 24.08.2020 N 889)

Таблица 13

     

Основные признаки межродовой дифференциации семейства Enterobacteriaceae

(Родовые группы даны в соответствии с Берги, 1980)

+ - 90% и более положительных реакций.

(+) - замедленно положительные реакции (через двое и более суток).

- - 90% и более отрицательных реакций.

+, - - чаще положительные, реже отрицательные реакции.

Х - различные биохимические реакции.

В таблице даны свойства типичных штаммов.

Второй день завершают посевами на среды минимального дифференцирующего ряда и скошенный питательный агар (таблица 13).

Посев в среду с мочевиной по Кристенсену или по Преусу не повторяют, если он был сделан на этапе отбора колоний.

Для большей четкости и надежности результатов полезно учитывать следующее:

а) при "скашивании" среды Кристенсена с мочевиной высота столбика должна превышать длину скошенной части. Посев делают штрихом по скошенной части. С культурами протеев (кроме P. inconstans) положительные результаты могут быть получены в течение дня, но окончательный учет производят через 18-24 часа.

б) для определения индола используют индикаторные бумажки, пропитанные реактивом Эрлиха или Ковача;

в) для воспроизведения тестов с метиловым красным и Фогеса-Проскауэра кроме классического метода с жидкой средой Кларка можно использовать полужидкую среду Кларка, что позволит в этой же пробирке определить подвижность изучаемого микроба;

г) при испытании подвижности культуры в полужидком агаре следует делать укол петлей на глубину 1-1,5 см, а не до дна пробирки;

д) при выделении лактозоотрицательных, безгазовых культур, не образующих сероводород и не гидролизующих мочевину, к числу дополнительных родовых тестов следует добавить ацетатный (или цитратный по Кристенсену) для более надежной дифференциации шигелл (не растущих на ацетатной среде и цитратной среде Кристенсена) от эшерихий, вырастающих обычно на первые, иногда вторые сутки.

Третий день.

Проводится регистрация результатов испытываемой культуры в минимальном ряду тестов. В соответствии с таблицей 13 делают заключение о родовой принадлежности выделенной культуры.

В клинической микробиологии идентификация энтеробактерий завершается обычно определением рода и вида выделенной культуры и лишь при наличии эпидемиологических показаний, и иногда для утверждения этиологической значимости, она дополняется определением биоваров (по старой терминологии - биотипов), а в некоторых родовых группах условно-патогенных энтеробактерий - определением сероваров (по старому - серотипов) (Escherichia, Citrobacter, P. vulgaris, P. mirabilis). Определение рода и вида энтеробактерий основывается на изучении совокупности биохимических тестов. Попытки пренебрегать определением минимального ряда родовых биохимических тестов неизбежно влекут за собой ошибочную диагностику, исключают возможность выявления всего многообразия условно-патогенных энтеробактерий, связываемых в настоящее время с патологией у человека.

Определение по минимальному набору тестов родов Escherichia, Edwardsiella, Hafnia, Serratia (включающих, согласно "Краткому определителю бактерий Берги", по одному виду) позволяет одновременно делать заключение о выделении соответствующих видов E. coli, E. tarda, H. alvei или S. marcescens.

Наличие фуксиново-красного или розового пигмента может подтверждать принадлежность выделенной культуры к виду S. marcescens, но отсутствие пигмента не исключает такого заключения.

Если по предварительным данным не исключена принадлежность культуры к родам Hafnia или Yersinia, целесообразно сделать посев в 2 пробирки со средой Кларка, одну из которых оставить до следующего дня при комнатной температуре, а другую - при 37°C, с последующим воспроизведением тестов с метиловым красным и Фогеса-Проскауэра (см. табл.13). Дополнительным признаком в пользу выделения Hafnia может быть особенно бурное (в сравнении с другими энтеробактериями) выделение кислорода в пробе с 3% HO на предметном стекле (тест на каталазу).

На III день идентификации культуры, отнесенные по данным учета минимального ряда к родам Salmonella, Citrobacter, Klebsiella, Enterobacter, Proteus, Yersinia, подвергают дальнейшему изучению с целью определения вида (подрода).

При внутриродовой дифференциации требуются различные наборы биохимических тестов для разных родов. Соответствующие сведения приведены в таблице 14.