На предметное стекло или тонкие стеклянные пластины наливают 1% расплавленный агар, приготовленный на 0,85% растворе хлорида натрия так, чтобы толщина его слоя не превышала 2 мм.
В застывшем прозрачном агаре при помощи трафарета и металлической полой трубочки вырезают контуры лунок диаметром 4 мм, агар из которых отсасывают при помощи капилляра пастеровской пипетки.
Одну лунку наносят в центре и 6 лунок - по радиусам на равном расстоянии от центра. Расстояние между краями центральной лунки и периферическими лунками должно составлять 3 мм.
Центральную лунку заполняют диагностической сывороткой к стрептококку группы A, концентрированную в 2,5 раза. Для этого к содержимому ампулы (0,5 мл высушенной сыворотки) добавляют 0,2 мл дистиллированной воды и оставляют на 5 минут при комнатной температуре для полного растворения сыворотки.
В периферические лунки вносят солянокислые экстракты, приготовленные из исследуемых культур стрептококка. Одна из периферических лунок служит для постановки контроля. Ее заполняют солянокислым экстрактом, содержащим полисахарид стрептококка гр.A, который в качестве эталона прилагается в лиофилизированном виде к каждой коробке диагностической стрептококковой сыворотки группы A. После заполнения лунок стекла с агаром помещают во влажную камеру (на сетку эксикатора с водой) и оставляют при комнатной температуре. Просмотр пластин производят через 2-3 часа и окончательно - через 24 часа от момента постановки реакции. Перед учетом реакции пластины с агаром погружают на 20 минут в 10% раствор хлорида натрия для устранения неспецифической реакции с тейхоевой кислотой, которая может находиться в солянокислом экстракте исследуемого штамма стрептококка. Экстракты, содержащие полисахаридные антигены стрептококка группы A, образуют с соответствующими антителами диагностической сыворотки тонкие, молочно-белого цвета линии преципитата, расположенные между центральной и соответствующей антигену стрептококка группы A перефирической лункой.