Об унификации микробиологических (бактериологических) методов исследования, применяемых в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений (не действует на территории РФ на основании приказа Минздрава России от 24.08.2020 N 889)

Приготовление группоспецифических антигенов

а) Колонии стрептококков, подлежащие исследованию, засевают во флаконы с 50 мл питательного бульона.

б) Суточную бульонную культуру стрептококков, выращенную на питательном бульоне, отмывают большими объемами 0,85% раствора хлорида натрия, применяя для этой цели центрифугирование в течение 30 минут при 3 тыс.об./минуту.

К отмытому осадку микробных тел добавляют 0,06 моль/л соляную кислоту, приготовленную на 0,85% растворе хлорида натрия, из расчета: 0,5 мл раствора на 10 микробных клеток (число микробных клеток определяют по оптическому стандарту мутности).

Приготовленную в соляной кислоте взвесь периодически встряхивают, кипятят 15 минут (от момента закипания) в водяной бане. После кипячения охлаждают и центрифугируют для отделения экстракта от микробной массы. Доводят pH экстракта до 7,0, добавляя в него 1 моль/л раствор едкого натра.

В качестве индикатора используют 0,01 мл 0,04% раствора бромтимолового синего. Во время нейтрализации экстракт из соломенно-желтого становится оливково-зеленым. Образующийся при добавлении щелочи осадок удаляют центрифугированием. Готовые экстракты хранят в холодильнике.